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离体条件下L-色氨酸和吲哚丙酮酸诱导拐芹(Angelica Polymorpha Maxim)根切段直接形成胚状体的初步研究



全 文 :第 7 2卷 第 4期
19 9 4年 2 1月
实 :验 生 物 学 报 Vo l . 27 , N o . 4
A e t a B i`〕l o g ia e E x P e r im e n t a l i s S in ie a D e e e m b e r 1 9 94
离体条件下 L 一色氨酸和叫噪丙酮酸诱导拐芹 ( A n g iel ca
oP ly m or hP
“ M aX im )根切段直接形成胚状体的初步研究
汤 国庆 李文安
(中国科学院上海植物生理研究所 , 上海 2 0 0 0 3 2)
一般认为 , 卜色氨酸 ( L一 T r y p t o p h a n )为植
物体内合成生长素的前体物之一 〔`一 ” ] , 而叫噪
丙酮酸 ( I n d o l e 一 3一 p y r u v i e a e i d )为中间产物 [` j 。
目前 , 有关 I A A 的前体物究竟是什 么仍处于
争论之中 [” 一 8 ]。 本文以拐芹 ( A雌 e不i e a 户元夕m o -
rP h o) 的根作为供 试 材 料 , 在 含 有 L一T rP 或
I P A 和 K T 0 . 2 5 m g / L 的 M S 培 养基上 , 可直
接诱导它产生胚状体 。 在没有外源生长素的条
件下 , 仅利用 L 一 T rP 及 I P A 作为 调节 物质 ,
使根切段直接产生胚状体尚未见报道 。
材 料 和 方 法
拐芹 ( A 九 g日主e a p改 y执 o r p人a M a x im ) 系庐山野生
品种 , 为我国所特有 。
以 M S 培养基为基本培养基 , 其中 I A A 、 I P Y 为
过滤灭菌 , L - T rP 为高压灭菌。
采用制备的无菌苗 , 株高约 5 c m , 切 取 距 根 尖
1 c m 处的根切段 0 . 5一 1 c m 作为外植体 , 接种 M S 培
养基上进行培养 , 培养温 度在 22一26 ℃ , 光强 4 0 0 0
x1
, 每天光照 16 h , 3 5一40 夭统计结果 。
实 验 结 果
一 、 根切段 ! 接形成 胚 状体 与 L 一 jlr p 的
作用
在 M s 培养 基 附加 L 一 T r p 2 m g / L 和 K T
。 . 2 5 m g / L 时 , 就可以诱导根切段 直接产生胚
状体 , 而单独 L一 T rP 或 K T 时 , 则无此现象 ,
外植体不久就褐化死亡 。 当卜T rP 的浓度变化
时 (2 一 80 m g / )L , 产生胚状体的块数与 卜 T rP
浓度的增加 , 呈钟罩形趋势 。 当 -L T rP 浓度范
围在 2一40 m g / L 内 , 产生胚 状体的块数与 L -
T rP 浓度的增加 , 呈正相关。 其中 L一 T pr 的最
适浓度在 40 m g / L , 其胚状体的块 数与外植体
数的比例达 1 0 % 。 看 来 , 离体条 件下 , L -
T pr 与根切段直接形成胚状体有一定的关系 。
实验统计结果如表 1 , 图版中图 1 示体细胞直
接形成胚状体 , 图版中图 2 示形成的子叶胚 。
二 、 根切段 ! 接形成胚状体与 IP A 的作用
如表 2 所示 , 当 接种 到无激素 M S 。 或仅
含有 I P A 或 K T 0 . 25 m g / L 的培养基上时 , 外
植体不分化并褐化 死亡 。 当 I P A 为 6 m g / L 和
K T 为 o . 25 m g / L 时 , 外植体可产生 胚状体 ,
其百分 比 为 2 8% 。 当 I P A 为 2 0 m g / L 和 K T
为 0 . 2 5 m g / L 时 , 分化百分比为最高 , 达 40 % 。
在 I P A 达到 3 0 m g / L 和 K T 0 . 2 5 m g / L 时 , 分
化百分比下降到 15 % , 当 I P A 为 40 m s/ L 和
K T 0
.
25 m g / L 时 , 分化百分 比降 至 O % 。 可
见 , I P A 浓度范围在 6一 20 m g / L 时 , I P A 浓
度的增加与分化百分比有一些相关性 。 实验结
果统计见表 2 , 图版中图 3 、 图 4 示外植体直
接形成的胚状体 。
三 、 I A A 在拐芹根体细胞胚胎发生中的作

I A A 浓度在 1一 3 m g / L 范围 内 时 , 15 天
引起外植体褐化 , 当 I A A 在 4一 5 m g / L 浓 度
本文 1 09 3 年 1 2 月 2 0 日收到。 19 9 4 年 6月 15 日
接受。
4 12 汤国庆 李文安 2 7卷
裹 1不同浓度的卜色橄玻对拐芹根切段分化的影晌
T叻l el T h e ef f e et s o里v r a i o u s e on cn et r at i on of L尸T rP on t h ed f f i er en t i at i on
of r o ot s e gmn et s of An gd 宜 e aP沉夕 mr oP h a M ax im
处 理
T r e at m en t
( m g /L )
外植体数
N U mb r e
of eP xln at
胚状体数
N u mb er of
e mb r yo id
分化百分比
R at t o
( % )
n( Iù八。óDné甘 0
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1l
10M S
o
L ` T r P 2 0
K T O

2 5
L
~ T r P Z + K T O

2 5
L ~ T r P S + K T O

2 5
L ~ T r P 1 6 + K T 0
.
2 5
L ~ T r P 3 0 + K T 0
.
2 日
L ~ T r P 4 0 + K T O

2 5
L产T r P 5 0 + K T O 。 2 5
L - T r P 60 + K T Q

2 5
L 一 T r P 80 + K T O ` 2 5
T a b l e Z
裹 2 不同浓度叫噪丙峭酸对拐芹根切段分化的影响
T h e e f f e e t o f v ar i o u s e o n e e n tr a it o n o f I P A o n ht e d i f f e r e n ti a t i o n
o f r o o t s e g m e n t s o 里 A 玲g此宝e a P沉夕m o r P孔a M a x im
处 理
T r e a t m e n t
( m g L/ )
外植体数
N U m b e r
o f e x P la n t
胚状体数
N U m b e r o f
e m b r y o i d
分化百分比
R a t iO
( % )
02804巧。né00月任.6
1.上O`
4065M S
o
I P A 1 0
K T O

2 5
I P A Z + K T O

2 5
I P A 6 + K T O

2 5
I P A 1 0 + K T 0
.
2 5
I P A 2 0 + K T O

2 5
IP A 30 + K T O

2 5
I P A 4 0 + K T 0
.
2日
衰 3
T的 l e 3
不同浓度的 I A A 和 K T 0 . 2 5 m g /L
对拐芹根切段分化的影晌
T h e e全f加 t o f v 鱿i o u s e o n C e n ,
加 . t i o n o f I A A a n d K T O。 25
m g L/
o n ht e d i f f e r e n柱a ti on o f
r 0 0 t s e gm en t s o f A玲 ge1 东e a
P O妙机。即 h a n M a x im
范围内时 , 分化百分比仅为 10 %和 2 % , 实验
结果统计如表 3 所示 。
一般地说 , 鉴于 I A A 稳定性较差等因素 ,
组织培养中很少使用 I A A 。 在拐芹根切段为供
试材料 , 外源 I A A 作用 低于 L 一 T rP 或 I P A ,
原因尚不清楚。
g /LI A A ( m / ) 0 1 2 3 4 5
外植体数
N o
。 e x Pl a n t
胚状体数
N o
. e刃。 br y o i d
讨 论
6 0 6 0 6 0 6 0 6 0 6 0
0 0 0 0 5 2
在胡萝 卜体细胞胚胎 发生 系统 中 , 将 2 ,
4 一 D 诱导出的胚性愈伤组织接 种 至 无激 素的
4期 离体条件下 L一色氨酸和吼噪丙酮酸诱导拐芹根切段直接形成胚状体的初步研究
M S
。 培养基后 , F u jiln u r a 和 K o m a m i n 认为 内
源 I A A 的极性分配是诱导体细 胞胚 胎发生的
关键因素 [。 ] 。 T o d J . C o o k 也认 为 内源 I A A
的极性运输导致原胚细胞团 的 极性产生 [` 。 ]。
iL u 等报道在芥菜中有相同的结果 , 并提出生
长素 l( A A )的合成和极性运输是导致球形胚至
子叶胚转变的重要因素 lt J。
氨基酸对植物体细胞胚胎发生具有一定的
促进作用 , 尤其是 卜脯氨酸和 L一色氨酸 , 具
有促进 2 , 4一 D 诱导形成 胚 性愈 伤 组 织 的作
用 [` ’ , ` 3 1。 其机制仍不清楚 O
在内源生长素方面 , K u t ac ke 详细地 阐述
了 L一 T r p 和 I P A 是植物生物合成 I A A . 的前体
物和中间产物 I’ 名 ] 。 有 关这方面 , 虽已积累了
一些资料 , 但看法很不统一 。 在玉米种子中 ,
丝氨酸 、 色胺和叫噪一 3一酸肌 醇 醋都 能 作 为
I A A 的前体物 [ . , ’ “ ] 。 M e Q u e e n 一M a s o n 报 道在
豌豆质体中有内源 I A A 的生物合成 , 并且 D -
T rP 作为前体物的可能性优于 L一 T rP t “` , ;同样 ,
在大麦中 , T s u r us a ik 也有类似的报道:l8] 。 aL w
发现在豌豆中 , L一T rP 合成 I A A , 必 需 附加
G A :
, 而 D 一 T r p 则否 [` , 1。 但 aB ldi 用膨胀浮萍
为材料 , 分别用 -L 〔` 6N 〕t r y pt o户 a n 和 D 一仁“ N 〕
、 y tP oP ha n 进 行饲喂实验 , 发现 L 一 T pr 为 I A A
的 前体较 D一 T rP 更直接 , 并 且 认为 色 氨 酸
并非是 I A A 生物合成的限制因子 [ ` “ , 。 看来 ,
植物体内生物合成 I A A 的前体物及 其 途径仍
不清楚 , 可能不同的植物材料 , 在不同的发育
时期和不同的离体条件下各不相同 。 在植物体
细胞胚胎发生的研究中 , M ic h al cZ u k 等发现胡
萝 卜在原胚细胞分化早期 , 内源 I A A 生 物 合
成是由 L一 T rP 作前体的 , 并认 为其内源 I A A
含量变化导致了体细胞胚 胎 发 生 I ’ 。 ] 。 此外 ,
st e w a dr 首次在离体条件下用 I A A 诱导胡萝 卜
产生体细胞胚 [2 “ 】。 说明 I A A 在体细 胞胚的形
成中起着重要的作用 。 我们在离体条件下使用
卜T rP 和 I P A , 可以使拐芹根切段直接产生胚
状体 , 但 I A A 作用小于 卜 T rP 和 I P A , 拐芹
根切段体细胞胚胎发生 过程中 , L一 T :rP 、 IP A
及 I A A 的关系尚待探讨 。
摘 要
以拐芹根切段 0 . 5一 I c m 作为外植体 , 在
M S 附加 L 一色氨酸 ( L一 T r p ) 2一 8 0 m g / L 或弓I噪
丙酮酸 ( I p A ) 6一 3 0 m g / L 和激动素 ( K T ) 0 . 2 5
m g / L 的培养基上均可以诱导直接形成胚状体 。
其中 , L一色氨酸的最适浓度为 40 m g / L , 而叫
噪丙酮酸的最适浓度为 20 m g / L 。 在 M s 附加
叫噪乙酸 I A A 和激动素 K T 的培养基上 也 可
以导致体细胞胚胎的直接产生 , 但频率低于前
两者 。
关 . 词 : 拐芹 培养甚 色妞 . 叫 . 两二体细胞胚胎发生
参 考 文 献
〔 1 〕 G o r d o n , S · A . , 1 9 5 8 , I n t e r e e l l u l a r l o ca ·
1坛 a t i o n o f t h e t r y P t o Ph a -n in dO l e a e e t a t e
e n z y m e s y s r e m
.
P不a ” t P h州 O乙0 9熟 33 :
23一 27 。〔 2 〕 G i b s o n , R . A . , E . A . S e h n e i d e r , F . W i -
g h t m a n
,
1 9 72
,
B io s y n t h e s i s a n d m e t a bo
·
11sm o f in dO I卜 3 y卜 a e e t iC ac i d 兀 。 I n v i -
v o e x P e r im e爪 5 w i t h l℃一 l a b e l l e d P r e e u -
r s o r o f I A A in t o m a t o a n d b a r l y s h o o t
.
J o u r n a 不 E却 e r官m e n t 01 B o t a 林 y , 2 3*
38 1一3 9 9 。〔 3 」 M o n t e i r o , A . M . , A . C r o z 豆e r a n d G .
S a n db e r g
,
1 98 8
,
T h e b i o s y n t h e s i s a n d
e o n fug a t io n o f i n d ol e一 3一 e e t i e a e i d i n
g e r m in a t i n g s e e d an d s e e id in s s
` _ O f 珑 1-
b e r g i a d of i eh o p e t a l a
.
p忍a n才a 一二_ 1 74 : 5 61 .
[ 4 〕 T r u e l s e n , T . A . , 1 9 72 , I n d o l e一 3一 y ur ·
v i e a e i d a s a n in t e rm e d i a t e i n t h e e o n
-
v e r s i on
o f t r y P t o Ph a n t o i n d o l e一3 · a e e t i e
a e i d l

S o m e e h a r a e t e r i s t i e s o f t r y P t o
·
P h a n t r a n s a m i n a s e f r o m m un g b
e a n s e e ·
d l i铭 . 尸耘那玄01 0 9`a lP a 件 t u琳 , 2 6 : 2 89一
2 95

〔 5 〕 H al , P . L · , R . S · B an d u r s k i , 19 7 8 , M o -
v e m e n t o f 认 d o l e一 3一 a e e t i e a e i d an d t r y -
P t o P h a -n d
e r i v e d in d o l e · 3一 e e t i e a e i d
f or m t h e en d o SP e r m t o t h e s h o t o f Z已a
热。那 L . lP a n七 p h y s弓况 。 g y , 61 : 4 2 5 .
〔 6 马M o m o no k i , Y · , 1 0 5 5 , S e r in e a n d t r y p ,
41 4汤国庆 李文安 27 卷
, . ` 卜响 . 月门 . 阳州 . ` `目 目. ~
-
. 一一 月- - ~ ~ ~ . ` . . , . . . . . 网. ` .一 ` ~ , . . . . . 网 . . . . , . 叫` . . .-一 ~ ~ 一一一一一一~一一 .一- ~ , ~~目 . ~ ~~ - 一一 ~ ` . . , ~ . , , .一 月. .t a m i n e a s s e e d a u x i n P r e e u r s o r s . P乙a 竹t尸人yS 沁 IgO .y 7 7 ( 4 s u p P . ) 2 : 5 .[ 7 j N o w a k e i , J . , R . 5 . B a n d u r s k i , 1 9 8 0 ,M y o 一 i n o s i t o l e s t e r s o f i n d o l e 一3一 a e i d 乏轰ss e e d a u x i n P r e e u r s o r s o f Z e a 机 a夕s L ·
月 a n t P h y 吕玄配o g y , 6 5 : 4 2 2一4 2 7 .
[ 8 二 T s u r u s a k i , K . , 5 . W a t a n a b e , N . S a k u r a i
an d 5
.
K u r a i s h i
,
1 9 9 0
,
C o n v e r s i
o n o f
D 一 t r y P t o P h a n t o i n d o l e一3一a e e t ie a e id i n
e o 1OP t il e s o f a n o r m a l a n d a s e m i

d w
-
a r f b a r e l y ( H o r d e n m v ul g a r e ) s t r a i n
.
P hy
s京。乙0 9云a P Za u t u 协 , 7 9 : 2 2 1一 2 2 5 .
[ 。 〕 F u j im u r a , T · a n d A · K o m a m i n , 1 9 7 9 ,
Ivn
o l v e m e n t o f e n d o g e n o u s a u x i n i n
s o m a t i e e m b r y o g e n e s i s i n a e a r r o t e e l l
s u s Pe n s i o n e u l t u r e
.
2
.
P f乙a 托 z e 林 P瓦y s玄0 2.
B d
. ,
9 5
。 s 。 1 3一 1 9 。
[ 1 0 ] T o d d
,
J
,
C o o k e
,
R
.
H
.
R a e u s e n a n d J
.
D
.
C o h e n
,
1 9 9 3
,
T h e R o l e o f A u x i n i n
1P 幼 t Em br yo g印 e s i s . hT e lP a n t C e ZI, 5 :
1 4 9 4一 1 4 9 5 。〔11〕 L i u C一m ; X u Z 一h ; a n d C h u a N 一H .
1 9 9 3
,
A u x in P o l a r t r a n s P o r t 15 e s s e n t i a l
f o r t h e e s t a b l i s h m e n t o f b i l a t e r a l s u m
-
m e t r y d u r i n g e a r l y P l a n t e m b r y o g e n e s i s
.
T h e P l a时 C e乙, 5 : 6 2 1一 6 3 0 .
L1 2〕 C o n s t a n e e N . C h o w dh r y , A . l e . T y a g i ,
N
.
M a h e s h w a r i a n d 5
.
C
.
M
a h e s h w a r i
,
1 9 9 3
,
E f f e e t o f L巾 r o l i n e a n d L 一 t r y P -
t o Ph a n o n s o m a t i e e m b r y o g e n e s i s a n d
P l a n t l e t r e g e n e r a t i o n o f r i e e
·
P Za 林 t C e Z乙,
T东, s“ e a 牲 d O r g a n C u乙才u r e , 32 : 3 5 7一
3 61
.
〔1 3〕 S i r iw a r d a n a , 5 . , M . W . N a b o r s , 1 9 8 3 ,
T r y P t o Ph a n E n h a n e e m e n t o f S o m a t i e
E m b r y o g e n e s i s I n R i e e
.
P正a n t p h y s东。不0 9夕 ,
73 一 1 4 2一 1 4 6 .
[ 1 4〕 K u t a e e k , M . , 1 9 8 8 , E n z y m e s o f A u x in
S y n t h e s i s i n P ] a n t
s a n d T i s s u e C u l t u r e
I n

P h y s i o l o g y a n d B i o c h e m i s t r y o f A u
-
x i n s i n P l a n t
” ,
K u t a e e k M
. ,
B a n d u r s k i
R S
. ,
k r e k u l e J
.
e d s
,
A e a d e m i a P r a h a
-
P 弓7一 6 4 .
〔1 5〕 N o w a e k i , J . , R . 5 . B a n d u r s k i , 1 9 8 0 ,
M y o一 i n o s i t o l e s t e r s o f i n d o l e一 3一 a e i d a s
s e e d a u x i n P r e e u r s o r s o f Z e a m a y s L
.
P l a n 蓄 P h y s `o 艺o g y , 6 5 : 4 2 2一 4 27 。
〔1 6〕 M e Q u e e n 一M a s o n 5 . J . , R . H . H a m i l t o n ,
1 9 8 9
,
T b e b i o s y n t h e s i s o f i n d o l e一3一a e e ·
t i e a e i d f r o m D 一 t r y P t o Ph a n i n al a s k a
P e a P l a s t i d s
.
P乙a n 才 C e Z不 P h夕s `班 0 9夕, 30
( 7 ) : 9 9 9一 1 0 0 5 。
二1 7」 L a w , D . M . , 1 9 8 7 , G i bb e r e l l i n 一 e n h a n e e d
i n d o l e一 3一 a e e t i e a e i d b i o s y n t h e s i s : D 一
t r y P t o P h a n a s t h e P r e e u r s o r o f i n d o l e一
3一 a e e t i e a e i d . P hy s云0 20 9京a P l a “ 蓄a r u m -
70 : 6 2 6一 6 3 2 。
L1 8〕 B a ] d i , B . G . , B . R M a h e r , J . P . S l o v i n
a n d J
.
D
.
C o h e n
,
1 9 9 1
,
S t a b l e i s o t o P e
l a b e l l i n g
,
i n v i v
o , D 一 a n d L 一 t r y P t o P h a n
p o o l s i n ]
em n a g i b b a a n d t h e I o w i n e o r
-
P o r a t i o n o f L a b e ] i n t o i n d o l e 一3一a e e t i e
a e i d
.
P不a n 右 P h y s宕。正o g y , 9 5 : 1 2 0 3一 1 2 0 8 .
仁1 9〕 M i e h a l e z u k , L . , D . M . R i b n i e k y , T . J .
C o o k e
,
J
.
D
.
C
o
h
e n , 1 9 9 2
,
R e gu la t i o n o f
i n d o l e一 3一 a e e t i e a e i d b i o s y n t h e t i e P a t h 一
w a y s i n e a r r o t e e l l e u l t u r e s
. 凡 a ” t
P勺 s止。乙o g y , 1 0 0 : 1 3 4 6一 1 3 5 3 。
〔2 0〕 S t e w o r d , F . C . , M . 0 . M a P e s , K . M e a -
r s , 1 9 5 8
,
G r o w t h a n d o r g a n i z e d d e v e
-
l o Pm e n t o f e u l t u r e d e e l l s 亚 . O r g a n i z a -
t i o n i n e u l t u r e s g r o w n f r o m s u s P e n d e d
C e l l
.
A m e r玄e a 林 J o “ r 扎 a l o f OB 七a t y , 4 5:
7 0 5一 7 0 8 。
4期 离体条件下 L一色氨酸和叫噪丙酮酸诱导拐芹根切段直接形成胚状 体的初步研究 415
侧. 匕
T H P ER EL IM IN AR Y ST UD Y ON T H ED IR E CT L Y S O M A一
T I C E MB R Y O G EN E S Is OF T H ER 0 0T S E G M EN T
IN D U C EDB YL一T R YP T OP H AN AN D IN D OL E一
3一P R Y U VI C A C刀D IN AN G石 L I CP OL Y一
M OR P H A M A XIM
勺 . `
T an g G u o一 q in L i W en 一 an
(Sh口雌 h a止 In s公塞t ut e o l月 n at P h y s i班绍夕 , cA a d已水京a s 云n 艺e a , S h a雌瓦a 宕 2 0 0 0 32 )
A B S T R A C T
T h e r o o t s eg m e n t s o f A n g e不玄ca OP 乙y -
m or Ph
a M a x i n
, a s e x P l a n t
,
w e r e i n e u b a t e d
o n M u r a s h i g e a n d S k o o g
l s (M S ) 找一de i u m
s u P P lem
e n t e d w i t h L一 T r P ( L一 t r y P t o
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P h a n )
2一 8 0 m g / L o r I P A ( I n d o l e一 3一 P y r u v i c
a e i d ) 2一 4 0 m g / L a n d K T 0 . 2 5 m g / ]乙, a n d
e o u l d u n de r g o d j r e e t l y s o m a t i e em b r y o g e n e
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c o n c e n t r a t i o n o f L 一 T r p w a s a b o u t 4 (一m g / L
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S o m a t i e e m b r y o ge ne s i s
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勺诊
41 6汤国庆 李文安 27卷
图 版 说 明
图 版
图 I L一印 2一 80m/ g L+ KT 0 .5 2m g/ L诱导根直接形成的球形胚及鱼雷胚
图 Z L产 T rp Z一 80m g/ L十 T K0 .5 2m/ s L诱导根形成的子叶胚
图 3I PA Z一 40m g/ L十 KTO .5 2m g/ L诱导根切段直接形成胚状体
图 I 4 PA Z一 40m g/ L十 T KO .5 2m g/ L诱导形成的子叶胚

E X P LA A NI TO NO I F FG U RE S
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5 2m g/ L
T he e m b ry o d ifo rm e d d ire e t ly f ro m t he o o r ts e g m e n to nM S m e d iu mu s P P le m e n te dw it h
I PA Z一 4 0m g/ L+ KTO 。5 2m g/ L
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e e o ty le do n一 s tag e em b ry o d f io rm e d d ie e r t ly fo rm t he ro o ts e gm e n to nM S m e du im
su P P le m e n te dw it hI PA Z一选 0m g/ L+ T K0 . 2日m g/ L
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4 1 6 汤国庆 李文安2 7卷
图 版 说 明
图 版
图I L一印2 一 8 0m g /L+ KT 0.5 2 m g /L诱导根直接形成的球形胚及鱼雷胚
图Z L产Tp rZ 一 8 0m g /L十T K 0.5 2 ms /L诱导根形成的子叶胚
图3I PA Z 一4 0m g /L十 KT O.5 2 m gL /诱导根切段直接形成胚状体
图I 4 PA Z 一4 0m g /L十T K O.5 2 m g /L诱导形成的子叶胚

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1


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3


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o bl uar 一n a dt o rp e do 一st age e m bryoi dfo r me d di re ct l y fro mt he ro ot s e gme nt o n MS
me di ums up p le me nt e dw it h L一T rpZ 一5 0m g /L+ T K 0
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5 2 m g /L
Tho e et yle do n 一st age e m bryoi dfo r me d di e e rt l y fo r mt ho o e rt s e gme nt o n MS mei dum
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e nt e dw it h L一T rZp 一 8 0m g /L+ T K 0
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5 2 m g /L
The e m bryoi dfo r me di dre et l y fro mt ho o e rt s e gme nt o n MS mei dums u P Ple me nt e dw it h
I PA Z 一4 0m g /L+ KT O。5 2 m g /L
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o e et yle do n 一st age e m bryoi f do r me d di e e rt l y fo r mt he ro ot s e gme nt o n MS me di um
s u P Ple me nt e dw it hI PA Z 一选 0m g /L+ T K 0.2 日 m g /L
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