全 文 ：第 26 卷 第 1期
2004 年 3 月 　　　　　　　
湘潭师范学院学报(自然科学版)
Journal of Xiangtan Normal University(Natural Science Edition)　　　 　　　
Vol.26 No.1
Mar.2004
庐山石韦总黄酮的提取工艺初探①
易　俗 , 王瑞兰 , 谭新中 , 梅群英
(湖南科技大学生命科学学院 ,湖南 湘潭 411201)
摘　要:分别采用微波提取法 、碱液提取法 、60%丙酮提取法 、55%乙醇提取法提取庐山石韦中的黄酮类化合物 ,并以芦
丁为标准品 ,测定各提取物中的总黄酮含量 , 并比较它们的黄酮得率和含量。结果表明 , 60%丙酮提取法 、55%乙醇提取法
明显优于碱液提取法和微波提取法 ,而且 55%乙醇为提取溶剂时效果最佳。
关键词:庐山石韦;黄酮;浸提法
中图分类号:Q946　　　文献标识码:A　　　文章编号:1671-0231(2004)01-0076-03
庐山石韦(Pyrrosia sheareri(Bak.)Ching),又名大石韦 、光板石韦 ,是水龙骨科石韦属植物 。分布于长
江以南各省区 ,生石上或树干上。全草药用 ,清热 、利尿 、通淋[ 1] 。自从意外发现北京石韦(Pyrrogia davidii
(Gies.)Ching)中存在黄酮类化合物 ,而且是相当进化的化学特征后 ,对石韦黄酮的研究正处于进一步的加
强中[ 2] 。研究表明 ,黄酮类化合物中芒果甙和异芒果甙系石韦属植物的特征性成分 ,且为石韦属植物抗气
管炎作用的活性成分 。庐山石韦中含芒果甙和异芒果甙较多 ,在 0.3%以上[ 3] 。但对庐山石韦黄酮的提
取研究未见相关报道 。黄酮类化合物具有多种生理活性 ,如:具有抗过敏 、降血压 、抗炎 、抗菌 、抗突变 、抗
溃疡 、抗病毒 、保肝和降血脂等活性[ 4] ;还对毛细血管有收缩作用 ,能减低血管的通透性和脆弱性[ 5] 。所以
对石韦黄酮的研究具有重要的意义 。
本文采用不同的提取方法从庐山石韦中提取黄酮类化合物 ,以期为优化石韦黄酮的提取条件提供科
学依据。
1　材料与方法
1.1　材料
芦丁(生化试剂 ,上海生化试剂二厂);其余试剂均为分析纯 。庐山石韦购自湘潭药材市场 ,洗净干燥 ,
用粉碎机粉碎 ,放入干燥箱中备用 。
1.2　方法
1.2.1　庐山石韦黄酮的提取
(1)微波提取法[ 6]
称取石韦粉 50 g ,用石油醚浸泡过夜脱脂 、去色素后 ,将其风干 ,再按料液比 1∶30加 dH2O ,放入微波
炉中用微波处理 ,微波作用功率为中档 ,时间 30 min ,再放入 60 ℃左右的水浴锅中浸提 1 h ,过滤 ,滤渣洗
两次 ,合并滤液 ,蒸发浓缩 ,浸膏真空干燥(50 ℃),粉碎后得黄酮粗品。
(2)碱液提取法[ 7]
称取石韦粉 100 g ,用石油醚浸泡过夜脱脂 、去色素后 ,将其风干 ,再按料液比为 1∶10加 dH2O ,用稀氢
氧化钠溶液调 pH 值为8 ～ 9 ,浸泡90min ,过滤取上清液 ,滤渣重复提取 2次 ,合并滤液 ,然后用稀盐酸调节
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① 收稿日期:2003-09-09
基金项目:湖南省教育厅资助项目(02C459)
作者简介:易俗(1965-),男 ,湖南洪江人 ,副教授,硕士 ,研究方向:植物生理和植物化学.
pH值为 4 ～ 5 ,静置过夜 ,过滤 ,沉淀干燥 ,粉碎 ,得黄酮粗品。
(3)60%丙酮提取法[ 8]
称取石韦粉 100 g ,用 60%丙酮按料液比为 1∶8浸泡过夜 ,然后在 50 ～ 60℃加热 5 ～ 6 h ,并不时搅拌 ,
趁热过滤 ,重复提取 2次 ,滤渣用提取液洗两次 ,合并滤液 ,水相用石油醚脱脂 、去色素后 ,蒸发浓缩 ,浸膏
真空干燥(50℃),粉碎成粉末 ,得黄酮粗品。
(4)55%乙醇提取法
称取石韦粉 100 g ,用石油醚浸泡过夜脱脂 、去色素后 ,将其风干 ,再按料液比为 1∶20加55%的乙醇溶
液 ,放置于 80 ℃恒温水浴锅中浸提 5 h ,并不时搅拌 ,趁热过滤 ,重复提取 2次 ,滤渣用提取液洗两次 ,合并
滤液 ,滤液减压浓缩并回收乙醇 ,得浸膏 。浸膏再真空干燥(60 ℃),粉碎 ,得黄酮粗品 。
1.2.2　石韦提取物中黄酮类含量的测定[ 9]
(1)芦丁标准应用液配制
精密称取在 120 ℃下干燥恒重的芦丁对照品0.038 0 g ,用 30%乙醇溶解并定容至 250 ml ,摇匀得浓度
为0.152 g/L标准应用液。
(2)标准曲线的制备
分别取上述芦丁标准溶液 1.0ml , 2.0ml , 4.0 ml , 6.0 ml , 8.0 ml于5只25ml容量瓶中 ,用30%乙醇
补充至12.5 ml ,加入0.7 ml 5%亚硝酸钠摇匀 ,放置 5 min后加入 0.7 ml 10%三氯化铝 ,6 min后加入 5 ml
1 mol /L氢氧化钠 ,混匀 ,用 30%乙醇稀释至刻度 ,10 min后于 510 nm处比色测定 ,试剂为空白参比 ,作标
准曲线。结果见表 1。
表 1　浓度与吸光度
序号 1 2 3 4 5
标准品浓度(mg/ L) 6.08 12.16 24.32 36.48 48.64
吸光度 0.029 0.060 0.122 0.185 0.232
以浓度对吸光度作标准曲线 ,用最小二乘法作线性回归 ,得芦丁浓度 C(g/L)与吸光度 A 的关系:C=
33.908 9A-0.2954 , r=0.999 0
(3)样品溶液的制备及测定
精密称取所得黄酮粗品各 0.008 3 g ,分别用 30%乙醇溶解定容至25 ml ,摇匀。分别精密量取 4.0 ml ,
于3只 25 ml容量瓶中 ,按标准曲线项下自“用 30%乙醇补至……” ,依法操作 ,测吸光度。由回归方程计
算黄酮含量。结果见表 2。
2　结果与分析
由表 2各种不同提取方法的结果比较 ,可以看出:碱液提取法的总黄酮得率较微波提取法 、60%丙酮
提取法 、55%乙醇提取法低 ,为 0.16%,可能是提取时所用碱度和环境温度过高 ,造成黄酮类化合物母核
发生裂解 。
微波提取法的总黄酮得率较高 ,为 3.05%,但在室温下易霉变 ,可能是由于用极性大的水作溶媒 ,易
把蛋白质 、糖类等易溶于水的成分浸出来 ,而且降低了微溶于水的黄酮 、黄酮醇等成分的浸出 。所以在提
取后应注意低温保存 。
60%的丙酮和 55%的乙醇提取法的黄酮得率均高 ,分别为 4.79%和 5.91%,均是理想的提取方法 。
但丙酮价格相对较贵 ,且对人体具有毒性 ,所以 55%乙醇提取法更适用于庐山石韦总黄酮的提取。
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表 2　不同提取方法的结果比较
提取方法 粗提物重量(g) 提取率(%) 粗提物中总黄酮(%) 总黄酮得率(%)
微波提取法 5.618 7 11.24 31.14 3.05
碱液提取法 1.365 9 1.37 11.36 0.16
60%丙酮提取法 11.510 9 11.5 41.63 4.79
55%乙醇提取法 15.497 4 15.50 38.13 5.91
参考文献:
[ 1] 中国科学院植物研究所.中国高等植物图鉴(第一册)[ M] .北京:科学出版社 , 1983.
[ 2] 周铜水.蕨类植物的黄酮类成分及其系统意义[ J] .武汉植物学研究 , 1989 , 7(4):377-389.
[ 3] 陈孝泉.植物化学分类学[ M] .北京:高等教育出版社 , 1990.
[ 4] Parellade J , GuineaM.Flavonoid Inhibitors of Trypsin and Leucine Aminopeptidase:A proposed mathematical model for IC50 Estimation
[ J] .J Nat Prod , 1995 , 58(6):823-829.
[ 5] (日)刈米达夫.植物化学[ M] .杨本文.北京:科学出版社 , 1985.
[ 6] 周谨 ,金美芳.微波提取银杏黄酮苷的方法研究[ J] .天然产物研究与开发 , 2001 , 14(1):42-47.
[ 7] 杨洋 ,韦小英.柚皮黄酮类化合物提取方法和抗氧化性的研究[ J] .食品与发酵工业 , 2002 , 28(6):9-11.
[ 8] 庄向平 ,虞杏英 , 杨更生 ,等.银杏叶中黄酮含量的测定和提取方法[ J] .中草药 , 1992 , 23(2):122-124.
[ 9] 许钢 ,张虹 , 胡剑.竹叶中黄酮提取方法的研究[ J] .分析化学研究简报 , 2000 , 28(7):857-859.
On extraction methods of total
flavonoids in Pyrrosia sheareri (Bak.)Ching
YI Su ,WANG Rui-lan ,TAN Xin-zhong ,MEI Qun-ying
(School of Life S cience , Hunan University of Science and Technology , Xiangtan 411201, China)
Abstract:The total flavonoids in Pyrrogia shearcri(Bak.)Ching has been Extracted with microwave treatment ,
alkali liquor ,60%acetone ,55%enthanol.The rutin was used as a standard compound and the total flavones were de-
termined.The extracting techniques have been analyzed by comparing their ratio and content of flavonoids.The results
showed that using 60% acetone or 55% alcohol as extraction solvent could get much higher extraction rate than using
water and using alkali , and the extracting with 55% alcohol was the optimum extractive method.
Key words:Pyrrogia shearcri(Bak.)Ching;flavonoids;extraction methods
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