全 文 ：作者简介:丁利君(1965-),女 ,韩山师范学院化学系副研究员。
E-mail:dddd1024@tom.com
收稿日期:2004-04-07
第 20卷第 3 期
2 0 0 4 年 6 月
FOOD&MACHINEY
食品与机械
Vol.20 No.3
June 2 0 0 4
溪黄草中黄酮类物质提取及对羟自由基清除作用
Extracting of flavone from Rabdosiea Serrae Hara and its effects
on scavenging of hydroxyl radicals
丁利君
DINGLi-jun　
周燕芳
ZHOU Yan-fang 　
林　楠
LIN Nan
(韩山师范学院化学系 , 广东 潮洲　521041)
(Chemical Department , Hanshan Normal University , Chaozhou , Guangdong 521041 , China)
摘要:通过醇提法正交实验 , 得出提取溪黄草中黄酮类物质
的最佳提取工艺条件是:浓度为 50%的乙醇 , 回流时间为
3 h ,料液比 1∶10。该提取液对 Fenton 体系产生的·OH 自由
基有很好的清除作用。
关键词:溪黄草;黄酮;自由基;清除
Abstract:The extracting of the flavone compounds from Rabdosiea Serrae
Hara was studied by the orthogonal design test.The results showed that the op-
timum technical conditions were the volume 1∶10, ethanol concentration 50%
and heating extracting time 3 h.The effect of extracts on Rabdosied Serrae
Hara scavenging of hydroxyl radicals was studied.
Keywords:Rabdosiea Serrae Hara;Flavone compounds;Hydroxyl radical;
Scavenging
溪黄草属于唇形科香茶属植物。是一种多年生草本植
物。据中华大辞典记载 ,溪黄草具有清热祛湿 、凉血散瘀之功
效。对急性肝炎 、肠炎 、痢疾等有较好效果 , 近年来 ,中草药溪
黄草在华南各地临床上广为应用 ,并出现了一些以其为主要
原料的保健产品, 具有较大的开发应用前景 ,该植物化学组成
目前在国外尚未有报道 ,国内的研究报道有 4 篇 , 共分出 8 个
化合物:Rabdoserrin A , Rabdoserrin B , Exeisanin A , Kamebakau-
rin , 2a-羟基乌索酸 、乌索酸 、B-谷甾醇及 B-谷甾醇-D-葡萄糖
甙[ 1 ～ 3] 。最近 ,又有报道分离出黄酮类化合物[ 4] 。本实验研
究了溪黄草中黄酮类物质提取的最佳条件 , 同时 , 提取液对
Fenton 体系产生的·OH 自由基的清除作用也进行了研究。
1　材料及仪器
1.1　实验材料
溪黄草:购自潮州中药市场;芦丁:生化试剂 , 上海试剂
二厂;乙醇 ,亚硝酸钠 , 硝酸铝 , 氢氧化钠 , 硫酸亚铁 , 过氧化
氢 ,水杨酸:均为分析纯。
1.2　实验仪器
TG328B电光分析天平:上海第二天平仪器厂;101A-1 干
燥箱:上海市实验仪器总厂;Galanz WD800ASL23-3 电脑型烧
烤微波炉:顺德市格兰仕电器有限公司;KDM 连续可调控温
电热套;HH-2微显恒温水浴锅:常州国华电器有限公司;722
光栅分光光度计:上海精密仪器有限公司;KQ-300DE 型医用
数控超声波清洗器:昆山市超声波仪器有限公司。
2　实验方法
2.1　溪黄草中黄酮类物质的提取
醇提回流法提取工艺:
溪黄草※干燥※粉碎※醇提回流※抽滤※定容※含量测定
取5 g溪黄草干料,加入不同浓度的乙醇,回流,抽滤定容。
2.2　正交试验方案的设计
醇提回流法提取溪黄草中黄酮类化合物的影响因素较
多 , 为综合考虑各种因素影响的主次顺序 , 确定醇提回流法
的最佳提取工艺因而对乙醇浓度 、提取时间 、料液比作三因
素三水平正交实验(见表 1)。方差分析结果表明(表 2), 乙
醇浓度对提取效果影响最大 ,具有差异显著性。
2.3　总黄酮含量的测定
2.3.1　标准曲线的绘制　称取 120 ℃干燥恒重芦丁5.0 mg ,
用 60%微热乙醇定容至 50 mL, 得浓度为 1.0 mg/ml 的标准
应用液。准确吸取标准应用液 0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL
于 6只具塞试管中 , 加30%乙醇使成 5 mL, 加5%NaNO2溶液
0.3 mL ,摇匀 , 放置 6 min , 加 10% Al(NO3)3 溶液 0.3 mL, 摇
匀 , 放置 6 min ,加 1 mol/ L NaOH 溶液 4 mL , 加水 0.4 mL, 摇
匀 , 放置 10～ 15 min ,于 510 nm波长处测定吸光度 , 绘制标准
曲线。依芦丁浓度-吸光度标准工作曲线 , 得出回归方程:
Y=0.1026A-0.00195。相关系数 r=0.9999。
2.3.2　样品中总黄酮的测定方法[ 5] 　采用分光光度法 , 以
芦丁为标准样测定溪黄草提取物总黄酮步骤:取一定量样品
于 50 mL容量瓶中 , 用 30%乙醇补充至 25 mL , 加入 1.4 mL
NaNO2(1∶20)摇均 , 放置 5 min 后加入 1.4 mL Al(NO3)3
(1∶10), 6 min后加入 10 mL 1 mol/ L NaOH 溶液 , 混均 ,用 30%
乙醇稀释至刻度 , 10 min后于 500 nm 处测定吸光度值 , 以芦
丁标准液作对照定量检测各提取的中黄酮含量。
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DOI :10.13652/j.issn.1003-5788.2004.03.007
表 1　L933正交实验结果与分析
实验号 A 乙醇浓度/ % B提取时间/ h C料液比/w∶v 定容/mL 稀释/mL 吸光度 黄酮含量/ %
1 50(1) 1(1) 1∶30(3) 250 2～ 50 0.423 5.30
2 70(2) 1(1) 1∶10(1) 100 1～ 50 0.400 4.32
3 90(3) 1(1) 1∶20(2) 250 1～ 50 0.140 3.1
4 50(1) 2(2) 1∶20(2) 250 1～ 50 0.180 4.13
5 70(2) 2(2) 1∶20(3) 250 2～ 50 0.331 4.00
6 90(3) 2(2) 1∶10(1) 100 1～ 50 0.305 2.93
7 50(1) 3(3) 1∶10(1) 100 1～ 50 0.564 5.59
8 70(2) 3(3) 1∶20(2) 250 2～ 50 0.352 4.27
9 90(3) 3(3) 1∶30(3) 250 2～ 50 0.251 2.98
Ⅰ 15.02 12.72 12.84
Ⅱ 12.59 11.06 11.5
Ⅲ 9.01 12.84 12.28
Q 155.10 150.69 149.31
S 6.10 1.69 0.31
P 149.00 149.00 149.00
表 2　方差分析及其结果
方差来源 平方和/ s 自由度/ f 均方/(s/ f) F 临界值
料液比 0.31 2 0.16 1 F0.05(2, 2)=19
乙醇浓度 6.1 2 3.06 19.13 F0.01(2, 2)=99
提取时间 1.69 2 0.85 5.31 F0.1(2 , 2)=9
总和 8.1 6 F0.2(2 , 2)=4
芦丁浓度/mg·ml-1
图 1　芦丁浓度-吸光度标准工作曲线
2.4　溪黄草在醇溶剂中的提取物对OH 清除作用
参照 Fenton 反应的方法建立反应体系模型[ 6] ,利用 H2O2
与Fe2+混合产生·OH , 但由于·OH具有很高的反应活性 ,存活
时间短 ,若在反应体系中加入水杨酸 ,就能有效地捕捉·OH , 并
产生有色产物。反应式如下:H2O2+Fe2+※Fe3++·OH+OH-
　　该产物在λ=510 nm 处有强吸收 , 若在此反应体系中加
入具有清除·OH 功能的被测物 , 便会与水杨酸竞争·OH , 从
而使有色产物生成量减少 , 采用固定反应时间法 , 在相同体
积的反应体系(8.8 m mol/L H2O2 1 mL , 9 m mol/ L Fe2+ 1 mL ,
9 m mol/L 1 mL水杨酸—乙醇溶液)加入一系列不同浓度的
溪黄草提取液 ,并以蒸馏水为参比 , 与试剂空白液比较 , 在λ
=510 nm 处测量各浓度下的吸光度 , 便能测定被测物(黄酮
类物质)对·OH的清除作用 ,其清除率计算公式:
清除率(%)=AO-AX
AO
×100
3　结果与分析
3.1　正交实验结果与分析
由表 1可知:对溪黄草进行三水平三因素醇提法的正交
实验时 , 提取最佳条件是 A1B3C1。 即乙醇浓度为浓度的
50%,回流时间为 3 h ,料液比为 1:10。 该条件下提取到的黄
酮类物质含量为 5.59%。另外 ,乙醇浓度对实验结果影响比
回流时间和料液比大 ,即 A>B>C。
3.2　提取液对·OH自由基清除作用的测定
以实验的提取液作为样品 ,分别取不同体积的样品定容
到 10 ml分别测其对·OH 的清除作用。从图 2 中可看出 , 随
着溪黄草提取液对由 Fenton 体系产生的·OH 有一定的清除
作用 , 随着溪黄草提取液的增加 , 对·OH 自由基的清除能力
也增强 ,说明当黄酮类物质的浓度增加时 , 其清除率也增大。
黄酮类物质浓度/ %
图 2　提取液浓度与自由基清除率的关系
4　结论
用醇提回流法提取中草药溪黄草的黄酮类物质 , 最佳的
提取工艺是乙醇浓度 50%,提取时间3 h ,料液比为 1∶10。溪
黄草的提取液对·OH 自由基有一定清除作用。 作为保健产
品的原料 ,具有很大的开发应用前景。
参考文献
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科研开发 　 2004年第 3期