全 文 ：内蒙古工业大学学报
JOU RN AL OF INNER MON GOLIA第 24卷　第 1期 UNIVERSI TY OF TECHNOLOGY Vol. 24 No. 1 2005
　　文章编号: 1001- 5167( 2005) 01-0028-04
狼毒大戟水提物中总黄酮含量的测定
丁立军 ,张前程 ,庞丽纹 ,简　丽
(内蒙古工业大学化工学院 ,呼和浩特 010062)
摘要:采用不同浓度氢氧化钠水溶液对狼毒大戟中总黄酮类成分进行了提取 ,通
过分光光度法测定了提取液中的总黄酮含量 ,并考察了碱液浓度对总黄酮提取量
的影响 .实验条件下 ,用 m( NaO H)= 1. 0%的溶液提取出的黄酮的量最大 .
关键词:黄酮 ;狼毒大戟 ;含量测定
中图分类号: O63　　文献标识码: A
　　狼毒是多年生草本植物 ,在我国分布很广 .中药狼毒始载于《神农本草经》 ,谓其具有散结、逐水、止
痛、杀虫等功能〔1〕 .狼毒大戟为大戟科狼毒大戟的干燥根 ,为中药狼毒的来源之一 ,临床用于治疗肿瘤、
结核病和皮肤病等〔2〕 .黄酮类成分具有多种生理活性 ,例如:扩张冠状血管、降低胆固醇、降低血管脆性、
止咳、平喘、祛痰、抗菌、消炎等作用〔 3〕 .刁幼林等利用分光光度法对狼毒大戟注射液中总黄酮含量进行
了测定 ,从而证明了狼毒大戟中黄酮类成分的存在〔 3〕 .邢有权等又对瑞香狼毒和狼毒大戟的总黄酮类成
分进行了比较 ,进一步证明黄酮类成分是狼毒的主要成分之一〔4〕 .本文利用黄酮类成分易溶于碱性水溶
液而在酸性水溶液中沉淀的性质 ,采用低浓度 NaOH的水溶液提取狼毒大戟中的黄酮 ,测定了水提物
中的总黄酮含量 ,并考察了 NaOH浓度对总黄酮提取量的影响 .
1　实验部分
1. 1　实验材料及仪器
原料:狼毒大戟购自内蒙古通辽市扎鲁特旗医药公司 .
主要试剂:芦丁 ( 95% ) ,氢氧化钠、无水乙醇、乙酸乙酯等均为分析纯 .
主要仪器: 721型分光光度计 (上海第三仪器厂 ) , Anke TDL-40B离心机 (上海安亭科学仪器厂制
造 ) , RE-52A旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂 ) .
1. 2　黄酮物质的提取
称取干燥的狼毒大戟生药并粉碎 ,分别以 m( NaOH)= 0. 1%、 0. 5%、 1. 0% 、 1. 5%、 2. 0%的溶液提
取 8 h.将所得各提取液滤去固相后用盐酸调节 pH值为 1～ 2,静置沉降 .沉降后分出上清液 ,剩余部分
经离心沉降分得淡黄色沉淀 .将淡黄色沉淀用无水乙醇萃取 ,过滤除杂后得液相 1;将两次沉降的上清
液合并减压浓缩后用乙酸乙酯萃取 ,萃取液减压浓缩后 ,用无水乙醇溶解 ,过滤除去不溶物 ,得液相 2.
1. 3　黄酮的定性检查
1. 3. 1　三氯化铝反应　从液相 1、 2中取样分别滴于滤纸上 ,再滴加 1%三氯化铝乙醇溶液 ,待干燥后
置于紫外灯下观察 ,有黄绿色荧光斑点 .
1. 3. 2　氨水反应　将样品液分别滴于滤纸片上 ,置氨蒸气上熏半分钟 ,立即置紫外灯下观察 ,可观察到
收稿日期: 2004-12-07
基金项目: 内蒙古自然科学基金资助项目 ( 200208020205) ;内蒙古教育厅科学研究项目 ( N J03015)
作者简介: 丁立军 ( 1978～ ) ,男 ,内蒙古赤峰人 ,硕士研究生 ;研究方向: 天然产物利用 .
明显的黄绿色荧光斑点 .
1. 3. 3　盐酸-镁粉反应　取少许样品液分别置于试管中 ,各加适量镁粉 ,再逐滴加入盐酸数滴 ,在沸水
浴中加热 3 min,有桃红色反应 .
1. 3. 4　氯化锶反应　取样品液少许置于试管中 ,加入氯化锶甲醇溶液 ,在滴加数滴氨水 ,有红棕色沉淀
生成 .
1. 3. 5　硅胶薄层层析定性　将样品液用毛细管分别点于预先活化的硅胶薄板上 ,吹干后放入层析缸内
展开 ,展开剂: V (甲苯 )∶V (乙酸乙酯 )∶ V (甲酸 )= 5∶ 4∶ 1. 5.展开后晾干 ,以 1%三氯化铝乙醇溶液
显色 ,置紫外灯下观察有荧光斑点 .
1. 4　黄酮含量的测定
采用分光光度法测定提取物中的总黄酮量 .黄酮与金属铝离子在碱性与亚硝酸存在的条件下生成
红色的化合物 ,以芦丁作标准 ,于 510 nm波长比色定量〔5〕 .
1. 4. 1　标准曲线的绘制　标准品无水芦丁于 120℃下干燥至恒重 ,准确称取 19. 1 mg ,用 30 mL无水
乙醇微热溶解 ,置于 100 mL容量瓶中 ,加蒸馏水定容至刻度 .准确移取上述溶液 25 mL于 50 mL容量
瓶中 ,用 30%乙醇定容至刻度得芦丁标准液 ( 0. 0955 mg /mL) .
　　准确取芦丁标准液 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 mL、 6.
0 mL,分别置于 25 m L容量瓶中 ,在上述各容量瓶中准
确加入 1%亚硝酸钠溶液 1 m L,摇匀后放置 6 min;再准
确各加 5%硝酸铝溶液 1 mL,摇匀再放置 6 min;再加
4%氢氧化钠溶液 4 mL,加 30%乙醇溶液定容至刻度 ,
摇匀放置 10 min后于 510 nm波长测定吸光度 .以吸光
度 ( A)为纵坐标 ,溶液浓度 ( C)为横坐标 ,绘制标准曲线
图 (图 1) ,其回归方程为: A= 0. 125C+ 0. 007, R2=
0. 9967,其中 A表示吸光度 ,C表示黄酮的浓度 .
图 1　芦丁的标准曲线
1. 4. 2　黄酮含量的测定　将 1. 2中所得液相 1和 2各取 3 mL和 2 mL,分别移入 2只 25 mL容量瓶
中 ,然后按做标准曲线相同的方法测定吸光度 ,根据标准曲线的回归方程确定其中黄酮的含量 .
2　结果与讨论
2. 1　测定结果
表 1列出了不同浓度碱液提取的黄酮含量 .其中 W 1j、W 2j为液相 1、 2中黄酮量的计算值 ,由式 ( 1)
给出 ;狼毒大戟中总黄酮含量由式 ( 2)计算 .
Wij ( mg )=
25· Ci j· V ij
100· vi j 　 i= 1, 2(液相 1、 2) ; j= 1, 2, 3, 4, 5(实验序号 ) ( 1)
式中Cij— 根据标准曲线计算出的液相 1、 2的黄酮浓度值 , mg /100 mL
Vi j— 液相 1、 2的体积 , mL
vij— 取样毫升数 , mL
总黄酮量 ( mg /g )= (W 1j+ W 2j )20 ( 2)
式中的 20为狼毒大戟样品重量 ( g ) .
　　从表中的数据可以看出 ,碱提液经盐酸沉淀后的上清液中仍有黄酮存在 ,而这部分黄酮的量与提取
剂中碱浓度的关系不大 .实验中发现 ,用蒸馏水作为提取剂得到的提取液 ,加入盐酸后基本没有沉淀形
成 ,将其按液相 2的处理方法处理后也能检测出其中有黄酮存在 ,而且得到的结果与液相 2的结果相差
不多 .这个现象说明 ,在酸性物系中不能沉淀的这部分黄酮类物质可以考虑直接用水提取 ,这是作为药
用物质的低毒性提取方法所要考虑的问题 .
29第 1期 丁立军等　狼毒大戟水提物中总黄酮含量的测定
表 1　不同浓度碱液提取的总黄酮量
实验
序号
m ( NaO H)
(% )
液相 1 液相 2
吸光值 V1j ( ml) W 1j ( mg ) 吸光值 V2j ( ml) W2j ( mg )
总黄酮量
( mg /g )
1 0. 1 0. 16 90 9. 18 0. 134 30 3. 81 0. 65
2 0. 5 0. 196 143 18. 02 0. 152 30 4. 35 1. 12
3 1. 0 0. 20 230 29. 59 0. 160 30 4. 59 1. 71
4 1. 5 0. 19 218 26. 60 0. 156 30 4. 47 1. 55
5 2. 0 0. 15 235 22. 40 0. 15 30 4. 29 1. 33
2. 2　碱液浓度对总黄酮提取量的影响
作为提取剂的碱溶液中 NaOH的浓度对黄酮物质的提取量有影响 ,图 2中给出了不同的碱液浓度
与黄酮提取量间的关系 .
图 2　碱液浓度与提取率关系
　　由图 2可以看出 ,在相同的提取条件下 ,黄酮物质的提取量在碱含量较低时随着碱量的增加而增
大 ,当氢氧化钠浓度为 1%时总黄酮提取量最大 .随后 ,随着氢氧化钠浓度的增加 ,提取量逐渐下降 .这
个现象可以推断为由于氢氧化钠增加对狼毒的纤维产生了糊化作用 ,抑制了黄酮物质的浸出 .在实验操
作中也发现 ,碱量大时 ,物系明显地变为粘稠的浆状物 ,这个现象也从侧面支持了上面的推断 .
3　结　论
　　利用低浓度的碱溶液作为提取剂可以提出狼毒大戟中的部分黄酮物质 .
碱溶液的浓度对黄酮物质的提取量有影响 ,实验条件下 ,通过分光光度法测得 ,采用 m( NaOH)=
1%的碱液作为提取剂时 ,黄酮物质的提取量最大 .
在酸性物系中不沉淀的部分黄酮物质可以直接用水作为提取剂实现低毒性提取 .
参考文献:
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[ 3]　刁幼林 ,杨维高 .狼毒注射液中总黄酮含量测定方法的研究 [ J].时珍国医国药 , 2000, 11( 5): 407～ 408.
[ 4]　邢有权 ,孙志忠 ,马东升 ,等 .瑞香狼毒与大戟狼毒总黄酮成分比较研究 [ J].现代应用药学 , 1992, 9( 2): 60～ 63.
[ 5]　陈蓓 ,史桂云 ,仓公敖 .分光光度法测定营养液中黄酮 [ J]. 江苏预防医学 . 1997, 1: 52～ 53.
30 内蒙古工业大学学报 2005年
DETERM IN AT ION OF AMOUN T O F FLAVON E EX TRACTED
FROM EU PHORBIA FISCHERIAN A BY ALKALI LIQUOR
DIN G Li-jun, ZHANG Qian-cheng , PAN G Li-w en, JIAN Li
( School of Chemical Engineering ,
Inner Mongolia University of Technology , Huhhot 010062, PRC )
　　 Abstract: Flavone is ex tracted by alkali liquo r from eupho rbia fischeriana. Its to tal amount is
determined by the spect ropho tometric method. Ef fects of concentra tion o f alkali liquor on the amount
o f ex t racted flav one a re studied. Under experimental condi tions, the solution for ex tracting optimal
amount o f flavone proves to be m ( NaO H)= 1%
Keywords: flavone; euphorbia fischeriana; determina tion
31第 1期 丁立军等　狼毒大戟水提物中总黄酮含量的测定