全 文 ：［收稿日期］ 20120622(003)
［第一作者］ 李慧宁，硕士研究生，从事药物分析研究，E-mail
lihuining_1219@ 163． com
［通讯作者］ * 郭兴杰，教授，博士生导师，从事药物分析研究，
Tel:024-23986285，E-mail:gxjhyz@ yahoo． com． cn
HPLC-ELSD同时测定链荚豆中胡萝卜苷和 β-谷甾醇含量
李慧宁，刘洪蛟，付小帅，姜珍，郭兴杰*
( 沈阳药科大学 药学院，沈阳 110016)
［摘要］ 目的:建立同时测定链荚豆中胡萝卜苷和 β-谷甾醇含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法，
色谱柱为 Diamonsil C18柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相甲醇-水(95∶ 5) ，流速 1. 0 mL·min
－1，漂移管温度 80 ℃，载气体积
流量 2. 5 L·min －1。结果:胡萝卜苷和 β-谷甾醇浓度分别在 10 ～ 100 mg·L －1(r = 0. 999 3)和 25 ～ 250 mg·L －1(r = 0. 999 1)线
性关系良好;平均加样回收率分别为 99. 5%，98. 9%，RSD分别为 2. 4%，2. 1%。结论:该法专属、简便、准确，可用于同时测定
链荚豆中胡萝卜苷和 β-谷甾醇，为链荚豆的质量控制提供依据。
［关键词］ 链荚豆;胡萝卜苷;β-谷甾醇;高效液相色谱-蒸发光散射检测法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)01-0119-04
Simultaneous Determination of Daucosterol and β-sitosterol
in Alysicarpus vaginalis by HPLC-ELSD
LI Hui-ning，LIU Hong-jiao，FU Xiao-shuai，JIANG Zhen，GUO Xing-jie*
(School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
［Abstract］ Objective:To develop a new method for simultaneous determination of daucosterol and
β-sitosterol in Alysicarpus vaginalis． Method:HPLC-ELSD method was used to determine daucosterol and
β-sitosterol． The separation was performed on a Diamonsil C18 column (4. 6 mm ×150 mm，5 μm)with methanol-
water (95∶ 5)as the mobile phase at the flow rate of 1. 0 mL·min －1 ． The temperature in drift tube was 80 ℃ and
the carrier gas flow was 2. 5 L·min －1 ． Result:The linear ranges of daucosterol and β-sitosterol were 10-100 μg·
mL －1 (r = 0. 999 3)and 25-250 mg·L －1 (r = 0. 999 1) ，respectively． The average recoveries were 99. 5%，
98. 9%，and RSDs were 2. 4% and 2. 1%，respectively． Conclusion:This method is selective，simple，accurate，
which can be applied for simultaneous determination of daucosterol and β-sitosterol in A． vaginalis．
［Key words］ Alysicarpus vaginalis;daucostero;β-sitosterol;HPLC-ELSD
链荚豆性凉，味甘、苦，具活血化瘀、接骨消
肿、清火解毒，利胆退黄、去腐生肌的功效，用于治
疗半身不遂、筋骨酸痛、慢性肝炎、蛇咬伤、跌打损
伤、疮疡溃烂久不收口等，为我国西南地区常用药，
疗效已得到肯定并应用于临床［1-3］。
目前国内外未见任何有关链荚豆化学成分及质
量控制方面的报道。本实验室从链荚豆中首次分离
得到两种单体化合物，经鉴定为 β-谷甾醇和胡萝卜
苷。其中 β-谷甾醇具有降胆固醇、消炎、退热、抗溃
疡及抗肿瘤作用［4-5］，可能为链荚豆的有效成分之
一;胡萝卜苷具有免疫调节活性，对白色念珠菌引起
的感染有抑制作用［6］。本文建立了同时测定链荚
豆中胡萝卜苷和 β-谷甾醇的方法，为链荚豆的质量
控制提供了可借鉴的方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱系统(pump L-2130，日本日立) ，
蒸发光散射检测器(ELSD 2000ES，美国 Alltech) ，
As3120B型超声波振荡器(天津 Autoscience 公司) ，
BS110S型电子天平(1 /万，德国 Sartorius公司)。
β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所，
110851-200403) ，胡萝卜苷对照品(实验室自制，纯
度≥99. 0%) ，甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有
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第 19 卷第 1 期
2013 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 1
Jan．，2013
限公司) ，重蒸水(实验室自制) ，其他试剂均为分
析纯。
3 批植物样品分别采自广西南宁、广西柳州、广
西桂林，经沈阳药科大学陆金才教授鉴定为链荚豆
Alysicarpus vaginalis(L．)DC．。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm) ，流动相甲醇-水(95 ∶ 5) ，流速 1. 0
mL·min －1，柱温室温，漂移管温度 80 ℃，载气体积
流量 2. 5 L·min －1，进样量 20 μL。见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. 胡萝卜苷;2. β-谷甾醇
图 1 链荚豆 HPLC
2. 2 供试品溶液的制备 将链荚豆粉碎，过 40 目
筛，取粗粉约 2. 0 g，精密称定，加入丙酮 32 mL，水
浴加热回流 5 h，趁热过滤，滤液倒入圆底烧瓶中，旋
转蒸发除去溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至 5 mL
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0. 45 μm 微孔滤过，即
得供试品溶液。
2. 3 溶液的制备 对照品储备液:精密称取胡萝卜
苷对照品 5 mg，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并
稀释至刻度，制成浓度 0. 100 mg·kg －1的对照品储备
液;精密称取 β-谷甾醇对照品 2. 5 mg，置于 10 mL
量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为
0. 250 mg·kg －1的对照品储备液。
混合对照品储备液的制备:精密称取胡萝卜苷
和 β-谷甾醇对照品适量，置 10 mL 量瓶中，加甲醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，制成 0. 100，0. 250 mg·
kg －1的混合对照品储备液。
混合对照品溶液的制备:精密量取混合对照品
储备液 4，6 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释
至刻度，摇匀，得混合对照品溶液Ⅰ(胡萝卜苷和 β-
谷甾醇浓度分别为 0. 040，0. 100 mg·kg －1)和混合
对照品溶液Ⅱ(胡萝卜苷和 β-谷甾醇质量分数分别
为 0. 060，0. 150 mg·kg －1)。
2. 4 系统适用性试验 在上述色谱条件下，分别吸
取对照品溶液Ⅱ和供试品溶液注入液相色谱仪，色
谱图见图 2，胡萝卜苷和 β-谷甾醇色谱峰与相邻峰
的分离度均 ＞ 1. 5，理论板数按胡萝卜苷计算不低
于3 000。
2. 5 线性关系考察 分别精密量取混合对照品储
备液 1，2，4，6，8，10 mL至 10 mL量瓶中，甲醇定容，
测定。以峰面积对数(Y)为纵坐标，样品浓度对数
(X)为横坐标制作工作曲线，得胡萝卜苷和 β-谷甾
醇的回归方程分别为 Y = 1. 365X + 3. 984(r =
0. 999 3) ;Y = 1. 280X + 3. 371(r = 0. 999 1)。胡萝
卜苷线性范围为 10 ～ 100 mg·L －1，β-谷甾醇线性范
围为25 ～ 250 mg·L －1。
2. 6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液Ⅰ
20 μL，重复进样 6 次，测得胡萝卜苷和 β-谷甾醇峰
面积的 RSD分别为 3. 1%，2. 1%。
2. 7 稳定性试验 取供试品溶液，分别于 0，2，4，
6，8，10，12 h进样测定，记录峰面积。计算胡萝卜苷
峰面积的 RSD 3. 4%，β-谷甾醇峰面积的 RSD
2. 5%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 8 重复性试验 取广西南宁产链荚豆粗粉(过
40 目筛) ，精密称取 6 份，每份 2 g，按 2. 2 项方法制
备供试品溶液，在上述色谱条件进样测定，测得胡萝
卜苷和 β-谷甾醇含量平均值分别为 0. 110，0. 288
mg·g －1，RSD分别为 3. 1%，2. 8%。
2. 9 回收率试验 取广西南宁产链荚豆粗粉(过
40 目筛) ，精密称取 9 份，每份约 1 g，置圆底烧瓶
中，分别加入适量胡萝卜苷和 β-谷甾醇对照品储备
液，按 2. 2 项方法制备供试品溶液，上述色谱条件进
样测定，计算回收率，结果见表 1。
2. 10 样品测定 取 3 批不同来源的药材，按 2. 2
项方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，记
录峰面积，以混合对照品溶液Ⅰ和Ⅱ为对照，按外标
两点法计算胡萝卜苷和 β-谷甾醇含量，结果见表 2。
3 讨论
已有文献报道测定胡萝卜苷［7］或 β-谷甾醇［8-10］
的含量，但未见文献报道同时测定二者的含量。因
胡萝卜苷和 β-谷甾醇无明显的紫外吸收，需采用蒸
发光散射法进行检测［7-10］。甲醇或甲醇-水是测定
胡萝卜苷和 β-谷甾醇的常用流动相［7-10］。本文在文
献报道的基础上，考察了甲醇-水的比例对分离的影
响，发现当流动相甲醇-水的体积比为 95∶ 5时，胡萝
卜苷和 β-谷甾醇能与样品中的杂质峰达到完全分
离，且峰形良好，保留时间合适。
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Vol． 19，No． 1
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表 1 胡萝卜苷和 β-谷甾醇加样回收率试验
成分 称样量 / g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
胡萝卜苷 1. 014 7 0. 108 6 0. 050 0 0. 157 2 97. 3 99. 5 2. 4
1. 005 0 0. 107 5 0. 050 0 0. 156 2 97. 4
1. 021 2 0. 109 3 0. 050 0 0. 159 6 100. 7
1. 011 7 0. 108 3 0. 100 0 0. 210 8 102. 5
1. 002 5 0. 107 3 0. 100 0 0. 206 5 99. 2
1. 018 9 0. 109 0 0. 100 0 0. 206 7 97. 7
1. 035 2 0. 110 8 0. 150 0 0. 265 6 103. 2
1. 042 0 0. 111 5 0. 150 0 0. 256 8 96. 9
1. 032 2 0. 110 4 0. 150 0 0. 260 7 100. 2
β-谷甾醇 1. 014 7 0. 299 7 0. 150 0 0. 448 8 99. 4 98. 9 2. 1
1. 005 0 0. 296 6 0. 150 0 0. 451 0 102. 9
1. 021 2 0. 301 6 0. 150 0 0. 448 0 97. 6
1. 011 7 0. 298 8 0. 300 0 0. 590 4 97. 2
1. 002 5 0. 296 1 0. 300 0 0. 586 5 96. 8
1. 018 9 0. 300 8 0. 300 0 0. 593 0 97. 4
1. 035 2 0. 305 7 0. 450 0 0. 747 2 98. 1
1. 042 0 0. 307 7 0. 450 0 0. 760 8 100. 7
1. 032 2 0. 304 6 0. 450 0 0. 756 0 100. 3
表 2 不同产地链荚豆中胡萝卜苷和 β-谷甾醇的含量(C)(n = 3)
No．
胡萝卜苷 β-谷甾醇
C /mg·g － 1 RSD /% C /mg·g － 1 RSD /%
南宁 0. 108 3. 8 0. 298 3. 5
柳州 0. 247 2. 9 0. 621 2. 7
桂林 0. 195 3. 0 0. 495 2. 6
胡萝卜苷和 β-谷甾醇均为极性小的化合物，但
二者极性又有明显差别。为了选择合适的提取溶
剂，采用回流提取方法，考察了石油醚、氯仿、丙酮、
无水乙醇 4 种有机溶剂的提取效率。发现石油醚和
氯仿适于 β-谷甾醇的提取，但不适于胡萝卜苷的提
取;无水乙醇由于极性太大，提取的两种成分含量均
低;只有丙酮提取样品中两种成分含量都较高。因
此最终选择丙酮为提取溶剂。
在提取溶剂确定之后，又对提取方法，物料比，
提取时间进行了单因素考察，最后确定了提取条件:
取过 40 目筛的链荚豆粉末 2 g，加入 16 倍量的丙酮
进行回流提取，提取时间为 5 h。
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［责任编辑 顾雪竹］
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