全 文 ：[ 接受日期] 　2004-05-08
[ 基金项目] 　国家“十五” 科技攻关计划资助项目(99-929-
01-23)
＊　通讯作者:　吴剑峰 ,副教授 , 硕士;
研究方向:　天然活性成分与新药开发;
Tel:0757-82816702;　E-mail:jianfeng839@sina.com
不同施肥区域溪黄草中 2α-羟基熊果酸含量的比较
吴剑峰1 , 　刘　斌2 , 　祝晨 3 , 　赖小平3
(1.广东省佛山职工医学院 ,广东 佛山 528000;2.天津医学高等专科学校 ,天津 300052;
3.广州中医药大学 ,广东 广州 510405)
[ 摘　要] 　目的:考察施肥种类对药材品质的影响 , 以评价筛选溪黄草的专用施肥肥料 , 为按中药材GAP原则制定
相关标准操作规程(SOP)并实施推广应用提供基础研究资料。方法:采用 RP-HPLC 法测定 GAP基地不同施肥区域
溪黄草药材 2α-羟基熊果酸的含量。色谱条件:Kromasil RP-C18 色谱柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm);乙腈-0.05%三氟
乙酸溶液(70.5∶29.5)为流动相;流速 0.8 mL min;柱温 25℃;检测波长 210 nm。结果:不同施肥区域溪黄草药材 2α-
羟基熊果酸的含量以生物肥区为高。结论:溪黄草种植宜使用合作研制的有机生物肥。
[ 关键词] 　溪黄草;施肥;HPLC;2α-羟基熊果酸
[ 中图分类号] 　R917;R282　　[文献标识码] 　A　　[ 文章编号] 　1001-5094(2004)07-0318-04
The Contents of 2α-hydroxy-ursolic Acid in Herba Rabdosia
Lophanthoides var.Gerardianus from Different Fertilized Areas
WU Jian-feng1 , 　LIU Bin2 , 　ZHU Chen-chen3 , 　LAI Xiao-ping3
(1.Foshan Medical College for Staff of Guangdong , Foshan 528000 , China;2.Tianjin Medical College , Tian-
jin 300052 , China;3.Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine , Guangzhou 510405 , China)
[ Abstract] 　Objective:To assess the sieving of special fertilizer for Herba Rabdosia Lophanthoides var.
Gerardianus (HRLVG)by observing the influences of different fertilizers on the quality of medicine and to pro-
vide materal for laying down and carrying out the relevant operating rules(SOP)in accordance with GAP of
Chinese Medicinal Herbs.Methods:The content of 2α-hydroxy-ursolic acid in different fertilized areas of HR-
LVG(cultured under GAP)were determined by RP-HPLC.Kromasil RP-C18(4.6mm×250 mm , 5μm)col-
umn with a mobile phase of acetonitrile (AN)-0.05%trifluoro-acetic acid(TFAA)solution(70.5∶29.5)was
adopted.The flow rate was 0.8 mL min , column temperature was 25℃, and the detection wavelength was set
at 210 nm.Results:The content of 2α-hydroxy-ursolic acid in HRLVG in different fertilized areas is the high-
est in the bio-fertilized areas.Conclusion:The planting of HRLVG should appropriately be fertilized with the
co-developed organic bio-fertilizers.
[ Key words] 　Herba Rabdosia Lophanthoides var.Gerardianus ,Fertilized ,HPLC ,2α-hydroxy-ursolic acid
　　中药溪黄草在华南各地广泛用于治疗乙型病毒
性肝炎 ,且疗效确切 ,资源丰富 。溪黄草包括香茶菜
属 Rabdosia BL .Hassa的线纹香茶菜R .lophanthoides
(Buch-Ham.ex D.Don)H.Hara ,线纹香茶菜两个变种
狭基线纹香茶菜 R .lophanthoides var.gerardianus
(Bentham)H.Hara ,细花线纹香茶菜 R .lophanthoides
var.graciliftorus(Bentham)H.Hara以及同属植物溪黄
草 R.serra(Maxim.)Hara[ 1 , 2] 。广东省溪黄草药材以
狭基线纹香茶菜为主[ 3] 。我们对狭基线纹香茶菜的
抗鸭乙肝病毒的有效成分群进行了初步研究 ,实验
· 实验与研究 ·
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表明狭基线纹香茶菜的乙酸乙酯提取部位具有显著
的抑制乙肝病毒作用 ,化学分离与鉴定确定了该提
取部位中相关单体成分群主要为熊果酸类成分。本
文以狭基线纹香茶菜的主要成分 2α-羟基熊果酸为
指标 ,应用 RP-HPLC法 ,比较生物有机肥区 、农家肥
区 、化学肥区三个不同施肥区域及未施肥区域狭基
线纹香茶菜中 2α-羟基熊果酸的含量 ,考察施肥种类
对药材品质的影响 ,以评价筛选出溪黄草的专用施
肥肥料 ,为按中药材GAP原则制定相关标准操作规
程(SOP)并实施推广应用提供基础研究资料 。
1　仪器和试药
HP1100高效液相色谱仪;HP G1315A 二极管阵
列检测器;Sartorius分析天平;乙腈为色谱纯;水为超
纯水;其他试剂均为分析纯;2α-羟基熊果酸对照品
由广州中医药大学狭基线纹香茶菜课题组从狭基线
纹香茶菜中提取分离得到 , 并通过 IR 、1HNMR、
13
CNMR、MS光谱鉴定 ,经面积归一化法标定其纯度
为 98%;溪黄草药材采于广东清远 GAP 基地 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适应性　色谱柱:Kromasil RP-
C18柱(4.6 mm×250 mm , 5μm);乙腈-0.05%三氟
乙酸溶液(70.5∶29.5)为流动相;流速 0.8 mL min;柱
温 25℃;检测波长 210 nm 。理论塔板数按 2α-羟基
熊果酸计不低于 10 000;2α-羟基熊果酸的保留时间
为 14.342 min ,并且与其他成分分离良好。对照品
和样品的高效液相色谱图见图 1和图 2(图中 2α-羟
基熊果酸以 X5表示)。
图 1　对照品溶液 RP-HPLC 色谱图
图 2　样品溶液 RP-HPLC 色谱图
2.2　样品供试液的制备　精密称取干燥至恒重的
狭基线纹香茶菜粉末(40℃烘箱中干燥 6小时 ,过 60
目筛)0.5 g ,加甲醇20 mL回流提取 30分钟 ,过滤 ,残
渣再加入 20 mL甲醇回流提取 30分钟 ,过滤 ,合并两
次滤液 ,水浴蒸干 ,残留物用甲醇溶解并定容于 10 mL
的容量瓶中 ,用 0.45μm的微孔滤膜过滤 ,备用。
2.3　标准曲线的制备及线性范围考察　精密称取
干燥至恒重的 2α-羟基熊果酸适量 ,加甲醇溶解并定
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药学进展 · 实验与研究 ·　2004 , Vol.28 , No.7　319　
容至 10 mL 的容量瓶中 ,制备成浓度为 0.1 mg mL
的对照品溶液 。精密吸取上述对照品溶液 0.5 、
1.0 、 2.0 、 4.0 、6.0 、8.0 、 10 、 20 μL ,以选定的色谱
条件进样测定 ,以峰面积(Y)对对照品含量(X)进行
线性回归 ,回归方程为:Y = 552.57X -0.199 , r =
0.9999 ,线性范围:0.06 ～ 2.02 μg 。
2.4　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液 2 μL ,
连续进样 5次 ,以峰面积计算 , RSD为 0.92%,表明
分析结果的精密度良好。
2.5　重现性试验　取同批次狭基线纹香茶菜药材
样品 5份 ,按 2.2实验方法制备供试液 ,进样 5 μL ,
测定 2α-羟基熊果酸的平均含量为 0.9154 mg g ,RSD
为0.56%,重现性符合要求。
2.6　稳定性试验　精密吸取同一批次样品溶液 5
μL ,分别于样品溶液配制后 0 、 1 、 2 、 4 、 8 、 12 、 24 、
48 h进行测定 ,以峰面积计算 , RSD为 1.17%,结果
表明样品溶液放置 48 h稳定 。
2.7　回收率试验　精密称取 5份已知 2α-羟基熊果
酸含量的狭基线纹香茶菜 0.25 g ,分别准确加入 2α-
羟基熊果酸对照品 0.5 mg ,按“2.2”项下方法制备供
试液。进样5μL ,测定峰面积 ,结果平均加样回收率
为 99.3%,RSD为 2.71%。
2.8　样品测定　取广东清远 GAP 基地不同施肥区
域狭基线纹香茶菜 0.5 g ,按 2.2实验方法制备供试
液 ,进样 10μL ,进行测定 ,按外标法以峰面积积分值
计算2α-羟基熊果酸的含量 ,实验结果见表1及图3。
表 1　广东清远 GAP 基地不同施肥区域狭基线纹香茶菜中
2α-羟基熊果酸的含量(n =3)
不同施肥区域 2α-羟基熊果酸含量(mg)(%) RSD(%)
生物肥区 1.1119 1.84
农家肥区 0.7974 1.16
化学肥区 0.7437 0.87
未施肥区 0.6172 1.16
(样品:上-生物肥区;中-农家肥区;下-化学肥区)
图 3　广东清远狭基线纹香茶菜不同施肥区 2α-羟基熊果酸含量 RP-HPLC色谱图
3　讨　论
实验结果表明:施肥利于指标成分的累积 ,在不
同的施肥区域 ,狭基线纹香茶菜中 2α-羟基熊果酸的
含量高低顺序为:生物肥区 、农家肥区 、化学肥区 。
本实验使用的是“十五”国家科技攻关课题《中药材
规范化种植基地》课题组与北京高新技术企业 ———
北京九龙升微生物资源开发有限公司(在广东设有
分厂)合作研制的有机生物肥 ,该类肥料具有安全 、
无毒 、无残留 、有效期长等特点 ,能发挥使用农家肥 、
化学肥所不具备的防病 、增产 、增效 、改良土壤的综
合功效 ,且能避免中药材重金属含量的超标 。本研
· 实验与研究 ·
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究的实验结果显示:溪黄草种植宜使用合作研制的
有机生物肥。
[ 参考文献]
[ 1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[ M] .上海:上海科
学技术出版社 , 1988.2511.
[ 2] 湖南省卫生厅.湖南省中药材标准[ M] .长沙:湖南科
学出版社 , 1993.323.
[ 3] 陈建南 , 赖小平 , 刘念.广东溪黄草药材的原植物调查
及商品鉴定[ J] .中药材 , 1996 , 19(2):73-74.
[ 接受日期] 　2004-04-05 ＊　通讯作者:　王凯 ,主管药师;
研究方向:　中药抗肿瘤的研究;
Tel:0571-87632216;　E-mail:wang-kai@sspc.com.cn
加味血府逐瘀方抗肿瘤作用的实验研究
王　凯1 , 　殷利春2 , 　戴关海3 , 　沈　翔3 , 　杨　锋3
(1.华东医药股份有限公司 ,浙江 杭州 310009;2.浙江省建工医院脑外科 ,浙江 杭州 310012;
3.浙江省中医药研究院基础实验研究所 ,浙江 杭州 310007)
[ 摘　要] 　目的:观察加味血府逐瘀方的抗肿瘤作用。方法:建造 S180肉瘤 、Lewis 肺癌 、HepA 腹水性肝癌及 SHG-
44 人脑恶性胶质瘤等小鼠移植模型 , 分别以蒸馏水为空白对照及环磷酰胺 、顺铂和复方天仙胶囊为阳性对照药 , 给
上述模型小鼠口服加味血府逐瘀方冲剂 ,观察对肿瘤的抑制作用;并对 BT-325 人脑多形性胶质母细胞瘤进行体外
抑制实验。结果:该冲剂对S180肉瘤有明显的抑制作用(P <0.05 或 P<0.01),抑瘤率达30%～ 49%;对 Lewis 肺癌
有明显的抑制作用(P<0.05),抑瘤率达 25%～ 35%;可延长 HepA肝癌小鼠存活期 , 其生命延长率达 8%～ 12%;对
SHG-44脑瘤有明显的抑制作用(P<0.05 或 P <0.01),抑瘤率达 42%～ 56%;可在体外明显抑制 BT-325 人脑多形
性胶质母细胞瘤的生长(P<0.01),抑瘤率达 17.4%。结论:该方对实体瘤具有较好的抑制作用 ,尤其对人脑胶质
瘤的作用更显著。
[ 关键词] 　血府逐淤方;抗肿瘤;动物实验
[ 中图分类号] 　R965　　[ 文献标识码] 　A　　[ 文章编号] 　1001-5094(2004)07-0321-05
Experimental Research on the Effects of a Modified
Xuefu Zhuyu Formulation on Carcinomas
WANG Kai
1 , 　YIN Li-chun2 , 　DAI Guan-hai3 , 　SHEN Xiang3 , 　YANG Feng3
(1.East-China Medicinal Co., Ltd., Hangzhou 310009 , China;2.Jangong Hospital of Zhejiang Province ,
Hangzhou 310012 , China;3.Research Division of Basic Experiment , Insititute of Chinese Traditional Medi-
cine , Hangzhou 310007 , China)
[ Abstract] 　Objective:To observe the effects of a modified Xuefu Zhuyu Formulation on carcinomas.Meth-
ods:4 kind of models of cancer-transplanting mice , such as S180 sarcom mice , Lewis lung cancer mice , hepa-
tocarcinoma ascites(HepA)mice and SHG- 44 anthropo-cerebro-glioma nude , were constructed respectively.
Each model mice were divided into control(NS)group , positive drug (100 mg kg of CTX , ip or 5 mg kg of
cisplatin , ip)group , and lower-dose (30 mg kg , po , for 10 day ,)and higher-dose (111 mg kg , po , for 10
day)group of modified Xuefu Zhuyu Formulation.The inhibiting action of the modified Xuefu Zhuyu Formula-
tion on BT-325 anthropo-brain pleomorphism blastoma in vivo was also verified and compared with Tianxian
pill.Results:The modified Xuefu Zhuyu Formulation showed significantly inhibiting action on S180 sarcom(P
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Progress in Pharmaceutical Sciences
药学进展 · 实验与研究 ·　2004 , Vol.28 , No.7　321