全 文 ：有机化学
Chinese Journal of Organic Chemistry ARTICLE

* E-mail: caijuan2002@163.com
Received May 27, 2015; revised June 15, 2015; published online June 24, 2015.
Project supported by the National Natural Science Foundation of China (Nos. 21462015,21362009, 31360069), the Natural Science Foundation of Hainan
Province (Nos. 20152037, 20152034), and the Youth Foundation of Hainan Normal University (No. QN1434).
国家自然科学基金(Nos. 21462015, 21362009, 31360069)、海南省自然科学基金(Nos. 20152037, 20152034)及海南师范大学科研启动基金(No. QN1434)
资助项目.

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DOI: 10.6023/cjoc201505044 研究论文
红树尖瓣海莲内生真菌 Phomopsis longicolla HL-2232
次级代谢产物研究
宋鑫明 周学明 李小宝* 郑彩娟*
黄国雷 余章昕 宋小平 陈光英
(海南师范大学化学与化工学院 海南师范大学热带药用植物化学教育部重点实验室 海口 571158)
摘要 通过活性追踪的方法, 从一株来源于药用红树尖瓣海莲的内生真菌 Phomopsis longicolla HL-2232中分离鉴定了
5个生物碱类化合物、1个色原酮类化合物以及 4个甾醇类化合物, 分别鉴定为: 6-氨基嘌呤-9-羧酸甲酯(1), 腺嘌呤核
苷(2), 尿嘧啶核苷(3), N,N-二苯基尿素(4), (2S,2R,3R,4E,8E,3E)-2-(2-羟基-3-十八碳烯酰胺)-9-甲基-4,8-十八碳二烯-
1,3-二醇(5), 2-(2S-羟丙基)-5-甲基-7-羟基对氧萘酮(6), fortisterol (7), (22E)-5α,8α-表二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(8), 啤
酒甾醇(9), β-谷甾醇亚油酸酯(10). 其中化合物 1为新化合物, 化合物 5为新天然产物, 其碳谱数据至今未曾报道. 细胞
毒活性表明化合物 1～3对肿瘤细胞A549, B16F10, HL-60, MCF-7具有不同程度的抑制活性. 其中新化合物 1对乳腺癌
细胞(MCF-7)的 IC50值为 14.9 µmol•L－1、化合物 3对肺癌细胞(A549)的 IC50值为 8.6 µmol•L－1, 两者活性强于阳性对照
药顺铂.
关键词 尖瓣海莲; Phomopsis longicolla; 次级代谢产物; 生物碱; 细胞毒活性
Secondary Metabolites of a Bruguiera sexangula var. Rhynchopetala-
Derived Fungus Phomopsis longicolla HL-2232
Song, Xinming Zhou, Xueming Li, Xiaobao* Zheng, Caijuan*
Huang, Guolei Yu, Zhangxin Song, Xiaoping Chen, Guangying
(Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education, College of Chemistry and Chemical Engi-
neering, Hainan Normal University, Haikou 571158)
Abstract Under the guidance of bioassay, five alkaloids, one chromone and four steroids were isolated from the Phomopsis
longicolla HL-2232, a fungus isolated from a mangrove Bruguiera sexangula var. Rhynchopetala. Their structures were iden-
tified as 6-aminopurine-9-carboxylic acid methyl ester (1), adenine riboside (2), uridine (3), N,N-diphenyl urea (4),
(2S,2R,3R,4E,8E,3E)-2-(2-hydroxy-3-octadecenoylamino)-9-methyl-4,8-octadecadiene-l,3-diol (5), 2-(2S-hydroxypropyl)-5-
methyl-7-hydroxychromone (6), fortisterol (7), (22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol (8), cerevisterol (9) and
β-sitosteryl linoleate (10). Among them, compound 1 was a new compound. Compound 5 was a new natural product, and its
13C NMR spectroscopic data has not reported until now. Compounds 1～3 showed inhibitory activities against B16F10, A549,
HL-60 and MCF-7. Compounds 1 and 3 exhibited the higher inhibitory activities against MCF-7 and A549 than positive con-
trol cisplatin with IC50 values of 14.9 and 8.6 µmol•L
－1, respectively.
Keywords Bruguiera sexangula var. Rhynchopetala; Phomopsis longicolla; secondary metabolity; alkaloid; cototoxic activ-
ity

近年来, 海洋真菌已经成为获得结构新颖、活性独 特的次级代谢产物的重要来源, 从海洋真菌中分离得到

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了大量的具有显著药理活性的化合物[1]. 红树尖瓣海莲
为海南特有药用植物 , 民间常以其枝叶熬汁治疗疟
疾[2～4]. 研究报道其粗提物具有抗肿瘤活性, 但因资源
匮乏, 使其在抗肿瘤药物的研发和应用中受到限制. 研
究表明, 高度盐渍、土壤缺氧、高光辐射和长期遭海水
浸淹的生长环境导致红树植物富含特殊的内生微生物.
内生微生物和宿主共生, 可能参与宿主次级代谢产物的
生物合成, 从而提高宿主的生存能力和竞争力. 本课题
组为寻找具有显著药理活性的化合物, 已从尖瓣海莲内
生真菌中分离得到十多个具有生物活性且结构新颖的
化合物, 例如具有抗菌活性的 α-吡喃酮衍生物[5], 酚硫
酸盐类衍生物[6]和四环三萜类化合物[7]; 具有抗肿瘤蒽
醌及其二聚体衍生物[8]. 为进一步对尖瓣海莲内生真菌
进行活性次级代谢产物研究, 发现内生真菌 Phomopsis
longicolla HL-2232对肺癌细胞A549显示较强的抑制活
性, 对其大米发酵产物进行活性追踪分离, 从中分离获
得 5个生物碱类化合物、1个色原酮类化合物以及 4个
甾醇类化合物, 分别鉴定为 6-氨基嘌呤-9-羧酸甲酯(1)、
腺嘌呤核苷(2)、尿嘧啶核苷(3)、N,N-二苯基尿素(4)、
(2S,2R,3R,4E,8E,3E)-2-(2-羟基-3-十八碳烯酰胺)-9-甲
基-4,8-十八碳二烯-1,3-二醇(5)、2-(2S-羟丙基)-5-甲基-
7-羟基对氧萘酮(6)、fortisterol (7)、(22E)-5α,8α-表二氧
麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(8)、啤酒甾醇(9)、β-谷甾醇亚油
酸酯(10). 其中化合物 1为新化合物, 化合物 5为新天然
产物其碳谱数据至今未曾报道, 化合物 7为较为少见的
含有 7元内酯环的甾体类化合物. 细胞毒活性结果表明
化合物 1～3 具有一定的细胞毒活性, 其中新化合物 1
对乳腺癌细胞(MCF-7)的 IC50值为 14.9 µmol•L－1、化合
物 3 对肺癌细胞(A549)的 IC50值为 8.6 µmol•L－1, 两者
活性都强于阳性对照药顺铂. 对化合物 1～10进行 7种
供试致病细菌(Micrococcus tetragenus, Escherichia coli,
Staphylococcus albus, Bacillus cereus, Staphylococcus
aureus, Micrococcus luteus, Bacillus subtilis)的抑制活性
测试, 除化合物 6对大肠杆菌(Escherichia coli)具有较弱
的抗菌活性(IC50 值为 5 µg/mL)外, 其它化合物在 20
µg/mL的浓度均不显示抑制作用.
1 结果与讨论
1.1 化合物 1的结构鉴定
化合物 1 : 白色粉末状固体 , 易溶于甲醇 . 其
HR(ESI)MS 给出该化合物的分子式为 C7H7N5O2 ([M－
H]－ 192.0510, 计算值为192.0521), 不饱和度为7. IR显
示分子中有碳氮双键及碳碳双键(1660, 1600 和 1580
cm－1)存在. 1H NMR谱在低场区给出 2个烯氢质子信号
δH 8.33 (s, 1H)和 8.72 (s, 1H); 2个氨基氢信号 δH 7.54 (s,
2H). 在连氧区给出一个甲氧基质子信号 δH 4.00 (s, 3H)
(表 1). 在 13C NMR谱中给出了 7个碳信号(表 1), 其中
在低场区出现 5个烯碳信号及一个酯羰基信号(δC 155.6,
153.5, 150.2, 139.4, 120.5和 147.6), 高场区出现一个甲
氧基碳信号(δC 54.1). 据以上 1H NMR和 13C NMR数据
可以推测出该化合物为连有一个氨基及一个酯基的嘌
NH
HO
OH
O
HO
HO
HO OH
H
H
N
H
N
O
RO
O
O
HO
OH
N N
N
N
H2N
O
HO
OH
OH
N
HO
O
OH
NH
O
O
HO
N N
N
N
H2N
O
O
O
O
H
H
HO
H
O
H
O
O
H
1 3 5 7 9 13
19
1
3 5 7 9 13
6
1 2 3 4
1 3
5
7
9
11
108 9
R = Linoleate
11 15 17
11 15 17
5 7

图 1 化合物 1～10的结构
Figure 1 Structures of compounds 1～10


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呤类化合物. 将化合物 1的 1H NMR 和 13C NMR 谱与
化合物 2 比较发现非常相似[9], 不同之处在于化合物 1
比 2 多了一个酯基信号(δC 147.6), 少了一组糖基信号.
从而可以进一步确定1为含有一个嘌呤骨架和一个氨基
以及一个甲酯基的化合物. 氨基以及酯基的连接位置是
通过HMBC谱确定的, 在HMBC谱中 δH 7.54 (2H, s) 与
δC (155.6, 120.5)相关说明氨基是连在 C-6 上; δH 8.33
(1H, s)与 δC (150.2, 120.5和 147.6 )相关, δH 4.00 (3H, s)
与 δC (147.6)相关说明酯基连在 N(9)上(图 2), 化合物 1
与文献报道的 N(9)-mono-Boc-adenine 谱图数据[10]对照
进一步确证酯基连在N(9)上. 从而可知该化合物的结构
如图 2并命名为 6-氨基嘌呤-9-羧酸甲酯.
N N
N
N
H2N
O
O

图 2 化合物 1的主要 HMBC相关信号
Figure 2 Key HMBC correlations for compound 1
表 1 化合物 1的 NMR数据(DMSO-d6)
Table 1 NMR data of compound 1 (DMSO-d6)
Position δH δC
2 8.33 (s) 153.5 (CH)
4 150.2 (C)
5 120.5 (C)
6 155.6 (C)
8 8.72 (s) 139.4 (CH)
10 147.6 (C)
12 4.00 (s) 54.1 (CH3)
6-NH2 7.54 (s)

1.2 化合物 5的结构鉴定
化合物 5: 无色油状, 易溶于氯仿. 其 HRESIMS给
出该化合物的分子式为 C37H69NO4 ([M－H]－ 590.5145,
计算值为 590.5148), 不饱和度为 4. IR 谱中在 1638
cm－1以及 1514 cm－1处有特征吸收峰, 结合 1H NMR(表
2) δH 7.09 (d, J＝8.0 Hz, 1H, NH)和 13C NMR δC 173.5
表明分子中存在一个酰胺片段. 结合 13C NMR及 135
DEPT δC 74.3, 73.3及 62.2表明分子中存在两个伯羟
基及一个仲羟基, 并具有典型的神经鞘胺醇的特征.
1H NMR中 δH 0.88 (t, J＝6.8 Hz, 6H, 2CH3)推断该化
合物具有两条链. 13C NMR中显示有 6个烯碳信号(δC
136.4, 136.3, 134.1, 128.8, 127.1以及 123.2), 其中 δC
136.3 是一个季碳. 同时氢谱中 δH 1.58 为一个单峰甲
基氢信号, 碳谱中除了 δC 173.5外只有 δC 136.3一个
季碳, 因此可以说明该甲基连在 δC 136.3季碳上. COSY
谱中 2-H/3-H, 3-H/4-H 和 4-H/5-H 有相关可以确定
2-C, 3-C, 4-C 以及 5-C 依次相连的片段; 1-H/2-H,
2-H/3-H, 3 -H/4-H, 4-H/5-H, 5 -H/6-H, 6 -H/7-H 以及
7-H/8-H有相关可以确定 1-C, 2-C, 3-C, 4-C, 5-C, 6-C,
7-C以及 8-C依次相连的片段(图 3). HMBC谱中 2-H与
NH-H分别与 1-C相关, NH-H又与 2-C相关说明上述两
个链片段通过酰胺连接的(图 3). 将化合物在 1 mol/L
HCl/甲醇中进行醇解, 醇解产物用石油醚进行萃取. 萃
取物通过高分辨质谱确定其分子式为 C19H36O3 ([M－
H－] 311.2578, 计算值 311.2586)说明该物质为醇解后的
甲醇酯化物, 甲醇相经氨水中和并通过制备薄层板制备
得到一种成分经高分辨质谱确定其中分子式为
C19H37NO2 ([M－H－] 310.2754, 计算值 310.2746)说明这
个物质为 2-氨基-4,8-二烯-9-甲基-十八烷-1,3-二醇. 从
而可以推断出其中一条链为 18 个碳, 另外一条链为 19
个碳. 1H NMR中 3位和 4位的最大偶合常数分别为 15.6
Hz 以及 15.2 Hz, 说明这两个位置的双键都为 E 型.
表 2 化合物 5的 NMR数据(CDCl3)
Table 2 NMR data of compound 5 (CDCl3)
Position δH (J in Hz) δC Position δH (J in Hz) δC
1
3.72 (dd, 10.8, 2.8, H-eq)
3.91 (dd, 10.8, 4.0, H-ax)
62.2 (CH2) 17 1.25～1.27 (m) 22.8 (CH2)
2 3.89～3.91 (m) 54.7 (CH) 18 0.88 (t, 6.8) 14.3 (CH3)
3 4.29 (dd, 4.8, 4.4) 74.3 (CH) 19 1.58 (s) 16.2 (CH3)
4 5.51 (dd, 15.2, 6.4) 128.8 (CH) 1′ 173.5 (C)
5 5.80 (dt, 15.2, 6.4) 134.1 (CH) 2′ 4.53 (d, 6.8) 73.3 (CH)
6 2.04～2.11 (m) 32.7 (CH2) 3′ 5.55 (dd, 15.6, 6.8) 127.1 (CH)
7 2.04～2.11 (m) 27.7 (CH2) 4′ 5.88 (dt, 15.6, 6.8) 136.4
8 5.08 (dd, 6.8, 5.2) 123.2 (CH) 5′ 2.04～2.11 (m) 32.4 (CH2)
9 136.3 (CH) 6′～15′ 1.25～1.27 (m) 29.8 (CH2)
10 1.95 (t, 7.6) 39.9 (CH2) 16′ 1.25～1.27 (m) 32.1 (CH2)
11 1.29～1.31 (m) 28.2 (CH2) 17′ 1.25～1.27 (m) 22.8 (CH2)
12～15 1.25～1.27 (m) 29.8 (CH2) 18′ 0.88 (t, 6.8) 14.3 (CH3)
16 1.25～1.27 (m) 32.1 (CH2) NH 7.09 (d, 8.0)


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NOESY 谱图中显示 2-H/4-H 和 3-H/5-H 有相关可以确
定 2-H和 3-H是处于反轴位置; 7-H/19-H和 8-H/10-H有
相关可以确定 8位的双键是E型; 2-H/2-H相关说明 2-H
和 2-H在同一侧. 综上所述并结合氢谱、碳谱数据以及
旋光( 24D[ ]α －2.76 (c 2.0 mg/mL), CHCl3)与文献[11]对
比可以确定该化合物的绝对构型为 2S,2R,3R,4E,8E,3E.
HO
NH
HO
OH
O
HO
NH
HO
OH
O

图 3 化合物 5的主要 HMBC, COSY以及 NOESY相关信号
Figure 3 Key HMBC, COSY and NOESY correlations for
compound 5
化合物2～4和6～10为已知化合物, 经旋光数据以
及 1H/13C NMR 分析及与文献对比, 分别鉴定为腺嘌呤
核苷(2)[9]、尿嘧啶核苷(3)[12]、N,N-二苯基尿素(4)[13]、
2-(2S-羟丙基)-5-甲基-7-羟基对氧萘酮(6)[14]、Fortisterol
(7)[15]、 (22E)-5α,8α-表二氧麦角甾 -6,22-二烯 -3β-醇
(8)[16]、啤酒甾醇(9)[7]、β-谷甾醇亚油酸酯(10)[17]. 其中
化合物7为较为少见的含有7元内酯环的甾体类化合物.
采用MTT比色法[18]对化合物 1～5进行了 4种肿瘤
细胞的活性测试, 结果表明化合物 1～3 具有一定的细
胞毒活性, 其中新化合物 1 对乳腺癌细胞(MCF-7)的
IC50值为 14.9 µmol•L－1、化合物 3对肺癌细胞(A549)的
IC50值为 8.6 µmol•L－1, 两者活性都强于阳性对照药顺
铂(表 3).
表 3 化合物 1～5细胞毒活性测试结果
Table 3 Cytotoxic activities of compounds 1～5
化合物 IC50/(µmol•L
－1)
B16F10 A549 HL-60 MCF-7
1 29.0 21.2 4.1 14.9
2 18.2 12.5 14.4 26.2
3 16.7 8.6 15.9 31.9
4 ＞40 ＞40 ＞40 ＞40
5 ＞40 ＞40 ＞40 ＞40
顺铂(MW300) 11.3 10.2 1.3 21.6

采用微量稀释法[19]对化合物 1～10进行 7种供试致
病细菌(M. tetragenus, E. coli, S. albus, B. cereus, S. au-
reus, M. luteus, B. subtilis)的抑制活性测试, 除化合物 6
对大肠杆菌(Escherichia coli)具有抗菌活性(IC50 值为 5
µg/mL)外, 其它化合物在 20 µg/mL 的浓度均不显示抑
制作用(表 4).
2 结论
通过活性追踪的方法, 从一株来源于药用红树尖瓣
海莲的内生真菌 Phomopsis longicolla HL-2232 中分离
鉴定了 5个生物碱类化合物、1个色原酮类化合物以及
4个甾醇类化合物. 其中化合物 1为新化合物, 化合物 5
为新天然产物其碳谱数据至今未曾报道, 化合物 7为较
为少见的含有 7 元内酯环的甾体类化合物. 对化合物
1～5进行了 4种肿瘤细胞的活性筛选, 结果表明化合物
1～3对肿瘤细胞 A549, B16F10, HL-60, MCF-7具有不
同程度的抑制活性. 其中新化合物 1 对乳腺癌细胞
(MCF-7)的 IC50值为 14.9 µmol•L－1、化合物 3对肺癌细
胞(A549)的 IC50值为8.6µmol•L－1, 活性强于阳性对照药
顺铂.
表 4 化合物 1～10抑菌活性测试结果
Table 4 The antibacterial activity test results of compounds 1～10
化合物 最小抑制浓度MIC/(µg•mL
－1)
S. aureus B. subtilis E. coli M. luteus M. tetragenus S. albus B. cereus
1 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
2 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
3 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
4 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
5 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
6 ＞20 ＞20 5 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
7 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
8 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
9 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
10 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20 ＞20
CPFXa 0.625 0.313 0.625 0.156 0.313 0.156 0.625
a阳性对照: 环丙沙星.

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3 实验部分
3.1 仪器与材料
Bruker AV-400MHz 型核磁共振仪; LCMS-IT-TOF
超高效液相色谱-高分辨质谱联用仪(日本岛津公司);
Thermo Nicolet 6700(美国 Nicolet公司); 十八烷基硅胶
(日本东京 YMC 公司; 12 nm～50 μm); 葡聚糖凝胶
Sephadex LH-20[安法玛西亚技术(上海)有限公司]; 柱
层析硅胶和薄层层析硅胶板(青岛海洋化工厂); 色谱试
剂均为分析纯.
红树尖瓣海莲(Bruguiera sexangula var. rhynchope-
tala)于 2012年 8月采自海南东寨港红树林保护区, 从中
分离获得一株内生真菌. 结合形态、生理生化特征及分
子鉴定(GenBank accession number KJ466981), 确定该
菌株为拟茎点霉菌 Phomopsis longicolla 菌株保藏在海
南师范大学热带药用植物化学教育部重点实验室(保藏
号: HL-2232). 菌种以PDA (马铃薯200 g, 葡萄20 g, 天
然海水 1000 mL以及琼脂粉 18 g)为培养基, 4 ℃保存.
3.2 内生真菌的分离及发酵提取
取尖瓣海莲叶用清水洗净, 用 75%的酒精浸泡 1
min, 无菌水冲洗 3遍, 将组织切片(大小约 0.2 cm2), 放
置于 PDA培养基上, 于 28 ℃恒温倒置培养. 待有菌丝
长出后挑取到新的培养基上纯化, 纯化后转接与试管斜
面保存.
发酵培养基: 大米培养基(100 g大米, 100 mL天然
海水), 室温静置培养四个星期. 将保存的菌株取出复
苏后转接到 6个装有 200 mL的土豆液体培养基的锥形
瓶(500 mL)中, 在恒温摇床中 28 ℃振荡培养 3 d获得种
子液. 取种子液 4 mL加入到大米培养基中(1000 mL锥
形瓶 286个), 按上述条件发酵. 发酵物先用乙酸乙酯浸
提 3 次, 再用甲醇浸提 3 次, 减压浓缩得到乙酸乙酯粗
提物 225.4 g, 甲醇粗提物 124.2 g.
3.3 提取与分离
对发酵物甲醇提取物 (124.2 g)进行硅胶柱层析
(100～200 目), 以石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇为
溶剂梯度洗脱, 分为 5个组分. Fr.5 (23.1 g)经过反复硅
胶柱层析(200～300 目, 300～400 目), 后用凝胶柱层析
[Sephadex LH-20, V(氯仿)∶V(甲醇)＝1∶1洗脱]得到 3
个组分 Fr.5.1～Fr.5.3, Fr.5.1 经反相硅胶[V(甲醇)∶
V(水)＝1∶3]纯化得到化合物 1 (25.1 mg)和 4 (15.3 mg),
Fr.5.2 经反相硅胶[V(甲醇)∶V(水)＝1∶5]得到化合物 2
(42.0 mg)和 3 (21.6 mg). Fr.4 (26.3 g)经过反复硅胶柱层
析(200～300 目, 300～400 目)得到 2 个组分 Fr.4.1 和
Fr.4.2. Fr.4.1经反复硅胶柱层析及凝胶柱色谱[Sephadex
LH-20, V(氯仿) ∶V(甲醇)＝1∶1]纯化得到化合物 5
(25.3 mg)和 10 (21.6 mg), 对 Fr.4.2 用反相硅胶柱层析
[V(甲醇) ∶V(水)＝85∶15]纯化后得到化合物 6 (5.1
mg), 7 (7.2 mg), 8 (8.0mg)以及 9 (16.1mg).
3.4 活性测试
细胞毒活性采用 MTT 比色法进行测试: 取对数生
长期细胞培养于 96孔培养板内, 每孔 100 μL(含 1000～
2000 个肿瘤细胞). 给药组加入含有不同浓度化合物,
每药设 4～5个剂量组, 每组至少设 3个平行孔. 对照组
加入与化合物等体积的溶剂. 置于 5% CO2培养箱中于
37 ℃培养, 4 d 后弃去培养液, 每孔加入 200 μL 0.2%
MTT 溶液. 再在 37 ℃下保温 4 h, 弃去上清液, 每孔
加入 DMSO 150 μL 溶解甲臜颗粒, 轻度振荡后, 用酶
标仪在参考波长 450 nm、检测波长 570 nm 条件下测定
光密度值(OD). 绘制曲线, 计算 IC50值.
抗菌活性采用微量稀释法进行测试: 先将样品用
DMSO 配制成 1 mg/mL, 放置在灭菌的小离心管中. 将
液体培养的细菌菌种用培养液进行稀释, 稀释度为 1∶
1000. 用无菌的移液器将稀释的液体菌种 198 μL 加入
到 2 μL 各种样品溶液中. 每个样品至少设两个平行孔.
震荡混合后 37 ℃培养 24 h. 用酶标仪 630 nm测吸光度
进行粗筛. 将粗筛效果好的样品溶液在 96 孔微量稀释
板作二倍递减浓度稀释. 分装于微量稀释板孔内或用微
量加液器直接在稀释板孔内作二倍稀释. 然后接种稀释
菌液. 其中留一孔作为药液对照. 另一孔仅加培养基和
菌液作为菌对照. 试验完毕后. 用微量搅拌器震荡混匀
后. 置 37 ℃温培养 24 h. 用酶标仪 630 nm 测吸光度.
能抑制试验菌生长的最低浓度, 即为该微生物的最小抑
菌浓度.
3.5 化合物 5水解方法
取化合物 5 (10 mg)在 2 mL 1 mol/L HCl/甲醇中室
温搅拌进行醇解, 并用 TLC进行监测. 待到醇解完醇解
产物用石油醚进行萃取(4 mL×3), 合并萃取物并浓缩
进行 MS 测试. 甲醇相用氨水进行中和, 并用制备薄层
板进行制备得到的物质进行MS测试.

辅助材料(Supporting Information) 化合物 1和化合物
5 的谱图数据. 这些材料可以免费从本刊网站(http://
sioc-journal.cn/)上下载.
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