全 文 ：· 42 · Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2015 Vol． 15 No． 1 中国医院用药评价与分析 2015 年第 15 卷第 1 期
高效液相色谱 -蒸发光散射检测法测定莕菜中白桦脂酸的含量
蔡 颖* (南京市白下区建中中医院药剂科，南京 210004)
中图分类号 Ｒ927 文献标志码 A 文章编号 1672 － 2124(2015)01 － 0042 － 03
DOI 10. 14009 / j． issn． 1672-2124． 2015． 01． 014
摘 要 目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD 法)测定莕菜中白桦脂酸的含量。方法:采用 Hypersil
C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-0. 2%甲酸(V ∶ V = 80 ∶20) ，体积流量为 1. 0 ml /min;柱温为 30 ℃;蒸发光散
射检测器参数:漂移管温度为 40 ℃，氮气流速为 2. 0 L /min。结果:白桦脂酸在 0. 130 ～ 0. 650 μg，线性关系良好，平均回收率为
99. 17%。结论:HPLC-ELSD法简便、准确、重现性好，可用于莕菜的质量控制。
关键词 高效液相色谱-蒸发光散射检测法;莕菜;白桦脂酸
Determination of Betulinic Acid in Shield Floatingheart Herb by HPLC-ELSD
CAI Ying(Dept． of Pharmacy，Nanjing Baixia District Jianzhong Hospital of Traditional Chinese
Medicine，Nanjing 210004，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish HPLC-ELSD method for determination of betulinic acid in Shield
Floatingheart Herb． METHODS:The determination of betulinic acid in Shield Floatingheart Herb was performed on
Hypersil C18 chromatographic column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)with mobile phase consisting of methanol-0. 2%
formic acid(V ∶ V = 80 ∶ 20)at flow rate of 1. 0 ml /min and column temperature of 30 ℃ ． An evaporative light-
scattering detector(ELSD)was used as detector with drift tube temperature of 40 ℃ and gas flow rate of 2. 0 L /min．
ＲESULTS:The linear range of betulinic acid was 0. 130-0. 650 μg，and its average recovery rate was 99. 17% ．
CONCLUSIONS:The HPLC-ELSD method is simple，accurate and reproducible and it can be used for quality control
of Shield Floatingheart Herb．
KEYWOＲDS HPLC-ELSD;Shield Floatingheart Herb;Betulinic acid
* 副主任药师。研究方向:药学。E-mail:njcyworld@ sina． com
莕菜(Nymphoides peltatdum(Gmel．)O． Kunt) ，又称荇菜、
水葵、水镜草、水荷叶，为睡菜科植物莕菜的全草，具有清
热、解毒、消肿、利尿之效，临床主要用于治寒热、热淋、痈
肿、火丹［1］。白桦脂酸为莕菜的主要有效成分之一，具有
抗菌、降血脂及抗疟疾等活性，对黑色素瘤及脑肿瘤等多
种肿瘤有强烈的毒杀效应，且对正细胞无杀伤力，为治疗
艾滋病、肿瘤的新药［2］。本文参考文献，建立了高效液相
色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD 法)测定莕菜中白桦
脂酸的含量［3-11］。
1 材料
1. 1 仪器
Agilent 1100 型高效液相色谱议，Chem-stations 工作站
(美国 Agilent 公司) ;梅特勒-托利多 AB135-S 电子分析天平
(瑞士梅特勒-托利多集团) ;美国 ALLtech 2000 型蒸发光散射
检测器;SG1200H超声波清洗器(上海冠特超声仪器厂) ，DL-1
溶剂过滤器(天津市东康科技有限公司)。
1. 2 药品与试剂
白桦脂酸对照品经归一法测定含量为 98. 30%(天津马克
生物技术有限公司提供，批号:BH20100409) ;莕菜药材采摘自
云南省丽江市，经南京市中医药大学中药鉴定教研室鉴定为
为睡菜科植物莕菜 Nymphoides peltatdum(Gmel．)O． Kunt 的全
草，现存于南京市中医药大学，标本号为 b20110453。甲醇为
色谱纯，水为高纯水，所用其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Hypersil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为
甲醇-0. 2%甲酸(V ∶ V = 80 ∶ 20) ;流速为 1. 0 ml /min;体积流
量为1. 0 ml /min;柱温为 30 ℃。蒸发光散射检测器参数:漂移
管温度为 40 ℃，氮气流速为 2. 0 L /min。在此色谱条件，白桦
脂酸和样品中的其他物质可以达到良好的分离，见图 1。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备:精密称取白桦脂酸对照品 2. 6 mg
适量，置于 100 ml容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀释至刻度，振
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A．对照品;B．样品
A． reference sbustance;B． sample
图 1 白桦脂酸的 HPLC图
Fig 1 HPLC chromatograms of betulinic acid
荡摇匀。加甲醇稀释至刻度，摇匀，浓度为 0. 026 mg /ml，作为
对照品储备液。精密量取 5 ml 于 10 ml 的容量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，浓度为 0. 013 mg /ml，作为对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备:取莕菜样品 1 g，过 40 目筛，精密
称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 100 ml，密塞，称定质量，
超声处理(250 W，40 kHz)提取 30 min，再称定质量，加甲醇补
足减失质量，摇匀，经 0. 45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液作为
供试品溶液。
2. 2. 3 线性关系:分别精密吸取白桦脂酸对照品溶液
(0. 013 mg /ml)1、2、3、4、5 ml置于 100 ml容量瓶中，加甲醇稀
释置刻度，摇匀，精密吸取 10 μl，进样测定峰面积。以峰面积
常用对数值为为纵坐标 Y，以进样质量浓度的常用对数值为横
坐标 X，进行线性回归，得回归方程为白桦脂酸 Y = 5 689. 6X －
3. 85(r =0. 999 7)。结果表明，白桦脂酸在 0. 130 ～0. 650 μg /ml
范围内线性关系良好。
2. 2. 4 精密度试验:精密量取白桦脂酸对照品溶液 10 μl，按
“2. 1”项下色谱条件，重复进样5次，测定峰面积，结果白桦脂酸含
量的相对标准偏差(ＲSD)为 1. 02%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 5 稳定性试验:取供试品溶液，按“2. 2. 2”项下方法配
置，放置 0、2、4、6、8 h 后，精密吸取样品溶液 1 μl 进样，按
“2. 1”项下色谱条件测定，结果白桦脂酸含量的 ＲSD 为
0. 86%，表明供试品在 8 h内稳定性，可以满足试验要求。
2. 2. 6 重复性试验:分别取莕菜药材粉末样品 6 份，按
“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”项下色谱条件进
样测定，结果测定白桦脂酸含量的 ＲSD为 1. 20%，表明该方法
的重复性符合要求，适合样品中白桦脂酸的提取和分析，见
表 1。
表 1 重复性试验结果
Tab 1 Ｒepeatability of test results
项目
样品编号
1 2 3 4 5 6
白桦脂酸含量 /(μg /g) 0. 508 0. 511 0. 517 0. 525 0. 512 0. 520
2. 2. 7 加样回收试验:精密称取已知含量莕菜药材 6 份，每
份约 0. 5 g，精密测定后，加入白桦脂酸对照品储备液 1. 0 ml
按“2. 2. 2”项下方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件进行
分析测定，计算回收率。试验结果表明，该测定方法回收率良
好，见表 2。
表 2 白桦脂酸加样回收试验结果(n =6)
Tab 2 Ｒesults of the recovery test for betulinic Acid(n =6)
样品编号 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
1 0. 025 5 0. 026 0 0. 051 2 98. 85
2 0. 025 8 0. 026 0 0. 051 6 99. 23
3 0. 025 4 0. 026 0 0. 051 1 98. 85 99. 17 0. 29
4 0. 025 7 0. 026 0 0. 051 5 99. 23
5 0. 025 8 0. 026 0 0. 051 7 99. 61
6 0. 025 6 0. 026 0 0. 051 4 99. 23
2. 2. 8 样品测定:按“2. 1”项下色谱条件，精密吸取白桦脂酸
对照品溶液，供试品溶液各 10 μl，分别测定峰面积，按外标法
计算白桦脂酸的含量，测得白桦脂酸的含量为 0. 517 μg /g。
3 讨论
3. 1 超声提取时间的选择
以超声 20、30、45 和 60 min 进行对比，结果表明，超声
30 min已经提取完全，故选择超声 30 min 作为本方法提取
时间．
3. 2 提取溶剂和方法的筛选
在供试品溶液制备过程中，对甲醇、无水乙醇、95%乙醇
等不同的提取溶剂进行优选，最后根据提取效果选择了甲醇
作为提取溶剂;对超声处理、回流、索氏提取、冷浸等不同的提
取方法进行优选，考虑到方法的简捷性，最终选择回流提取作
为供试品溶液的提取方法［3，12］。
3. 3 流动相的筛选
考察了甲醇-1%冰醋酸水溶液(V ∶ V = 37 ∶ 63)、甲醇-0. 1%
甲酸水溶液(V∶ V =30 ∶ 70)、甲醇-0. 4%磷酸(V ∶ V = 47 ∶ 53)等
组成的流动相，实验结果表明，以甲醇-0. 2% 甲酸(V∶ V =
80 ∶ 20)为流动相时，分离效果较好，确定为流动相系统。
3. 4 测定方法的筛选
白桦脂酸为 5 环 3 萜类成分，分子中仅存在一个双键，在
紫外光线(UV)波长为 207 nm处有末端吸收。采用 HPLC-UA
法进行检测时，受流动相影响较大，基线不够理想，检测的灵
敏度较低;采用 HPLC-ELSD 法进行检测时，可以使流动相在
检测器内挥发成气体，只对挥发性小于流动相的目标成分产
生影响，从而消除流动相在末端吸收带来的影响，获得理想的
基线和灵敏的检测度［4］。
3. 5 检测器参数的选择
雾化气体流速及漂移管温度是影响 ELSD 检测的 2 个重
要可调节参数。雾化气体流速太低，会形成大量液滴，导致噪
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櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵
音信号;流速太高，导致信号响应降低。漂移管温度太低，溶剂
挥发不够完全;太高，则会使检测器响应下降［5］。通过不同漂
移管温度和不同流速下白桦脂酸信号的对比和基线情况，确定
了 ELSD检测器的参数。
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(收稿日期:2014-05-29)
木丹颗粒联合贝前列素钠、依帕司他治疗糖尿病
周围神经病变的疗效观察
冯翠娥1* ，石振东2#(1．铁法煤业集团总医院内分泌科，辽宁 铁岭 112700;2．铁法煤业集团总医院干部病房，
辽宁 铁岭 112700)
中图分类号 Ｒ971;Ｒ973 文献标志码 A 文章编号 1672 － 2124(2015)01 － 0044 － 03
DOI 10. 14009 / j． issn． 1672-2124． 2015． 01． 015
摘 要 目的:观察木丹颗粒联合贝前列素钠、依帕司他治疗糖尿病周围神经病变的临床疗效及安全性。方法:将 152 例糖尿病
周围神经病变患者，以随机数字表法分为 2 组各 76 例。对照组患者口服贝前列素钠 40 μg、1 日 3 次 +依帕司他 50 mg、1 日 3 次，
治疗组患者在对照组的基础上加用木丹颗粒 7 g、1 日 3 次、口服。2 组均以 3 周为 1 个疗程，观察治疗前、后 2 组患者的临床症状
及肌电图改善情况。结果:治疗组、对照组患者总有效率分别为 93. 4%(71 /76)、78. 9%(60 /76) ，差异有统计学意义(P ＜ 0. 05)。
治疗后，2 组患者正中神经和腓总神经的运动神经传导速度和感觉神经传导速度较治疗前均有明显改善，差异有统计学意义(P ＜
0. 05) ;且治疗组较对照组改善更明显，差异有统计学意义(P ＜ 0. 01)。2 组患者均未见明显的不良反应。结论:木丹颗粒联合贝
前列素钠、依帕司他治疗糖尿病周围神经病变的疗效优于贝前列素钠、依帕司他联合治疗，且无明显不良反应。
关键词 糖尿病周围神经病变;木丹颗粒;联合治疗;疗效
Efficacy of Mudan Particles Combined Beraprost and Epalrestat for Diabetic Peripheral Neuropathy
FENG Cui-e1，SHI Zhen-dong2 (1． Dept． of Endocrinology，Tiefa Coal Group General Hospital，
Liaoning Tieling 112700，China;2． Dept． of Cadres Ward，Tiefa Coal Group General Hospital，
Liaoning Tieling 112700，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To evaluate the clinical efficacy and safety of Mudan particles plus beraprost and
epalrestat for diabetic peripheral neuropathy． METHODS:152 patients with diabetic peripheral neuropathy were
randomly divided into two groups of 76 cases each． The patients in the control group were orally administered with
beraprost(40 μg)t． i． d plus epalrestat(50 mg)t． i． d alone，while the patients in the treatment group were orally