全 文 ：可见光及紫外光分光光度法测定溪黄草总黄酮
黎 1 , 2　　吴志谊2 　　吴川2 　　马宝娟2 　　吴风兰2
(1.中山大学化学与化学工程学院 ,广东 广州 510275;2.广东轻工职业技术学院 轻化系 广东 广州 , 510300)
摘要:以芦丁为参照品比较了可见光及紫外分光光度法测定溪黄草总黄酮的方法。在可见光分光光度法中 ,
硝酸铝作显色剂 ,测量波长为 510 nm。紫外分光光度法 ,测量波长为 359 nm。结果表明 ,紫外分光光度法是
一种较理想的测定方法。
关键词:溪黄草　总黄酮　可见光分光光度法　紫外分光光度法
中图分类号:O657.3　　文献标识码:A
　　溪黄草是唇形科香茶菜属植物 ,含黄酮苷 、氨
基酸 、有机酸 、酚类等成分 。溪黄草全株可入药 ,
性味苦凉 ,具有清肝热 、利湿毒 、明双目 、健肠整
胃 、健脾活血和抗癌等功效[ 1] 。
目前报道的测定植物中黄酮含量的方法主要
是可见光分光光度法[ 2 , 3] ,而采用紫外光分光光
度法测定溪黄草总黄酮含量的方法未见报道 。笔
者采用可见光与紫外光分光光度法测定溪黄草中
黄酮含量 ,并对两种方法进行了比较。
1　仪器与试剂
上海惠普 6010 型紫外-可见分光光度计;上
海二分 7230G 可见光分光光度计;北京赛多利斯
电子分析天平;索氏抽提器;PHILIPS-7120S 粉
碎机 。
芦丁 , ≥98%,广州中医药大学药物化学研究
所;溪黄草 ,广州 ,经粉碎后过 60目筛 ,在 60 ℃烘
箱干燥 6 h 后冷却备用;其他试剂均为分析纯 。
1.1　试样处理
精确称取溪黄草粉末 1.000 0 g ,在索氏抽提
器中经石油醚脱脂到无色 ,放冷后蒸出石油醚 ,加
入 80 mL 85%乙醇 ,抽提至无色。提取液全部转
移到 100 mL 容量瓶 ,用 85%乙醇定容 。
1.2　标准溶液的配制
可见光分光光度法[ 2] 。准确称取 120 ℃干燥
至恒重的芦丁对照品 250 mg ,用无水甲醇溶解 ,
转移入 250 mL 容量瓶中 , 用无水甲醇定容 ,摇
匀。准确移取 5.00 mL 至 50 mL 容量瓶中 ,用无
水甲醇定容 ,摇匀(ρ=0.1 g/L)。准确吸取上述
溶液 1.00 、2.00 、3.00 、4.00 、5.00 、6.00 mL ,分别
置 25 mL容量瓶中 ,分别加入 6 mL 50%乙醇溶
液和 1.00 mL 5%亚硝酸钠溶液 ,摇匀 , 放置 6
min后分别加 10%硝酸铝溶液 1.00 mL。摇匀 ,
放置 6 min ,再分别加 1%氢氧化钠溶液 10.00
mL ,用 50%乙醇定容 ,摇匀 ,放置 15 min。以空
白溶液为参比 ,在波长 510 nm 处测吸光度。
紫外光分光光度法 。准确称取 120 ℃干燥至
恒重的芦丁对照品 96.4 mg , 用无水甲醇溶解 ,
转移入 100 mL 容量瓶中 , 用无水甲醇定容 ,摇
匀.精确移取 10.00 mL 至 100 mL 容量瓶中 ,用
无水甲醇定容 ,摇匀(ρ=0.096 4 g/L)。准确吸
取上述溶液 1.00 、2.00 、3.00 、4.00 、6.00 mL , 分
别置 25 mL 容量瓶中 , 用无水甲醇定容 ,在 359
nm 处测吸光度 。
1.3　试样的总黄酮含量测定
可见光分光光度法:分别准确吸取 1.00 mL
试液置25 mL 容量瓶中 , 按照1.2所述显色并测
定吸光度 ,在 510 nm 波长处测定吸收度 ,由回归
方程计算试样中总黄酮含量。
紫外光分光光度法:分别准确吸取 1.00 mL
试液置 25 mL 容量瓶中 , 用无水甲醇稀释定容 ,
在 359 nm 波长处测定吸光度 ,由回归方程计算
试样中总黄酮含量。
1.4　回收率测定
可见光分光光度法:准确称取 5份已知总黄
　　收稿日期:2005 04 11;修改稿收到日期:2005 11 07。
作者简介:黎 (1970 ),中山大学在读博士 ,工程师 ,主要
从事材料物理化学与精细化工的研究工作 , E-mai l:liyulet ter @
y ahoo.com .cn。
51
第 23 卷 第 1 期
2006 年 1 月
精　细　石　油　化　工
SPECIALITY PETROCHEMICA LS
　　　　　　　
酮含量的溪黄草粉末 1.000 0 g ,加入一定量的芦
丁对照品 ,按照 1.1所述制得试样液 ,按照 1.2所
述显色并测定吸光度 , 由回归方程计算总黄酮含
量 ,按下式计算回收率。
回收率=实测值-试样所含的总黄酮质量加入的芦丁质量 ×100%
紫外光分光光度法:准确称取 5份已知总黄
酮含量的溪黄草粉末 1.000 0 g ,加入一定量的芦
丁对照品 ,按照 1.1所述制得试样液 ,用无水甲醇
稀释试样液 ,在 359 nm 处测吸光度 ,由回归方程
计算总黄酮含量 ,计算回收率 。
2　结果与讨论
2.1　可见光分光光度法
将配制好的不同浓度的芦丁对照品溶液在
510 nm 波长处测定吸收度(A),得回归方程为:
A=-0.011 5 +0.020 62c , 相关系数 r =
0.999 7 ,表明芦丁质量浓度在 4 ～ 24 mg/L 范围
内线性良好。
2.2　紫外光分光光度法
将配制好的不同浓度的芦丁对照品溶液在
359 nm 波长处测定吸收度 ,得回归方程为:A=
0.000 405 4+0.027 18c ,相关系数 r=0.999 7。
这表明芦丁质量浓度在 4 ～ 24 mg/L 范围内线性
良好 。
2.3　试样的总黄酮含量
黄酮类化合物具有特定的紫外吸收带 ,其结
构中的肉桂酰环产生的 Ⅰ带在 300 ～ 400 nm ,由
苯甲酰环产生的 Ⅱ带在 240 ～ 285 nm ,不同的黄
酮在这两个吸收带的吸收强度不同[ 4] 。含黄酮类
化合物的原料经提取纯化后 ,可直接于最大吸收
波长处测定其吸收度 ,以芦丁为对照品对照计算
其含量[ 5] 。本实验选择芦丁在Ⅰ带的最大吸收波
长 359 nm作为紫外光分光光度法的测量波长 。
取不同产地的溪黄草试样 , 分别用可见光和
紫外光分光光度法对每个试样平行测定 3 次 ,
RSD=1.04%,结果见表 1。
表 1　不同产地溪黄草试样的总黄酮含量
试样 w , %可见光法 紫外光法
广西溪黄草 3.674 3.288
湖南溪黄草 4.352 4.072
广东溪黄草 2.148 1.983
福建溪黄草 1.928 1.754
江苏溪黄草 5.976 5.428
　　从表 1可见 ,用可见光分光光度法测得的总
黄酮含量总是比用紫外光分光光度法测得的总黄
酮含量要高 ,这可能因为可见光分光光度法是在
强碱性溶液与铝离子反应后显色 , 而溪黄草又含
酚类 ,酚羟基在该条件下也能够与铝离子结合 ,在
510 nm 处也被吸收 , 这样就导致测定结果偏
高[ 6] 。从表 1还可见 ,不同产地的溪黄草全草的
总黄酮含量有一定差异 ,其中以江苏溪黄草黄酮
含量最高 ,而福建溪黄草黄酮含量最低 。
2.4　回收率
将一定量的芦丁对照品加入已知总黄酮含量
的江苏溪黄草中做回收率实验 ,结果见表 2。由
表 2可见 ,对于可见光分光光度法 , RSD=0.52 ,
回收率范围为 98.92%～ 100.2%;对于紫外光分
光光度法 ,RSD=0.45 ,回收率范围为 98.94%～
100.2%,符合定量分析要求。
表 2　江苏溪黄草回收率实验结果(n=5)
加入芦丁质量/mg
回收芦丁质量/mg
可见光法 紫外光法
回收率, %
可见光法 紫外光法
5.000 4.974 4.954 99.48 99.08
5.000 4.980 4.947 99.60 98.94
5.000 5.005 4.978 100.1 99.56
5.000 4.946 4.986 98.92 99.72
5.000 5.010 5.012 100.2 100.2
3　结论
可见光分光光度法和紫外光分光光度法两种
方法测定溪黄草总黄酮都有较好的线性关系 。紫
外光分光光度法能直接测定黄酮的含量 ,不需用
硝酸铝显色 ,方法简便快速。
参考文献
1　居学海 , 翟宇峰 , 翟锦库 ,等.溪黄草中三种活性组分的电子
结构与抗癌活性[ J] .郑州大学学报(自然科学版), 1997 , 29
(3):80～ 86
2　楼小红.溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的含量测定[ J] .中国
医药学报 , 2004 , 19(5):316～ 317
3　林春蕊.野菊花总黄酮的含量测定[ J] .广西植物 , 2002 , 22
(5):467～ 468
4　张钦得.中药制剂分析技术[ M] .北京:中国中医药出版社 ,
2003.149
5　梁生旺.中药制剂分析[ M] .北京:中国中医药出版社 , 2003.
131
6　丁明玉 ,赵纪萍 ,李擎阳.贯叶金丝桃提取物中总黄酮的测定
方法[ J] .分析试验室 , 2001 , 20(6):45～ 47
52　　　 精　细　石　油　化　工 2006 年 1 月
超临界甲醇法制备生物柴油的研究现状
孙世尧　　王连鸳　　杨基础＊
(清华大学化工系 ,北京 100084)
摘要:阐述了温度 、游离脂肪酸 、水及醇油比对超临界甲醇法制备生物柴油的影响。与其他化学法相比 ,超临
界甲醇法的反应时间从 1 ～ 8 h 降低到 4 min , 对原料油的要求也低 , 可使水含量及酸值较高的废油未经处理
即可制得转化率 98%以上的生物柴油。分析了反应机理 , 展望了超临界甲醇制备生物柴油的工业应用前景。
关键词:超临界甲醇　酯化　生物柴油
中图分类号:TQ645　　文献标识码:A
　　超临界甲醇法制备生物柴油是利用植物油 、
动物油或者废油脂制备生物柴油的新工艺 ,它的
最大特点是不需要另加催化剂 ,超临界甲醇既是
反应介质 ,又是反应物与催化剂。与化学法相比 ,
它在反应速度 、对原料的要求和产物的回收方面
都有许多优越性 。笔者对超临界甲醇法制备生物
柴油的影响因素及机理进行了综述 。
1　超临界甲醇法制备生物柴油的影响因素
1.1　温　度
Ayhan[ 1 , 2]利用间歇式反应器比较了不同温
度下 ,超临界甲醇与榛子油反应制备生物柴油的
实验结果 。结果表明 ,在超临界甲醇中 ,油脂与甲
醇的反应速率非常快 ,而在亚临界甲醇状态下 ,油
脂与甲醇的反应速率较慢 。Saka[ 3] 等认为提高温
度有利于反应的进行并能提高反应的转化率 。
此外 ,Saka还分别比较了在 350 ℃与 400 ℃
时制备的生物柴油的组成。实验发现 ,在350 ℃,
随着反应的进行 ,甲酯化后产物中的油酸酯 、棕榈
酸酯 、硬脂酸酯 、亚油酸酯的含量增高 ,而亚麻酸
甲酯的含量在逐渐降低;可能是由于在反应中亚
　　收稿日期:2005 03 29;修改稿收到日期:2005 07 18。
作者简介:孙世尧(1981 ), 男 ,硕士研究生 ,师从杨基础教
授,主要从事超临界流体技术的研究。
＊通讯联系人 , E-mail:yjc-dce@mai l.t singhu a.edu.cn。
DETERMINATIONOF FLAVONOID IN RABDOSIA
LOPHANTHOIDES BY UV AND VIS SPECTROPHOTOMETRY
Li Yu1 , 2 , Wu Zhiyi2 ,Wu Chuan2 ,Ma Baojuan2 and Wu Feng lan2
(1.School o f Chem istry and Chemical Engineering , S un Yat-Sen University , Guangzhou 510275 ,
Guangdong , China;2.Department o f Chemical E ngineering , GuangDong Industry Technical Col-
lege , GuangZhou 510300 , Guangdong , China)
Abstract:Total f lavonoid content in Rabdosia lophanthoides was determined by V IS and UV Spectro-
photometry , both w ith rut in as reference sample.In VIS spect ropho tometric analy sis , Al(NO 3)3 was
used as the revealing agent and the measurement w as conducted at 510 nm.In UV spect ropho tometric
analysis , the measurement w as canducted at 359 nm.The comparation of tw o methods indicated that
UV spect ropho tometry w as a better method for the dete rminat ion of the to tal flav onoid content in
Rabdosia lophanthoides.
Key words:Rabdosia lophanthoides;f lavonoid;VIS spectrophotometry;UV spect rophotometry
53
第 23 卷 第 1 期
2006 年 1 月
精　细　石　油　化　工
SPECIALITY PETROCHEMICA LS