全 文 ：Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2014 March，Vol． 25 No． 2
各色谱峰拖尾严重，且各峰之间分离效果较差，而
以甲醇-醋酸水溶液系统做流动相后，各色谱峰峰
形良好且能良好的分离。
结果证明，本方法简便可行，重现性良好，适
用于冠心Ⅴ号颗粒的质量控制。
参考文献：
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A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量[J].中国实验方剂学杂志，
2003，9（6）：12-15.
（编辑：宋威）
收稿日期：2013-10-29
作者简介：王婴，女，实验师，研究方向：药物新剂型与质量控制。Email：1248322680@qq.com。通讯作者：王岩，男，教授，研究方向：药物
新剂型与质量控制。Email：gdpuwy@126.com。
溪黄草的定性定量方法研究
王 婴 1，廖远忠 2，林玉婷 3，林伟鑫 3，王 岩 3（1.广东药学院医药化工学院，广东 中山 528458；2.广东
豪爽天然保健食品有限公司，广东 连州 513400；3.广东药学院中药学院，广东 广州 510006）
摘要：目的 完善溪黄草的定性定量方法，对药品质量进行有效控制。方法 采用薄层鉴别法，对溪黄草中迷
迭香酸、齐墩果酸和芦丁进行鉴别。采用高效液相色谱（HPLC法）测定迷迭香酸的含量，以十八烷基硅烷键合
硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70）为流动相；流速为1.0mL· in-1；检测波长为330nm；柱温为
25℃；理论塔板数按迷迭香酸峰计算不低于4000。结果TLC斑点清晰，分离度高，方法耐用性好；HPLC方
法简便、专属性强，迷迭香酸线性范围为1.2μg～12μg（r=0.9999），平均回收率为98.37 %，RSD为1.20 %
（n=6）。结论 所建立的定性、定量方法可用于溪黄草的质量控制。
关键词：溪黄草；薄层色谱；高效液相色谱；迷迭香酸
中图分类号：R284.1文献标志码：A 文章编号：1003-9783（2014）02-0212-04
doi：10.3969/j.issn.1003-9783.2014.02.025
Studies on Qualitative and Quantitative Methods for Herba Rabdosiae Serrae
WANG Ying1，LIAOYuanzhong2，LINGYuting3，LINWeixin3，WANG Yan3（1. School of Pharmaceutical and
Chemical Engineering，GuangdongPharmaceutical University，Zhongsha 528458 Guangdong，Chin；2. Gua dong
Haoshuang Natural Healthy Food Co.，Ltd，Lianzhou 513400 Guangdong，Chin；3. School of Traditional Chinese
Medicine，GuangdongPharmaceutical University，G angzhou 510006 Guangdong，Chin）
Abstract：Objective To optimize the qualitative and quantitative methods for Herba Rabdosiae Serrae，thus to im-
prove its quality standard.Methods Thin l yer chromatography（TLC）w s performed for identifying rosmarinci acid，
oleanolic acid and rutin. Rosmarinci acid was determined by high performance liquid chromatography（HPLC）. The
HPLC was conduced with octadecylsilane chemically bonded silica as loading agent，ac tonitrile-0.1 % phosphoric
acid solution（30∶70）as mobile phase，and th detection wavelength was 330 nm，flowrate was 1.0 mL·min-1and
columntemperaturewas25℃.Thenumberoftheoreticalplatesforrosmarinciacidwasnotlessthan4000.Results The
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中药新药与临床药理 2014年 3月第 25卷第 2期
溪黄草别名香茶菜、溪沟草、手擦黄等，在南
方各省分布广泛，在广东民间作为清肝利胆药物，
用于治疗急性肝炎、急性胆囊炎、痢疾、肠炎、跌
打瘀肿等[1]。溪黄草质量标准原载于《广东省中药材
标准》（第一册），只有性状检查和薄层鉴别项[2]。
《广东省中药材标准》（第二册）对其重新作了修订，
增加了药材粉末显微鉴别项和水分、总灰分、浸出
物等检查项，较原标准有了一定程度的提高[3]。但在
薄层鉴别项中，仍仅采用对照药材作为对照物，成
分专属性不强，且未建立其有效成分的含量测定。
本研究增加了迷迭香酸、齐墩果酸和芦丁的薄层鉴
别，同时建立了迷迭香酸的 HPLC含量测定方法，
提高了溪黄草的质量控制标准。
1 仪器与试药
LC-20AT高效液相色谱仪、SPD-20A紫外检测
器，日本岛津公司；BP211D型电子天平，北京赛多
利斯公司；SK3300LH超声波清洗器，上海科导超声
波仪器有限公司；薄层层析硅胶G，青岛海洋化工有
限公司；迷迭香酸，含量≥98.8%，齐墩果酸，芦丁，
均由中国药品生物制品检定所提供，批号分别为：
111871-201001， 1 709-200505， 1 0 80-200707。
乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯；溪黄草药材7
批，分别来源于广东清远、广西玉林和安徽亳州，
经广东药学院王岩教授鉴定为唇形科植物狭基线纹
香茶菜 Rabdosia lophanthoides var. gerardiana（Benth.）
H. Hara的干燥地上部分。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别 据现有资料显示，溪黄草中所含化学
成分种类多样，具有多种药理活性，主要含有酚酸
类、萜类、黄酮类等成分[4]。对应的代表成分为迷迭
香酸、齐墩果酸和芦丁。本研究采用薄层色谱法，
对3批溪黄草分别进行了这3种成分的鉴别。
2.1.1 迷迭香酸 TLC鉴别 取本品粉末 1 g，加入
甲醇 30 mL，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，
残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取迷
迭香酸对照品，加乙醇制成每 1 mL含 0.1 mg的溶
液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》
2010版一部附录 VI B） 试验，吸取上述溶液各
5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的
硅胶G薄层板上，以环己烷 -乙酸乙酯 -异丙醇 -
甲酸（15∶3∶3.5∶0.2）为展开剂[5]，展开，取出，晾
干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，
在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光
斑点，结果见图1。
1~3.供试品；4.迷迭香酸对照品
图 1 迷迭香酸 TLC图
Figure 1 TLC chromatogram of rosmarinci acid
2.1.2 齐墩果酸TLC鉴别 取本品粉末 1 g，加甲醇
30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加
水10mL使溶解，用三氯甲烷提取2次，每次10mL，
合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，
作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加甲醇
制成每 1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按
照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VI B）试
验，吸取供试品溶液4μL，对照品溶液2μL，分别
点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层
板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（40∶2∶1）为展开
剂[6]，展开，取出，晾干，喷以10 %硫酸乙醇溶液，
105℃加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在
与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，结
TLCspotswereclearandcanbewellseparated，indicatingthatthemethodhadgoodruggedness.TheHPLCmethod was
simpleandspecific.Thecalibrationcurveshowedgoodlinearrelationshipintherangeof1.2μg～12μg（r=0.9999）. The
averagerecoverywas98.37%andRSDwas1.20%（n=6）.Conclusion Thedevelopedqualitativeandquantitativemeth-
odscanbeusedforthequalitycontrolofHerbaRabdosiaeSerrae.
Keywords：HerbaRabdosiaeSerrae；TLC；HPLC；Rosmarinciacid
1 2 3 4
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2014 March，Vol． 25 No． 2
果见图2。
1~3.供试品；4.齐墩果酸对照品
图 2 齐墩果酸 TLC图
Figure 2 TLC chromatogram of oleanic acid
2.1.3 芦丁TLC鉴别 取本品粉末1g，加甲醇30mL，
超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加水10 mL使
溶解，移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取 2次，每
次 10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇
2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，
加乙醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶
液。按照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录
VI B）试验，吸取上述溶液各1μL，分别点于同一
聚酰胺薄膜上，以乙醇∶水∶甲酸（7∶2∶1）为展开
剂[7]，展开，取出，晾干，喷以1 %三氯化铝乙醇溶
液，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱
中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧
光斑点，结果见图3。
1~3.供试品；4.芦丁对照品
图 3 芦丁 TLC图
Figure 3 TLC chromatogram of rutin
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷
键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1 %磷酸溶液（30∶70）
为流动相；流速为1.0mL· in-1；检测波长为330nm；
柱温为25℃[8-9]；理论塔板数按迷迭香酸峰计算不低
于4000。HPLC色谱图见图4。
图 4 溪黄草 HPLC色谱图
Figure 4 HPLC chromatograms of Herba Rabdosiae serrae
2.2.2 对照品溶液的制备 取迷迭香酸对照品适量，
精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即
得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过3号筛）约
1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
25 mL，称定质量，超声处理（功率 250 W，频率
40 kHz）45 min，放冷，加甲醇补足减失的质量，摇
匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 线性关系考察 精密称取迷迭香酸对照品15.0
mg，置 25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，作为贮备液。精密量取 1，2，4，6，8 mL，
至 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用
0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取 20μL续滤液进
样测定。以峰面积对进样量（μg）进行回归，得线性
方程 Y=3323723X-310986（r=0.9999），迷迭香酸在
1.2～12μg范围内呈良好的线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密吸取浓度为0.24 mg·mL-1迷
迭香酸对照品溶液20μL，按照上述色谱条件连续重
复进样6次，测定峰面积，RSD为0.27 %，表明本
法具有良好的精密度。
2.2.6 重复性试验 精密称取同一批溪黄草粉末（批
号：121105）6份，按供试品溶液的制备方法处理，
照上述色谱条件进样测定，结果迷迭香酸平均含量
为0.503 %，RSD为1.09 %。
2.2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液20μL，
1 2 3 4
1 2 3 4
mV
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
mV
1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0 11.0 12.0 13.0 14.0
t/min
b.溪黄草供试品
t/min
a.迷迭香酸对照品
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中药新药与临床药理 2014年 3月第 25卷第 2期
于0，2，4，8，12，24 h进样测定，结果迷迭香酸
平均峰面积为13078938，RSD为1.02 %，表明供试
品溶液在24 h内稳定。
2.2.8 加样回收率试验 取6份已知含量的溪黄草粉
末（批号：121105，含量0.503%）约0.5g，精密称定，
分别加入浓度为2.580 mg·mL-1的迷迭香酸对照品溶
液1 mL，按供试品溶液的制备方法同法处理，并进
样测定，计算回收率，结果见表1。
表 1 加样回收率试验结果（n=6）
Table 1 Recoveryofrosmarinci acid in the samples
2.2.9 样品测定 按上述测定方法，取不同来源溪黄
草样品各1 g，精密称定，按上述方法制成供试品溶
液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，
注入液相色谱仪，测定，计算迷迭香酸的含量（按干
燥品计），结果见表2。
表 2 不同来源溪黄草含量测定结果（n=3）
Table 2 Quantitative determination results of 3 batches of samples
（n=3）
3 讨论
在TLC鉴别中，进行了方法耐用性考察。结果
表明，在不同温度（4℃~35℃）、不同相对湿度（32%
~80%）对主斑点的分离无明显影响，Rf值随着温度
和湿度的升高略有增加。在迷迭香酸、齐墩果酸的
鉴别中，以硅胶G为吸附剂的分离效果优于硅胶H，
且自制板与预制板的展开效果无明显差别。芦丁的
鉴别以聚酰胺板分离为佳。
在 HPLC测定中，色谱条件优化时，曾以甲醇
-0.1 %磷酸，甲醇 -0.1 %甲酸，乙腈 -0.1 %磷酸，
乙腈-0.1 %甲酸作为流动相进行对比，结果以乙腈
-0.1 %磷酸作为流动相时，保留时间短，峰高较高，
峰面积较大，分离效果最好，故选定乙腈-0.1 %磷
酸作为流动相；试验中对样品的提取条件进行了优
化，包括提取方法、提取时间、溶剂用量等。分别
对比了甲醇超声处理和加热回流30，45，60 min的
提取效果，结果以超声处理45 min迷迭香酸含量最
高；溶剂选择时，考察了50 %甲醇、甲醇、50 %乙
醇、乙醇的提取效果，结果用甲醇提取时迷迭香酸
含量最高；此外，还考察了溶剂用量，分别为
10，25，50 mL，结果加入25与50 mL提取时迷迭
香酸含量无明显差异，故甲醇用量选择为25 mL。
关于溪黄草中迷迭香酸的含量测定此前曾有文
献报道[10]，但该文献系采用梯度洗脱，方法繁琐，分
析时间长，且迷迭香酸与其他组分分离不佳，影响
了结果的准确性。本文所采用的方法简便、重复性
好，结果准确可靠，建立的质量标准可用于该药材
的质量控制。
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（编辑：宋威）
取样量/g
0.5088
0.5086
0.5060
0.5012
0.5065
0.5034
含量/mg
2.559
2.558
2.545
.521
2.548
2.532
加入量/mg
2.580
2.580
2.580
2.580
2.580
2.580
测得量/mg
5.148
5.106
5.063
5.052
5.089
5.032
回收率/%
100.3
98.76
97.60
98.10
98.49
96.90
平均值/%
98.37
RSD/%
1.20
批号
121105
121110
121117
121209
121211
130102
130110
药材来源
广东清远
广东清远
广东清远
广西玉林
广西玉林
安徽亳州
安徽亳州
迷迭香酸/%
0.542
0.514
0.529
0.354
0.397
0.485
0.401
RSD/%
1.32
1.56
2.14
1.01
2.69
1.14
2.22
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