全 文 ：第 22卷 第 3期
2009年 6月
山 东 科 学
SHANDONGSCIENCE
Vol.22 No.3
Jun.2009
收稿日期:2008-12-17
基金项目:山东省 2007年科学技术发展计划(2007GG2NSO2069)
作者简介:毛淑敏(1981-),女 ,助教 ,研究方向:生药(中药)的品质评价与质量鉴定。
文章编号:1002-4026(2009)03-0027-04
炮制对白花丹参饮片中丹参酮ⅡA和丹酚酸 B的影响
毛淑敏 1 ,闫永亮 1 ,王峰祥1 ,李奉举2
(1.莱芜职业技术学院生物技术研究所 ,山东 莱芜 271100;2.莱芜岳圣天然药物研究开发中心 , 山东 莱芜 271100)
摘要:为了确定不同白花丹参饮片中丹参酮 ⅡA和丹酚酸B的含量 ,本实验应用高效液相色谱进行测定。采用
色谱柱(150mm×4.6mm, 5μm);检测波长丹参酮 ⅡA为 270 nm,丹酚酸 B为 286nm;流动相:丹参酮 ⅡA采
用乙腈 -水(74∶26),丹酚酸 B采用甲醇 -乙腈 -甲酸 -水(30∶10∶1∶59)的条件。结果表明 , 白花丹参不
同炮制品中丹参酮 ⅡA含量高低为:原药材 >生品饮片 >米炒品 >酒制品 , 丹酚酸B含量高低为:原药材 >
生品 >酒制品 >米炒品。说明不同炮制方法对白花丹参中丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的含量有一定的影响。
关键词:白花丹参;炮制;丹参酮 ⅡA;丹酚酸 B
中图分类号:R283.1 文献标识码:A
TheInfluencesofProcessingApproachesontheContents
ofTanshinoneⅡAandSalvianolicAcidBinSolviuamiltiorrhiza
MAOShu-min1 , YANYong-liang1 , WANGFeng-xiang1 , LIFeng-ju2
(1.BiologyInstitute, LaiwuVocationalandTechnicalColege, Laiwu271100, China;
2.LaiwuYueshengNaturalMedicineResearchandDevelopmentCenter, Laiwu271100, China)
Abstract:WeemployedODSC18 columninHPLCtodeterminethecontentsofTanshinoneⅡA
andSalvianolicAcidBindiferentprocessedSolviuamiltiorrhizaproducts.Experimental
conditionswereliquidphasewhoseconstitutionratiowas74∶26 (acetonitrilevs.water)for
testingTanshinoneⅡ A, liquidphasewhoseconstitutionratiowas30∶10∶1∶59(methanol
vs.acetonitrilevs.aceticacidvs.water)fortestingSalvianolicAcidB, wavelengthof270nm
forTanshinoneⅡA, andwavelengthof286 nmforSalvianolicAcidB.Resultsshowthatthe
contentsofTanshinoneⅡAindiferentprocessedproductsfromhigh-ordertolow-orderarethe
originalcontent, notprocessedcontent, thefriedwithricecontentandtheprocessedwithliquor
content, andthatthecontentsofSalvianolicAcidBindiferentprocessedproductsfrom
high-ordertolow-orderaretheoriginalcontent, notprocessedcontent, theprocessedwithliquor
contentandfriedwithricecontent.Thesedemonstratethatdiferentprocessingapproacheshave
diferentefectsonthecontentsofTanshinoneⅡA andSalvianolicAcidB inSolviua
miltiorhiza.
Keywords:Solviuamiltiorrhiza;processing;TanshinoneⅡA;SalvianolicAcidB
山 东 科 学 2009年
白花丹参是唇形科植物丹参 SolviuamiltiorrhizaBge.的白花变型 ,为山东特有珍稀物种[ 1, 2] 。丹参通常以
根入药 ,具有活血化瘀 、通经止痛 、清心除烦等功效[ 3] 。药理研究证明 ,丹参能改善心脏功能和血液流变性 ,调节
前列环素 /血栓素 A2(PGI2/TXA2)平衡和脂质代谢 ,广泛用于心脑血管疾病的防治[ 4, 5] 。除具有丹参的作用和
用途外 ,中医认为白花丹参对治疗血栓闭塞性脉管炎具有独特疗效 [ 6] 。所含有效成分亦较高 ,是优良的中草药
资源 [ 7] 。自古以来对丹参饮片的研究较多 ,丹参饮片 、炒丹参 、酒丹参是临床常用炮制品。然而 ,对白花丹参饮片
的研究涉及的较少 ,为了充分利用丹参资源 ,加大对其的开发力度 ,本文对不同白花丹参饮片中丹参酮ⅡA和丹
酚酸 B的含量进行测定 ,旨在为白花丹参炮制品的质量标准提供参考依据 ,并为临床用药提供指导。
1 仪器与材料
1.1 仪器与试剂
日本岛津高效液相色谱仪。甲醇 、乙腈为色谱纯 , 水为三蒸水(自制), 其它试剂均为分析纯 。丹参酮
ⅡA(中国药品生物制品检定所 ,含量测定用 ,批号:110766-200518);丹酚酸 B对照品(中国药品生物制品检
定所 ,含量测定用 ,批号:111562-200807)。
1.2 原药材
样品白花丹参采自莱芜苗山白花丹参种植基地 ,经莱芜职业技术学院生物研究所王峰祥教授鉴定为白
花丹参 SalviamiltiorrhizaBgefalba。
1.3 白花丹参饮片的炮制
1.3.1 生品
取原药材 ,除去杂质及残茎 ,洗净 ,润透 ,切厚片 ,干燥。
1.3.2 酒制品
取丹参片 ,加黄酒拌匀 ,闷润至透 ,至锅内 ,用文火炒干 ,取出放凉。
1.3.3 米炒品
取丹参片 ,先用水湿锅 ,将米撒贴锅内 ,加热至米冒烟时 ,把丹参片倒入锅中 ,不断翻动 ,至丹参片由红转
深紫色 ,出锅 ,筛去米粒 ,冷却即得。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱 ODSC18(150mm×4.6mm, 5μm);柱温为室温;检测波长:丹参
酮 ⅡA为 270nm,丹酚酸 B为 286nm;流动相:丹参酮 ⅡA采用乙腈 -水(74∶26),丹酚酸 B采用甲醇 -乙
腈 -甲酸 -水(30∶10∶1∶59);流速为 1mL·min-1;进样量:10μL。选定条件下 ,丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B能
与其它组分的色谱峰达到基线分离 ,与其相邻色谱峰的分离度大于 1.5,按照丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的色谱
峰计算 ,理论塔板数 2000以上 ,见图 1。
1.丹参酮 ⅡA 2.丹酚酸 B
图 1 HPLC色谱图
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第 3期 毛淑敏 , 等:炮制对白花丹参饮片中丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的影响
2.2 标准品溶液制备
2.2.1 丹参酮 ⅡA
精密称取丹参酮 ⅡA标准品 ,加甲醇制成 0.22mg·mL-1的母液;精密量取 3mL母液 ,置 25mL棕色容
量瓶 ,加入甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得丹参酮 ⅡA标准品溶液 。
2.2.2 丹酚酸 B
精密称取丹酚酸 B标准品 15 mg,置 50mL棕色容量瓶中 ,加入 75%甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得丹酚酸 B标
准品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
按 2005年版 《中华人民共和国药典》(一部)项下分别进行丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B供试品溶液的制备 。
2.4 线性关系考察
丹参酮 ⅡA标准曲线:精密吸取丹参酮 ⅡA标准品溶液 ,按上述色谱条件分别进样 4、8、12、16、20μL,测
定峰面积 ,以峰面积为纵坐标(Y),进样量(μg)为横坐标(X)绘制标准曲线 Y=5.56×106X+2.17 ×104 ,
r=0.9992,结果表明丹参酮 ⅡA在 0.1056 ～ 0.528μg范围内线性关系良好。
丹酚酸 B标准曲线:精密吸取丹酚酸 B标准品溶液 ,按上述色谱条件依次进样 4、6、8、12、16 μL,测定峰
面积 ,以峰面积为纵坐标(Y),进样量(μg)为横坐标(X)测得回归方程为 Y=3.98 ×105X+4.85 ×104 ,
r=0.9993,结果表明丹酚酸 B在 1.2 ～ 4.8μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度实验 精密吸取丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的同批供试品溶液 ,分别连续进样 5次 ,测定丹参酮
ⅡA和丹酚酸 B峰面积 ,结果丹参酮 ⅡA的 RSD=0.96%;丹酚酸 B的 RSD=0.75%。
2.6 稳定性实验 精密吸取丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的同批供试品溶液 ,分别在 0、2、4、6、8 h和 0、1、2、3、
4、5h进样 ,测定 ,结果为丹参酮 ⅡA的 RSD=0.82%,说明丹参酮 ⅡA至少在 8 h内稳定;丹酚酸 B的 RSD
=0.51%,说明丹酚酸 B至少在 5 h内稳定。
2.7 重复性实验 取同一供试品 ,按 2.3项下分别制备丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B供试液各 5份 ,分别测定峰
面积 ,结果丹参酮 ⅡA的 RSD=1.73%,丹酚酸 B的 RSD=1.46%。
2.8 加样回收实验
丹参酮 ⅡA:精密称量同一供试品 0.3g,共 5份 ,分别加入丹参酮 ⅡA母液 3mL,按 2.3项下方法制备
丹参酮 ⅡA供试液 ,进样 ,测定 ,结果丹参酮 ⅡA平均回收率为 97.5%, RSD=1.30%。
丹酚酸 B:精密称量同一供试品 0.2g,共 5份 ,分别加入丹酚酸 B标准品溶液 4.5mL,按 2.3项下方法制
备丹酚酸 B供试液 ,进样 ,测定 ,结果丹酚酸 B平均回收率为 98.4%, RSD=1.16%。
2.9 样品含量的测定
分别称取不同的样品 ,按 2.3项下分别制备丹参
酮 ⅡA和丹酚酸 B的供试品溶液 , 0.45μm微孔滤膜
滤过 ,取 10 μL进样 ,测定峰面积 ,以外标法计算各样
品中丹参酮 ⅡA与丹酚酸 B的含量 ,结果见表 1。
3 结果与讨论
表 1 白花丹参不同炮制品中
丹参酮 ⅡA与丹酚酸 B的含量测定(n=3)
编号 加工方法 丹参酮 ⅡA(mg/g)丹酚酸 B(mg/g)
1 原药材 5.637 70.58
2 生品 3.004 51.83
3 米炒品 2.870 42.33
4 酒制品 2.696 43.38
(1)本研究结果表明 ,白花丹参不同炮制品的丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B含量均有了变化 ,丹参酮 ⅡA含
量:原药材 >生品饮片 >米炒品 >酒制品;丹酚酸 B含量:原药材 >生品饮片 >酒制品 >米炒品。说明
炮制对白花丹参中丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B含量有一定的影响 。
(2)丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B不稳定 ,光照及温度对其都有影响 ,米炒 、酒制加热温度升高使丹参酮 ⅡA、
丹酚酸 B部分损失 ,含量降低。生品饮片相对于原药材 ,要经过洗 、晾 、晒 、润 、切等炮制过程 ,使其丹参酮 ⅡA
和丹酚酸 B的含量有所降低。因此对于白花丹参以原药材入药的 ,收获后 ,切不可暴晒 ,忌冲洗 ,以免有效成
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分的过度丢失。
(3)炮制使白花丹参中丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B含量有所降低 ,在临床应用中其药效是否发生了改变 ,还
需做进一步的研究 ,
(4)白花丹参酒制能缓解寒凉之性 ,增强活血祛瘀通脉之功 。其机理与水溶性酚性成分易于浸出有关 ,
从而使该药在预防和治疗心脉血管病中发挥积极作用。
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