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乌蕨总黄酮体外抗氧化活性的研究
吴晓宁 1, 2 , 余陈欢 1 , 徐静红 2
(1.浙江中医药大学药学院 ,杭州　310053;2.浙江医学高等专科学校药学系 ,杭州　310053)
[摘　要 ] 　目的　研究乌蕨总黄酮体外抗氧化活性。方法　采用分光光度法 , 测定乌蕨总黄酮对羟自由基 、脂质
过氧化的清除能力 、总还原力和总抗氧化作用 , 并通过多元线性回归分析 , 考察了乌蕨总黄酮含量及其体外抗氧化活性
的相关性。结果　乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化性能 、自由基清除能力和一定的还原力 ,可有效抑制脂质过氧化 , 且抗
氧化作用与乌蕨总黄酮含量呈正相关。结论　乌蕨总黄酮具有显著的抗氧化活性 ,黄酮类化合物可能是其抗氧化作用
的主要物质基础。
[关键词 ] 　乌蕨;总黄酮;抗氧化
[中图分类号 ] 　R282.71;R285.5　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2010)03-0292-03
AntioxidantActivityofFlavonoidsfromStenolomachusanum(L).Chinginvitro
WUXiao-ning1, 2 , YUChen-huan1 , XUJing-hong2 (1.SchoolofPharmacy, ZhejiangChineseMedical
Univeisity, Hangzhou310053, China;2.DepartmentofPharmacy, ZhejiangMedicalColege, Hangzhou
310053, China)
ABSTRACT　Objective　ToinvestigatetheantioxidantactivityofflavonoidsfromStenolomachusanum(L.)Chingin
vitro.　Methods　Theradicalscavenging, totalantioxidantandreducingcapacityofhydroxyradicalsandlipidperoxidesbythe
totalflavonoidsfromStenolomachusanum(L.)Chingweredetectedandanalyzedbyusingspectrophotometryandmultiplelinear
regressionanalysis.Thecorrelationbetweencontentsoftotalflavonoidsandtheirantioxidantactivityinvitrowassurveyed.　
Results　Theextractsshowedstrongantioxidantactivities, freeradicalclearanceandsomereductionability, byeficiently
inhibitinglipidperoxidationinadosedependentmanner.　Conclusion　Thetotalflavonoidsmaybethemainactivecomponent
ofStenolomachusanum(L.)Chingwhichexertinganantioxidativeactivity.
KEYWORDS　Stenolomachusanum(L.)Ching;Totalflavonoids;Antioxidantactivity
　　乌蕨 [ Stenolomachusanum(L.)Ching]为鳞始蕨科
植物乌蕨的全草 ,又名野鸡尾 、金花草 、中华金粉蕨 ,具
有清热 、解毒 、利湿 、止血的功效 [ 1] 。其主要含有芳樟
醇 、松油醇和香叶醇等挥发性成分以及木犀草素 、牡荆
素等黄酮类化合物 [ 2 ～ 4] 。据报道 ,乌蕨具有抑菌 、护
肝 、止血 、解毒等作用 ,且安全 ,无毒副作用 [ 5 ～ 7] 。目前
国内研究主要集中在乌蕨抗菌作用 ,笔者未见对其抗
氧化作用的报道 。为了合理利用该植物资源并确定其
[收稿日期 ] 　2009-04-29
[作者简介 ] 　吴晓宁(1974 -), 女 , 浙江人 ,讲师 , 在读博
士 , 从事天然药物的开发与研究。电话:0571-87692684,
E-mail:wxn1974168@126.com。
主要抗氧化活性成分 ,笔者对其进行了体外抗氧化研
究 ,现报道如下。
1　仪器与试药　
1.1　仪器　BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪
器系统有限公司), TU-1900双光束紫外可见分光光度
计(北京普析通用仪器有限公司), KQ-5000超声波清
洗器(昆山超声仪器有限公司)。
1.2　试药　乌蕨药材于 2008年 10月采自杭州九溪 ,
经熊耀康教授鉴定为乌蕨 [ Stenolomachusanum(L.)
Ching]的地上部分 ,阴干 ,粉碎 ,备用。芦丁标准品购
自中国药品生物制品检定所(批号:100080-20030);大
豆卵磷脂购自 Sigma公司(批号:F20070207);其他试
·292· HeraldofMedicineVol.29 No.3March2010
剂均为分析纯。
2　方法　
2.1　乌蕨提取物的制备　定量称取乌蕨干燥粗粉
10 g,加 16倍量含 0.1%盐酸的 60%乙醇回流提取
4 h,提取 1次 ,提取液减压浓缩至含醇量约 10%抽滤 ,
除去杂质 ,加 60%乙醇定容至 100 mL,作为供试品溶
液 ,备用 。参照文献 [ 8] , 经测定其总黄酮含量为
11.89%。
2.2　抗氧化活性实验 [ 9 ～ 11] 　
2.2.1　磷钼络合物法总抗氧化活性的测定　在 5 mL
具塞试管中加入供试品溶液适量 ,加试剂液 4 mL,加
纯化水定容至 5 mL,加盖 ,混匀 ,置 95 ℃水浴反应 30
min,冷却后 ,以纯化水作空白 ,于 695 nm波长下测定
其吸光度。
2.2.2　还原力测定　取供试品溶液适量 ,加入磷酸缓
冲液(0.2mol· L-1 , pH6.6)1.5mL及 1%铁氰化钾溶
液 1 mL, 50℃保温 20 min后 ,加入 10%三氯乙酸溶液
1 mL,混匀 ,加纯化水 2.5 mL及 0.1%三氯化铁溶液
0.1mL。在 700nm处测定反应液吸光度值。吸光度
值越大 ,表示还原力越强。
2.2.3　脂质体氧化法　将大豆卵磷脂分散于去离子
水中 , 20kHz超声波处理 30 min,周围以冰水冷却 ,制
得大豆磷脂浓度为 0.8%的人工脂质体 。取脂质体
1 mL,加入供试品溶液适量 ,以 10 mmol· L-1乙酸铜溶
液 20μL催化氧化反应 ,混匀后放置于回转式恒温水
浴振荡器上 ,于暗处 37 ℃、 100 r· min-1进行开口氧
化 ,每隔一定时间 ,取氧化液 0.5 mL, 加纯化水至
5 mL,于 235 nm处测定其吸光度 ,以摩尔消光系数
ε=26 000 (mol)-1· L·cm-1计算脂质体体系中共轭
二烯氢过氧化物的生成量 。
2.2.4　抗羟自由基(· OH)作用实验　在 5 mL具塞
试管中加 Tris-HCl缓冲液 1.0 mL,加入供试品溶液适
量 、亚甲基蓝溶液 1.0 mL、过氧化氢溶液 0.50 mL、硫
酸亚铁溶液 0.50 mL,加纯化水稀释至刻度。用直径
1 cm比色皿 ,以纯化水作空白 ,于 663 nm波长处测定
吸光度(A),其清除率可用下式计算:
清除率(%)=A样 -A损A未损 -A损 ×100%
A样:加入清除剂后测得的反应体系吸光度值;
A未损:指示剂本身的吸光度值;A损:未加清除剂时反应
体系吸光度值。
3　结果　
3.1　乌蕨总黄酮体外抗氧化活性　见表 1。样品还
原力和总抗氧化值均以吸光度(A)值表示。
表 1　乌蕨总黄酮体外抗氧化活性结果　
Tab.1　AntioxidantactivityofflavonoidsfromStenoloma
chusanuminvitro
样品 编号含量 /mg
羟自由基
清除率 /%
还原力
(A值)
CD抑制
率 /%
总抗氧化
值 /(A值)
乌蕨总黄酮 1 6.0 26.03 0.251 23.90 0.239
2 12.0 31.68 0.319 29.56 0.263
3 18.0 39.44 0.372 38.18 0.289
4 24.0 48.49 0.456 44.62 0.306
5 30.0 56.23 0.521 50.34 0.332
6 36.0 65.36 0.580 56.73 0.344
7 42.0 74.98 0.657 62.55 0.381
芦丁 8 40.0 47.95 0.495 79.77 0.061
维生素 C 9 0.5 41.10 0.441 70.04 0.362
　　由表 1可见 ,乌蕨总黄酮具有较强的抗氧化活性 ,
可提高羟自由基的清除率 ,抑制卵磷脂氧化产物的生
成 。
3.2　乌蕨总黄酮与抗氧化活性相关性分析　以羟自
由基清除率(X1)、还原力(X2)、CD抑制率(X3)和总
抗氧化值(X4)为横坐标 ,乌蕨总黄酮含量(Y)为纵坐
标 ,采用 SPSS13.0软件对表 1结果进行线性关系考
察 ,得方差分析表 (表 2)和回归标准残差正态 P-P图
(图 1)。
表 2　方差分析表　
Tab.2　Varianceanalysis
变异来源 自由度 SS MS F P
回归 4 1 007.485 251.871 978.779 <0.01
残差 2 0.515 0.257
总和 6 1 008.000
图 1　回归标准残差正态 P-P图　
Fig.1　Normalplotofresiduals
由表 2和图 1可知 , P<0.01,自变量(Xn)与因变
量(Y)服从正态分布 ,证明乌蕨总黄酮含量与抗氧化
活性之间存在显著的线性关系 。进而对其进行多元线
性回归分析 ,得回归系数分析表(表 3)。
在 95%可信区间内 ,线性相关系数 r=0.999 5。
证明回归方程真实 、可靠 ,具有统计学意义 。可用于替
代实验点对实验结果进行分析 。
·293·医药导报 2010年 3月第 29卷第 3期
表 3　回归系数分析表　
Tab.3　Theregressionanalysis
项目 总体回归系数
标准化
系数 T值 P值
常数项 -17.453 -2.483 0.131
羟自由基清除率 11.015 0.152 0.596 0.612
还原力 36.458 0.410 1.231 0.343
CD抑制率 35.917 0.391 1.977 0.187
总抗氧化值 12.790 0.048 0.292 0.798
　　由此得拟合方程:Y=-17.453 +11.015X1 +
36.458X2 +35.917 X3 +12.790 X4 ,经标准化后 ,拟合
方程:Y=0.152X1 +0.410 X2 +0.391X3 +0.048X4。
4　讨论　
自由基是生物体生化反应的普遍介质 。现代研究
表明 ,许多疾病如心脑血管疾病 、肝硬化 、癌症以及人
体衰老等过程都与自由基的作用有关[ 12] 。目前在医
疗和食品领域使用较多的是合成抗氧化剂 ,如二丁基
羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)等 ,对生物
体有潜在的毒副作用 。黄酮类化合物是一种天然的抗
氧化剂 ,具有抗衰老 、增强机体免疫力等多种药理活性
作用。其主要通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成
稳定的半醌自由基 ,从而中断链式反应 ,达到抗氧化作
用 ,且高效 、低毒 [ 13 ～ 15] 。因此 ,越来越受到国内外医药
工作者的重视。
本实验表明 ,乌蕨总黄酮具有较强的还原力 、抗脂
质体氧化和清除自由基等作用 ,且随提取液浓度的增
加 ,其抗氧化性能逐渐增强 ,两者在 6 ～ 42 mg· mL-1浓
度范围内均呈正相关。因此 ,笔者推断黄酮类化合物
可能是其抗氧化作用的主要物质基础 。
作为临床常用的心脑血管辅助治疗药物芦丁 ,无论
在清除自由基 、还原力 ,还是在总抗氧化作用等方面 ,体
外抗氧化作用均不及乌蕨总黄酮。一方面 ,芦丁作为黄
酮苷类 ,其水溶性大大增加 ,有利于其捕捉溶剂体系超
负氧离子 ,但同时 , 3-OH也是黄酮类成分抗氧化活性的
必需基团 ,而芦丁 3位成苷 ,降低了整个分子的共平面
性 [ 16] ,而乌蕨总黄酮是由多种黄酮类化合物组成的复
合体 ,具有协同作用 ,因此 ,体外抗氧化作用强于芦丁。
但其活性成分有待进一步研究 ,以期为该植物资源的开
发利用及其药理作用机制的研究提供参考。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2010.03.006
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