全 文 ：佳，对脾虚湿盛，湿热内蕴患者的 2 型糖尿病胰岛素抵
抗疗效确切。本研究利用胰岛素抵抗大鼠模型，通过
观察花旗泽仁对大鼠胰岛素敏感指数的影响，证实花
旗泽仁改善 2 型糖尿病胰岛素抵抗药理的作用，为其
在临床推广应用提供实验依据。
本研究结果显示，经药物干预后，花旗泽仁高、低
剂量组均可明显升高大鼠胰岛素敏感指数，与模型组
比较差异显著(P ＜ 0． 05)。因此，从实验研究角度证
实了花旗泽仁改善 2 型糖尿病胰岛素抵抗的药理作
用，为进一步探讨花旗泽仁的作用机制奠定了基础。
参考文献:
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檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲檲
110 － 112．
MTT法检测香叶木苷对脐静脉内皮细胞
增殖抑制的影响
苏秀莉，卢卫红，张浩，赵越
(哈尔滨工业大学，黑龙江 哈尔滨 150001)
摘 要:目的:测定香叶木苷对脐静脉内皮细胞的影响，优化出最佳加药浓度和最优加药时间。方法:
1)将细胞分为对照组和实验组(终浓度 10μg /mL、20μg /mL、30μg /mL、40μg /mL、50μg /mL、60μg /mL) ，
MTT法检测细胞活性，根据抑制率和抑制率曲线确定了最佳加药浓度。2)将细胞分为 A组(24h)、B 组
(48h)、C组(72h) ，每组设置对照，加药(20μg /mL)后分别按照各组时间用 MTT 法检测细胞活性，根据
抑制率和抑制率曲线确定了最优加药时间。结论:经实验选择出的最佳加药浓度为 20μg /mL，最优加
药时间为 48h，其 IC50 为 254． 8μg /mL。
关键词:香叶木苷;脐静脉内皮细胞;MTT比色法
中图分类号:R283． 5 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2012)06 － 0101 － 03
基金项目:黑龙江省攻关项目(GC07C360) ;哈工大 985 学科建设后备带头人项目(2010)
作者简介:苏秀莉(1987 －) ，女，哈尔滨工业大学 2010 级化学工程专业硕士研究生。
通讯作者:卢卫红(1970 －) ，女，副教授，博士，主要研究方向:药食同源功能性因子在极端环境生物学研究。
收稿日期:2012 － 07 － 12
修回日期:2012 － 08 － 03
Inhibitive Effect of Proliferation of Dosmin on Human Umbilical
Vein Endothelial Cells by MTT Assay
SU Xiu － li，LU Wei － hong，ZHANG Hao，ZHAO Yue
(Harbin Institute of Technology，Harbin 150001，China)
Abstract:Objective:To research the determination of dosmin on human umbilical vein endothelial cells in or-
der to optimize the concentration of the optimal dosing and optimal dosing time． Method:1)Human umbilicus
vein endothelial cells were divided into two groups of control group and six experimental groups which had six
different concentrations of dosmin． MTT method assay was used to detect the activeness of cells and got the op-
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timal dosing． 2)Human umbilicus vein endothelial cells were divided into three groups of A(24h) ，B(48h) ，C
(72h)and every group set control group． After adding dosmin to center hours，MTT method assay was used to
detect the activeness of cells and got the optimal dosing time． Conclusion:The optimal dosing is 20μg /mL，the
optimal dosing time is 48h and the IC50 is 254． 8μg /mL．
Key words:Dosmin;HUVECs;MTT
香叶木苷(dosmin，3，5，7 －三羟基 4 －甲氧基黄
酮 － 7 －芸香糖)是从茜草科药用植物蓬子菜(Galium
verum L．)中提取出的含量丰富黄酮苷类化合物［1］，蓬
子菜是中国东北的一种野生植物，这种植物以维生素
的优良的食物来源而著称，它还包含绿原酸，水杨酸和
黄酮类等物质，在东北民间药用历史悠久，具有清热祛
湿、活血止痒的功效，近 10 余年来，临床应用不同剂型
治疗下肢静脉炎疗效显著。香叶木苷具有增加静脉张
力，改善静脉通透性，改善微循环的作用，从而减轻肢
体水肿，在国内已有多篇文献临床报道［2 － 4］。香叶木
苷具有消炎和止痛的药效，柑橘中获得的类黄酮香叶
木苷具有抗虐、抑制癌细胞增殖作用，还可以作为中枢
神经镇静剂并具有辅助睡眠，缩短入睡时间的显著功
效，同时它还是治疗疾病的特殊药效物质，可以增加肌
肉强度，抵抗静脉血管炎症，慢性血管炎，风湿病关节
炎，抗氧化，抗脂质过氧化的功效，细胞保护，治疗急性
和慢性的胃溃疡和十二指肠溃疡［5 － 7］。本课题组前期
实验从蓬子菜中分离了香叶木苷，并且进行了香叶木
苷在大鼠体内的药代动力学等研究［8］。
脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial
cells，简称 HUVECs)是一种干细胞，能无限次传代(理
论上) ，易于实验操作。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方
法。最终结果在 490nm波长处测定其光吸收值，按下
面公式计算细胞生长抑制率。细胞生长抑制率(IR)
=(1 －加药组吸光度 /对照组吸光度)× 100%。
在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞
数成正比。
香叶木苷的研究前期主要集中在从蓬子菜中分离
提取纯化及在动物体内的功能，几乎没有作用于细胞
方面的研究，本实验从香叶木苷作用于脐静脉内皮细
胞入手，优化出最佳加药浓度和最优加药实验，为后期
研究相关香叶木苷作用于细胞的蛋白质组研究奠定
基础。
1 材料
1． 1 细胞来源 人脐静脉内皮细胞株由哈尔滨医科
大学提供。
1． 2 药材与试剂 香叶木苷(由蓬子菜分离提取，蓬
子菜采自黑龙江省镜泊湖地区和哈尔滨郊区，由黑龙
江中医药大学药学院于加宾教授鉴定，香叶木苷由哈
尔滨工业大学卢卫红副教授分离提取［9］) ;改良型 RP-
MI － 1640 培养基、胎牛血清和胰蛋白酶(美国 HyClone
公司) ;四甲基偶氮唑蓝(美国 Amresco 公司) ;二甲基
亚砜(DMSO) (美国 Amresco公司) ;青 －链霉素(碧云
天公司)。
2 方法
2． 1 培养基的配置 H － 1640 培养基按照 90%
RPMI － 1640 培养基、10% 胎牛血清，青霉素 100U /
mL，链霉素 100μg /mL比例配置。配置好的培养基封
口放入 4°冰箱保存。
2． 2 脐静脉内皮细胞的复苏及培养 将冻存细胞从
液氮中取出，迅速放入 37℃水浴中并轻轻晃动使其迅
速融化，立即放入离心机离心(1 000r /min，5min) ，吸
去上层液体，加入 1ml培养基轻轻吹打，使细胞分散成
单个，转移至 25cm2培养瓶中，再补加入 1mL 培养基，
放入 37℃，CO2体积分数为 5%的温箱中培养。24h 后
更换培养基，除去未贴壁的细胞，2 ～ 3 天更换培养
基［10］。脐静脉内皮细胞的传代培养:用胰蛋白酶 ED-
TA消化法。待细胞融合成单层后，弃去旧培养液，用
PBS液洗涤瓶壁，加 2mL，25g /L 胰蛋白酶，作用 1min
后吸去消化液，室温下继续作用，一边在倒置显微镜
下观察，直到细胞皱缩、彼此分离或单层细胞出现网
孔状即可终止消化。加入培养液，吸管吹打，制成细
胞悬液，按 1∶ 2 比例将细胞悬液接种于培养瓶中，置
CO2体积分数为 5%的培养箱中，37℃培养。待长满单
层，用同法继续传代培养［10］。
2． 3 最优药物浓度的选择 设置 10μg /mL、20μg /
mL、30μg /mL、40μg /mL、50μg /mL、60μg /mL六个药物
浓度组及对照组。按 1 × 105个 /mL 密度接种细胞于
96 孔板中，每孔 100μL，每种浓度设 4 孔重复，边缘空
白孔加 PBS保持湿度。于培养箱中培养 12h，待细胞
贴壁后按照分组加入药物，24h后每孔加入 20μLMTT，
置于 CO2体积分数为 5%，温度为 37℃的条件下继续
培养 4h，弃上清，每孔加 150μl DMSO，于摇床上摇
10min，酶标仪上以 490nm波长测定吸光度。
2． 4 最优加药时间的确定 将细胞按 1 × 105个 /mL
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密度接种细胞于 96 孔板中，每孔 100μL，共三组，分别
标注为 A(24h)、B(48h)和 C(72h) ，每组 4 孔重复并
设置对照组。于培养箱中培养 12h后选择上述实验优
化出的最佳药物浓度加药，24h 后取出 A 组每孔加入
20μLMTT，置于 CO2体积分数为 5%，温度为 37℃的条
件下继续培养 4h，弃上清，每孔加 150μL DMSO，于摇
床上摇 10min，酶标仪上于 490nm波长测定吸光度。B
和 C组分别于 48h和 72h后进行相同处理。
3 结果
3． 1 最优药物浓度为 20μg /mL 24h 后进行 MTT 检
测得到的结果如图 2。最优药物浓度为 20μg /mL，而
对照组的 OD 值为 0． 905，低于 20μg /mL 加药组的结
果，说明这个浓度的香叶木苷对细胞的生长有促进作
用。
3． 2 最优加药时间为 48h 经 MTT 检测后得到图 3
的结果，证明 48h是最优加药时间。
图 1 不同浓度药物对脐静脉内皮细胞的影响
图 2 不同加药时间对脐静脉内皮细胞的影响
表 1 不同浓度香叶木苷对脐静脉内皮细胞的抑制率
浓度(μg /mL) 10 20 30 40 50 60
抑制率(100%) 12． 9 － 0． 7 8． 4 11． 7 11． 9 12． 3
表 2 不同培养时间对脐静脉内皮细胞的抑制
时间(h) 24 48 72
抑制率(100%) 13． 8 － 10． 3 29． 9
图 3 香叶木苷浓度抑制率曲线
图 4 香叶木苷培养时间抑制率曲线
计算得到的香叶木苷药物对脐静脉内皮细胞的抑
制率如表 1。从表 1 可看出香叶木苷对细胞的抑制作
用为先降低后增高，在 20μg /mL时达到最低，为负值，
进一步说明此时药物对细胞的生长有促进作用。但是
随着浓度的进一步增大，香叶木苷对细胞的抑制率逐
渐增大，表现为细胞毒性作用。由此得出香叶木苷作
用于脐静脉内皮细胞的最佳药物浓度为 20μg /mL。
图 3 可知，香叶木苷对细胞生长有抑制作用，抑制
作用先减小再增大，在 48h 时抑制作用最低。经软件
分析，香叶木苷对脐静脉内皮细胞的生长抑制率达到
50%所需的用量即 IC50 为 254. 8μg /mL。
4 讨论
图 1 中香叶木苷浓度为 20μg /mL 时的 OD 值达
到了 0. 911，而本组实验的对照组即未加药的细胞 OD
值才为 0. 905，说明此时香叶木苷对脐静脉内皮细胞
的生长起到促进作用，同时抑制率和抑制率曲线也验
证了这个结论，IC50 的值也说明香叶木苷需要很大浓
度时才能使细胞的死亡率达到 50%。抑制率在 20μg /
mL时达到了负值，也就说这个时候的作用是促进而不
是抑制。
图 2 和图 4 说明了时间对香叶木苷作用于细胞的
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影响，即抑制作用先降低后增大，在 48h时抑制作用是
最低的。时间试验的抑制率先降低后增加，可能的原
因是香叶木苷刚加入时对细胞有个适应的过程，此时
表现为抑制，但随着加入的时间延长，细胞表现出适应
状态，抑制率逐渐降低，在 48h 时达到最低，即达到最
佳加药浓度。
从以上结论来看，香叶木苷除在动物个体上有具
有增加静脉张力，改善静脉通透性，改善微循环等作
用，在细胞层面上合适的浓度和一定的时间范围内对
细胞的生长也有促进作用，这就为下一步研究形成静
脉血栓及香叶木苷治疗静脉血栓发挥作用的相关蛋白
奠定基础。
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5834 － 5835．
医 籍 探 析
《脾胃论》益气升阳方剂治法研究
杨天仁，刘云平，耿爱春
(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:通过分析和研究近 20 年李东垣《脾胃论》益气升阳方剂的资料，总结出李东垣《脾胃论》益气升
阳方剂的治法:1)治湿二法，包括益气升阳燥湿、益气升阳除湿;2)治火三法，包括益气升阳散火、益气
升阳泻火、益气升阳，甘温除热;3)治胃三法，包括益气升阳益胃、益气升阳强胃、益气升阳温胃;4)治中
三法，包括益气升阳补中、益气升阳和中、益气升阳调中;5)其他治法，包括益气升阳、温经散寒;益气升
阳、泻风热。
关键词:《脾胃论》;益气升阳;方剂;治法
中图分类号:R289 文献标识码:A 文章编号:1002 － 2406(2012)06 － 0104 － 03
作者简介:杨天仁(1954 －) ，男，教授，硕士研究生导师，主要研究方向:
中医方剂学文献与中医药传承规律研究;中医教育史与高等
中医药教育教学思想研究;高等教育评估的理论与实践。
收稿日期:2012 － 03 － 21
修回日期:2012 － 04 － 17
《脾胃论》从内伤立论，提出了“内伤脾胃，百病
由生”的学术思想，病机关键在“脾胃气虚、阳气不
升”，故确立了“益气升阳”的治疗大法。所谓“方从法
出”，《脾胃论》一书，立方 61 首，具有益气升阳作用的
方剂 20 余首，皆随证立法，按法拟方，配伍严谨。此篇
文章通过对李东垣《脾胃论》益气升阳方剂的资料进
行分析和研究，总结出李东垣《脾胃论》益气升阳方剂
的治法，综述如下。
1 治湿二法
1． 1 益气升阳燥湿 卫向龙［1］认为，清暑益气汤中
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Vol. 29，No. 6，2012