全 文 ：·!· 中国药业 !#$% &%’(%)*+,#)%-.
!#年第 $%卷第 !期
表 # 因素水平表
水平
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乌蕨总黄酮提取工艺研究
张春椿1熊耀康1顾芳芳1黑秀明1张 龙
（浙江中医药大学，浙江 杭州 $#,,($）
摘要：目的 筛选乌蕨中总黄酮的最佳提取工艺。方法 采用正交试验设计，考察乙醇浓度、溶剂倍数、提取时间对总黄酮提取率的影响。采
用分光光度法测定总黄酮的含量，并与水煎法、乙醇温浸法比较。结果 乌蕨的乙醇回流提取法效果最好。结论 乌蕨中总黄酮提取的最佳
工艺条件为加 #(倍量 ’(&的乙醇，回流提取 次，每次 # .。
关键词：乌蕨；总黄酮；正交设计；提取工艺
中图分类号：!#$%& ’()(* +% 文献标识码：, 文章编号：%--$ . #/0%（(--)）-( . --#( . -(
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乌蕨 G>3$,;,4# (’8#$’4 F J/ I -.;>D/ 为鳞始蕨科植物乌蕨的
全草，又名野鸡尾、金花草、土黄连、中华金粉蕨，具有清热、解毒、
利尿、退黄止血的功效 U # V。现代药理试验研究表明，乌蕨有保肝、抗
炎、止血、抗菌作用，临床上用于治疗慢性肾功能衰竭、下肢顽固性
溃疡，其主要有效成分是黄酮类化合物 U V。近年来1随着天然药物化
学、药理研究的不断深入及其分析手段突飞猛进，黄酮类化合物在
医学上被用于预防血液类疾病及治疗冠状动脉硬化等疾病，它可
清除体内自由基延缓衰老和抑制肿瘤，防护紫外线损伤等 U $ V。药用
蕨类植物中含有大量的天然黄酮类化合物，如何高效地进行提取，
也越来越受到国内外学者的重视 U ! V。因此对乌蕨总黄酮提取工艺的
研究很有必要。
% 仪器与试药
H%##, 型电子天平 F上海天平仪器厂 I；)(# Q GW 型紫外分光
光度计（惠普上海分析仪器有限公司）；容量百分率酒精计（浙江余
姚比重计厂）；HM#, 型微型植物试样粉碎机（河北省黄骅市齐家科
学仪器厂）。乌蕨药材 U ,,( 年 $ 月采于衢州郊区，由本校药学院资
源鉴定教研室姚振生教授鉴定为乌蕨 G>3$,;,4# (’8#$’4 F J/ I
-.;>D/，试验用其全草，按传统方法加工干燥后粉碎，备用 V；芦丁标
准品 F批号为 ,*, Q X,,，中国药品生物制品检定所）；其他试剂均
为分析纯。
( 方法与结果
! # 因素水平考察
根据单因
素考察结果、
文献及联系生
产实际，认为
总黄酮成分提
取与乙醇浓度（因素 %）、溶剂倍数（因素 +）及提取时间（因素 -）$
个因素有关 U ( V，故选择其作为考察因素，每个因素选择 $ 个水平，用
JX F$! I正交表进行试验设计、优选 U ’ V，具体见表 #。
洗脱率
（&）
洗脱剂
表 不同洗脱液样品中雷公藤内酯醇含量
峰面积
原液
X(&乙醇
丙酮
乙酸乙酯
乙醚
氯仿
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HGI F& I
含量（!D Y D）
母液与水洗液色谱中均无雷公藤内酯醇斑点出现，不同浓度的乙
醇洗液中均出现雷公藤内酯醇斑点，且乙醇浓度越低，所需洗脱时
间越长。
0 讨论
$ # 洗脱液可使用乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，应根据吸附力强弱
选用不同的洗脱剂及浓度。对于非极性大孔树脂，洗脱剂极性越
小，洗脱能力越强；对于中性树脂和极性较大的化合物，则用极性
较大的溶剂洗脱较为合适。实际工作中，乙醇、丙酮应用较多。
$ ! 试验结果显示：洗脱液颜色深浅依次为 X(&乙醇液 Z丙酮
液 Z乙酸乙酯液 Z乙醚液 Z氯仿液。颜色越深，洗下的杂质越多。
洗脱时间以 X(&乙醇最短，氯仿其次，雷公藤内酯醇易在较短的时
间内被洗脱；丙酮、乙酸乙酯、乙醚洗脱时间较长，雷公藤内酯醇难
以在短时间内被洗脱，且洗脱剂极性越小洗脱所用的时间越长。
$ $ 雷公藤内酯醇洗脱率以 X(&乙醇为最高，其次为氯仿。虽然
氯仿洗脱率较高，并且洗脱液中所含杂质也较 X(&乙醇为少，但考
虑到溶剂残留及实际操作中的毒副作用与回收方便，确定以 X(&
乙醇作为雷公藤内酯醇的洗脱剂。
参考文献：
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中雷公藤甲素含量 U [ V / 色谱1 #XX*1 #’ F! I S $(’ Q $()/
（收稿日期：(--+ . -0 . %-；修回日期：(--+ . -+ . -$）
制剂技术
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样品含量 #$% &
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表 ) 总黄酮加样回收试验结果（% 1 ,）
方差来源
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偏差平方和
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自由度
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显著性
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表 ! 方差分析结果
试验号
因素
表 6- #! &正交试验方案与结果 # % 1 , &
总黄酮
含量 #$% 7 % &
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最优水平
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! ! 样品提取
称取乌蕨粗粉 ,* ( %，置平底烧瓶中，按正交试验表加入一定
浓度、一定体积的乙醇，在 /(9恒温水浴中回流提取一定时间，过
滤后，药渣在相同条件下再提取一次滤液减压回收乙醇至无乙醇
味，再用 ,(0乙醇定容至 ,( $6，摇匀，即为样品液，备用。
! # 总黄酮含量测定
标准曲线制备 :/ ; - <：精密称取于 ’)(9干燥至恒重的芦丁对照品
-* / $%，加 ,(0乙醇溶解，转入 ,( $6量瓶中，用 ,(0乙醇稀释至
刻度，摇匀，即得质量浓度为 (* ’-. $% 7 $6 的对照品溶液。精密
吸对照品溶液 (，’* (，)* (，* (，!* (，,* (，.* ( $6，分别置 ), $6量
瓶中，加 ,(0乙醇至 . $6，加 ,0 =>=?) 液 ’* ( $6，放置 . $@A，加
’(0 2B # =? & 试液’* ( $6，放置 . $@A，加 ’(0 =>?C 试液 ’( $6，
加 ,(0乙醇至刻度，摇匀，放置 ’, $@A，以相应试剂作空白D于 !-( A$
波长处测定吸光度。以质量浓度 # ! &与吸光度 # ( &进行线性回归，得
回归方程为 ( 1 ’/* -!. / ! ; (* (() ’，) 1 (* --- /。结果表明芦丁
质量浓度在 (* ’-. E ’* ’+. $%范围内与吸光度线性关系良好。
精密度试验 :/ <：按拟订的含量测定方法，对同一样品液进行多次
测定。结果总黄酮平均含量为 !.* ’( $% 7 %D #$为 (* +0 # % 1 .&。
重现性试验：按拟订的含量测定方法，对 . 份平行制备的样品
液进行测定。结果总黄酮平均含量为 !.* (+ $% 7 %D #$ 为 ’* ()0
# % 1 . &。
加样回收试验 : + ; / < F称取 , 份同一批粉碎的乌蕨 粗粉 )* , %，
分别精密加入 ’(( $% 芦丁对照品，按样品溶液制备法制备，并照
标准曲线制备方法测定，计算其回收率。结果见表 )。
样品含量测定 :+ ; / <：精密吸取各样品液 (* ) $6（, 份），置 ), $6
量瓶中，其余操作按标准曲线制备项下进行，测定吸光度，由回归
方程计算总黄酮含量。
! $ 正交试验结果
结果见表 及表 !。
! % 验证试验
按最佳提取工艺 2’3’4) 进行验证试验，重复 , 次。结果总黄酮
含量分别为 !.* -(，!.* -.，!+* (’，!.* -,，!.* - $% 7 %。
! & 不同提取方法效果比较 ’( )
水煎法提取F称取乌蕨粗粉 ,* ( %，加足量蒸馏水浸泡 ) G后D煮
沸 (* , GD过滤D共提取 )次D合并滤液D再用 ,(0乙醇定容至 ,( $6D
吸取 (* ) $6（, 份）滤液，同上法测定总黄酮含量。温浸法提取 F称
取乌蕨粗粉 ,* ( %浸 ) 次D每次加入 .,0乙醇 ),( $6温浸 GD温
度 !(9 D合并两次滤液D减压回收乙醇至无乙醇味D再用 ,(0乙醇
定容至 ,( $6D 吸取 (* ) $6（, 份）滤液，同上法测定总黄酮含量。
结果回流法、温浸法、水煎法提取的样品中总黄酮量分别为 !’* ，
)’* ，)(* ’ $% 7 %。
! 讨论
# * 从表 直观分析结果可知，对提取工艺影响因素的大小顺序
为 2 H 4 H 3。由方差分析结果可知，乙醇浓度（2）、溶剂倍数（3）及
提取时间（4）有显著性差异。乌蕨总黄酮的提取工艺优选方案为
2’3’4)，即最终确定乌蕨的提取工艺为加乌蕨粗粉的 ’, 倍量 .,0
乙醇，在 /(9恒温水浴锅中回流提取两次，每次 ’ G。
# ! 关于中药总黄酮提取工艺的报道较多，其中乙醇浓度影响较
大。一般认为乙醇浓度增高有利于总黄酮的提取，但提取乌蕨总黄
酮时采用 .,0乙醇回流提取最佳，可能是由于黄酮苷含量较高所
致。
# # 从不同提取方法结果比较可知D乙醇回流法提取总黄酮含量
大大高于水煎法、温浸法，说明乙醇回流提取法效果最好。
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（收稿日期：##$ % #& % #’；修回日期：##$ % #( % #)）
制剂技术
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