全 文 ：［收稿日期］ 20140227(013)
［第一作者］ 张琳琳，在读硕士，从事中药质量分析研究，Tel:18810599940，E-mail:amazing1212@ 163. com
［通讯作者］ * 刘振丽，博士，研究员，博士生导师，从事中药药效物质基础和质量标准研究，Tel:010-64014411-2503，E-mail:zhenli_liu@
sina． com
HPLC同时测定白花丹参中丹参酮ⅡA、
隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和二氢丹参酮Ⅰ的含量
张琳琳1，王淳2，宋志前2，杜智勇2，宁张弛3，董运茁2，刘振丽2*
(1. 浙江中医药大学 附属第一医院，杭州 310003;
2. 中国中医科学院 中医基础理论研究所，北京 100700;
3. 北京中医药大学 中药学院，北京 100102)
［摘要］ 目的:建立同时测定白花丹参中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ含量的方法。方法:从白花丹
参产地山东采集了 10 个批次白花丹参，采用 HPLC测定 4 种主要丹参酮成分丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ
含量。色谱条件:Zorbax Extend-C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 2%乙酸水(57∶ 43) ，流速 1. 0 mL·min
－1，
检测波长 270 nm，柱温 30 ℃。结果:丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ分别在 0. 138 ～ 2. 76(r = 0. 999 9) ，0. 024 8 ～
0. 496(r = 0. 999 9) ，0. 096 ～ 1. 92(r = 0. 999 9)和 0. 035 ～ 0. 70 μg(r = 0. 999 9)线性关系良好。加样回收率分别为 100. 06%，
99. 60%，99. 91%，100. 06%。丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ含量范围分别是 2. 677 ～ 7. 150，0. 320 ～ 1. 747，
0. 916 ～ 5. 935，0. 132 ～ 2. 601 mg·g －1。结论:该法简便、准确、分离度好，能同时测定白花丹参中 4 种有效成分的含量。
［关键词］ 白花丹参;高效液相色谱;丹参酮ⅡA;丹参酮Ⅰ;隐丹参酮;二氢丹参酮Ⅰ
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)06-0062-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015060062
Simultaneous Determination of Tanshinone ⅡA，Tanshinone Ⅰ，Cryptotanshinone and Dihydrotanshinone
Ⅰ in Salviae Albae Ｒadix by HPLC ZHANG Lin-lin1，WANG Chun1，SONG Zhi-qian1，DU Zhi-yong1，NING
Zhang-chi2，DONG Yun-zhuo1，LIU Zhen-li* (1. First Affiliated Hospital Medical College，Zhejiang University，
Hangzhou 310003，China;2. Institute of Basic Theory，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing
100700，China;3. School of Material Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
［Abstract］ Objective:To establish the method for simultaneous determination of tanshinone ⅡA，
tanshinone I，cryptotanshinone and dihydrotanshinone I in Salviae Albae Ｒadix by HPLC． Method:Each of ten
batches of Salviae Albae Ｒadix were collected from the same place-Shandong province． A simple and effective high-
performance liquid chromatographic (HPLC)method has been developed for simultaneous quantification of four
main diterpenes (tanshinone IIA，tanshinone I，cryptotanshinone，dihydrotanshinone I)in Salviae Albae Ｒadix．
Chromatography was performed on a (4. 6 mm × 150 mm，5 μm)particle size，extend-C18 column． The mobile
phase was a linear gradient prepared from 0. 2% aqueous formic acid and acetonitrile (43∶ 57)at a flow-rate of 1. 0
mL·min －1 ． Detection was accomplished at 270 nm and column temperature was set at 30 ℃ ． Ｒesult:The
contents of tanshinone IIA，tanshinone I，cryptotanshinone，dihydrotanshinone I in Salviae Albae Ｒadix were
between 2. 677-7. 150，0. 320-1. 747，0. 916-5. 935，0. 132-2. 601 mg·g －1，repectively． The average recovery
was 100. 06%，99. 60%，99. 91%，100. 06%，repectively． Conclusion:The developed method is simple，
accurate and good separation，which is suitable for the quality control of tanshinone ⅡA， tanshinone I，
cryptotanshinone and dihydrotanshinone I in Salviae Albae Ｒadix．
［Key words］ Salviae Albae Ｒadix; HPLC; identification; tanshinone ⅡA; tanshinone I;
cryptotanshinone;dihydrotanshinone I
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白花丹参为紫花丹参的白花变种［1］。白花丹
参除具有紫花丹参的作用和用途外，对治疗血栓闭
塞性脉管炎具有独特疗效［2］。目前白花丹参主要
在山东省大量种植，白花丹参价格高于紫花丹参。
白花丹参的主要成分为丹酚酸类和丹参酮类成
分［3-4］。有文献报道［5］白花丹参中丹参酮ⅡA 的含
量显著高于紫花丹参。有关紫花丹参中丹参酮类成
分含量研究较多［6-7］，但白花丹参中只有丹参酮ⅡA
含量测定报道，未见其他 3 种丹参酮类含量测定报
道。本文同时测定了从产地山东采集 10 个批次的
白花丹参中活性成分丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮
Ⅰ及二氢丹参酮Ⅰ含量，可用于白花丹参药材的质
量评价。
1 材料
1200 SL 系列高分离度快速液相色谱仪(包括
G1322A脱气机，G1312B SL 型二元泵，G1367C SL
自动进样器，G1315CDAD SL 检测器，G1316B SL 恒
温箱，HP化学工作站，美国安捷伦公司) ，CP 225D
型电子天平(德国赛多利斯公司)。
丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ对照品(批号
分 别 为 110766-200518，110852-200806，110867-
200406，购自中国食品药品检定研究院) ，二氢丹参
酮Ⅰ对照品(上海田源生物技术公司，纯度 ＞ 98%，
批号 121220) ;白花丹参样品采于山东省，各样品在
花期通过花的颜色确定，然后在采收季节到产地采
集，见表 1。白花丹参为唇形科植物白花丹参 Salvia
miltiorrhiza alba的干燥根和根茎。乙腈色谱纯，水
为超纯水，其他试剂均为分析纯。
表 1 白花丹参样品采集信息
Table 1 Informa of Salviae Albae Ｒadix
No． 采集地 采集时间
1 山东济南长青归德镇沙河辛村 2013-11-01
2 山东莱芜苗山镇三村 2013-11-03
3 山东莱芜苗山镇四村 2013-11-04
4 山东莱芜蔬菜基地 2013-11-01
5 山东泰山天然药物研究所 2013-11-03
6 山东泰安恒生科技公司 2013-11-05
7 山东济南长青马山镇大河东村 2013-11-01
8 山东莱芜紫光生态园 2013-11-02
9 山东泰安牡丹园 2013-11-05
10 山东医药技师学院药用植物园 2013-11-05
2 方法与结果
2. 1 色 谱 条 件 Zorbax Extend-C18 色 谱 柱
(4. 6 mm ×150 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 2%乙酸
(57∶ 43) ，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长
270 nm。在本色谱条件下，白花丹参中的丹参酮
ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ的色谱峰
与其他组分的色谱峰均得到较好的分离，见图 1。
A．对照品;B．白花丹参样品;1. 二氢丹参酮Ⅰ;2. 隐丹参酮;3. 丹参
酮Ⅰ;4. 丹参酮ⅡA
图 1 白花丹参 HPLC色谱
Fig． 1 HPLC Chromatograms of Salviae Albae Ｒadix
2. 2 混合对照溶液的制备 分别取丹参酮ⅡA，丹
参酮Ⅰ，隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ对照品适量，精密
称定，分别加甲醇溶解并制成每 1 mL 含丹参酮ⅡA
2. 760 mg，丹参酮Ⅰ0. 496 mg，隐丹参酮 1. 92 mg 和
二氢丹参酮Ⅰ0. 700 mg 的溶液，作为对照品贮备
液。分别精密量取上述贮备液各 5 mL 置 50 mL 棕
色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照
品溶液(丹参酮ⅡA 0. 276 g·L
－1，丹参酮Ⅰ0. 049 6
g·L －1，隐丹参酮 0. 192 g·L －1，二氢丹参酮Ⅰ0. 07
g·L －1)。
2. 3 供试品溶液的制备 取各供试品粉末(过四
号筛)约 0. 5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲
醇-三氯甲烷(7∶ 3)溶液 50 mL，称定质量，超声处理
30 min，放冷，再称定质量，用所加溶液补足减失的
质量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液 25 mL，低温减压
浓缩至干，加入甲醇超声使溶解并定容于 10 mL 量
瓶中，摇匀，用 0. 45 μm 的微孔滤膜滤过，弃去初滤
液，取续滤液，置棕色瓶内，避光保存，即得。
2. 4 线性关系的考察 分别精密量取混合对照品
溶液 0. 5，2，4，6，8，10 mL 置 10 mL 量瓶中，用甲醇
定容至刻度，摇匀，得到系列对照品溶液。分别进样
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10 μL，记录峰面积 Y，以峰面积为纵坐标，进样量为
横坐标进行线性回归，得回归方程为丹参酮ⅡA Y =
3 603. 9X + 8. 665(r = 0. 999 9) ，丹参酮Ⅰ Y =
6 252. 8X + 2. 125(r = 0. 999 9) ，隐丹参酮 Y =
3 780. 3X － 0. 757 2(r = 0. 999 9) ，二氢丹参酮ⅠY =
2 699X + 4. 301(r = 0. 999 9) ，线性范围分别为
0. 138 ～ 2. 76，0. 024 8 ～ 0. 496，0. 096 ～ 1. 92，
0. 035 ～ 0. 70 μg。
2. 5 精密度试验 精密吸取 1 号样品制备的供试品
溶液，重复进样 6次，丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮和
二氢丹参酮Ⅰ峰面积积分值的 ＲSD 分别为 2. 3%，
1. 7%，1. 0%，1. 4%。表明仪器的精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取 1 号样品制备的供试
品溶液，分别于 0，2，4，6，8，12 h 进样，丹参酮ⅡA，
丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ峰面积积分值
的 ＲSD分别为 0. 8%，1. 1%，2. 6%，0. 8%。表明供
试品溶液在 12 h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取 1 好样品粉末(过四号筛)约
0. 5 g，6 份，按供试品溶液制备方法处理，进行含量
测定。丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ，隐丹参酮和二氢丹参
酮Ⅰ含量的 ＲSD 分别为 1. 6%，1. 9%，0. 8%，
1. 9%。表明重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取 1 号样品粉末(过四号
筛)约 0. 25 g，精密称定，分别精密加入 4 种对照品
溶液适量，按供试品溶液制备方法处理，在上述色谱
条件下进行测定，计算回收率和 ＲSD。结果见表 2。
表 2 白花丹参中 4 种丹参酮加样回收率试验
Table 2 Ｒecorery test of 4 tanshinohes of Salviae Albae Ｒadix
化合物 称样量 / g 样品中量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% ＲSD /%
丹参酮ⅡA 0. 246 6 0. 695 2 0. 704 0 1. 415 2 102. 27 100. 06 2. 0
0. 254 9 0. 718 6 0. 704 0 1. 413 2 98. 66
0. 253 8 0. 715 5 0. 704 0 1. 424 4 100. 70
0. 251 6 0. 709 3 0. 704 0 1. 409 6 99. 47
0. 253 9 0. 715 7 0. 704 0 1. 434 5 102. 10
0. 260 3 0. 733 8 0. 704 0 1. 417 8 97. 16
丹参酮Ⅰ 0. 246 6 0. 090 3 0. 092 4 0. 186 4 104. 00 99. 60 2. 9
0. 254 9 0. 093 3 0. 092 4 0. 183 9 98. 05
0. 253 8 0. 092 9 0. 092 4 0. 182 5 96. 97
0. 251 6 0. 092 1 0. 092 4 0. 186 8 102. 49
0. 253 9 0. 092 9 0. 092 4 0. 183 3 97. 84
0. 260 3 0. 095 3 0. 092 4 0. 186 1 98. 27
隐丹参酮 0. 246 6 0. 362 5 0. 372 0 0. 725 8 97. 66 99. 91 2. 7
0. 254 9 0. 374 7 0. 372 0 0. 756 2 102. 55
0. 253 8 0. 373 1 0. 372 0 0. 742 3 99. 25
0. 251 6 0. 369 9 0. 372 0 0. 739 9 99. 46
0. 253 9 0. 373 2 0. 372 0 0. 758 9 103. 68
0. 260 3 0. 382 6 0. 372 0 0. 742 8 96. 83
二氢丹参酮Ⅰ 0. 246 6 0. 052 5 0. 052 0 0. 104 5 100. 00 100. 06 2. 9
0. 254 9 0. 054 3 0. 052 0 0. 107 4 102. 12
0. 253 8 0. 054 1 0. 052 0 0. 104 9 97. 69
0. 251 6 0. 053 6 0. 052 0 0. 103 9 96. 73
0. 253 9 0. 054 1 0. 052 0 0. 105 7 99. 23
0. 260 3 0. 055 4 0. 052 0 0. 109 8 104. 62
2. 9 样品含量测定 对各批样品按照 2. 3 项下方
法制备，进样测定，计算含量，结果见表 3。
3 讨论
3. 1 供试品溶液制备 考察了提取溶剂甲醇［8］，
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表 3 白花丹参中丹参酮成分含量
Table 3 Content of four tanshiones in Salviae Albae Ｒadix
mg·g － 1
No． 二氢丹参酮Ⅰ 隐丹参酮 丹参酮Ⅰ 丹参酮ⅡA 总和
1 0. 213 1. 470 0. 366 2. 819 4. 868
2 0. 170 1. 596 0. 320 3. 088 5. 174
3 0. 718 3. 337 0. 607 4. 117 8. 779
4 2. 601 5. 935 1. 026 7. 150 16. 712
5 0. 836 4. 825 0. 597 4. 196 10. 454
6 1. 457 4. 301 1. 747 6. 910 14. 415
7 0. 505 2. 605 0. 411 3. 949 7. 470
8 0. 132 0. 916 0. 454 2. 677 4. 179
9 0. 436 5. 526 0. 613 3. 800 10. 375
10 0. 566 2. 506 0. 457 2. 958 6. 487
甲醇-三氯甲烷(7 ∶ 3)［6］、甲醇-二氯甲烷(8 ∶ 2)［9］，
结果显示以甲醇-三氯甲烷(7∶ 3)作为提取溶剂效果
最佳。比较了超声和回流提取方式对 4 种丹参酮类
成分提取效率的影响，结果显示无显著性差异，超声
提取更方便。对提取溶剂量(25，50，100 mL)和提
取时间(15，30，45 min)进行了考察，确定加入甲醇-
三氯甲烷(7∶ 3)溶液 50 mL，超声提取 30 min最佳。
3. 2 检测波长的选择 取丹参酮ⅡA，丹参酮Ⅰ，隐
丹参酮，二氢丹参酮Ⅰ的混合对照品在 200 ～ 400
nm扫描，隐丹参酮和丹参酮ⅡA 紫外吸收相似，在
270 nm附近有最大吸收，二氢丹参酮Ⅰ最大吸收波
长在 240 nm，丹参酮Ⅰ最大吸收波长在 245 nm 处，
4 种成分在 270 nm 处均有较强吸收，灵敏度高，重
复性好，因此选择 270 nm作为检测波长。
3. 3 含量分析 10 个批次白花丹参中丹参酮ⅡA，
丹参酮Ⅰ，隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ含量范围分别是
2. 677 ～ 7. 150，0. 320 ～ 1. 747，0. 916 ～ 5. 935，
0. 132 ～ 2. 601 mg·g －1，各批次含量差异最大的成分
是二氢丹参酮Ⅰ，相差约 20 倍。4 种成分含量比
较，10 个样品中有 8 个以丹参酮ⅡA 含量最高，其次
为隐丹参酮，二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅰ相差不大。
所有样品中，丹参酮ⅡA 含量高的样品，其他 3 个成
分含量也比较高。山东莱芜蔬菜基地的白花丹参二
氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA 含量均高于其
他批次。文献报道［5，10-11］了 5 批白花丹参中丹参酮
ⅡA 的含量范围在 1. 80 ～ 7. 26 mg·g
－1，与本文结果
大体一致。
本文对采集的白花丹参中 4 中主要丹参酮类成
分含量进行了测定，为其质量标准的制定提供了
依据。
［参考文献］
［1］ 山东省药品监督管理局． 山东中药材标准［S］． 济
南:山东友谊出版社，2002:66-68.
［2］ 李允尧，赵华英，陈沪宁，等． 山东省白花丹参的植物
资源［J］． 中药材，2000，23(2) :69-70.
［3］ 王鹏． 白花丹参化学成分及其保护血管内皮细胞的
研究［D］． 济南:山东中医药大学，2011.
［4］ Li Y G，Song L，Liu M，et al． Advancement in analysis
of Salviae Miltiorrhizae Ｒadix et Ｒhizoma (Danshen)
［J］． J Chromatogr A，2009，1216(11) :1941-1953.
［5］ 董蕊． 白花丹参中丹参酮成分的提取分离和含量测
定［D］． 长春:吉林农业大学，2004.
［6］ Liu A H，Lin Y H，Yang M，et al． High-performance
liquid chromatographic determination of tanshinones in
the roots of Salvia miltiorrhiza and related traditional
chinese medicinal preparations ［J］． J Pharm Pharm
Sci，2006，9(1) :1-9.
［7］ Yang Q， Zhang X L， Li X Y， et al． Coupling
continuous ultrasound-assisted extraction with ultrasonic
probe， solid-phase extraction and high-performance
liquid chromatography for the determination of sodium
Danshensu and four tanshinones in Salvia miltiorrhiza
bunge［J］． Anal Chim Acta，2007，589(2) :231-238.
［8］ Hou J J，Wu W Y，Da J，et al． Ｒuggedness and
robustness of conversion factors in method of
simultaneous determination of multi-components with
single reference standard［J］． J Chromatogr A，2011，
1218(33) :5618-5627.
［9］ Hu P，Luo G A，Zhao Z，et al． Quality Assessment of
Ｒadix Salviae Miltiorrhizae ［J］． Chem Pharm Bull，
2005，53(5) :481-486.
［10］ 冉蓉，周凤琴，王婷，等． 山东产丹参的丹参酮 IIA 含
量比较［J］． 中药材，2008，31 (3) :331-333.
［11］ 李长峰． 丹参与白花丹参的比较研究［D］． 济南:山
东中医药大学，2008.
［责任编辑 顾雪竹］
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