全 文 ：头花蓼对幽门螺杆菌胃炎大鼠血清干扰素-γ 和白细
胞介素-4 含量的影响*
＊
冯海潮＊＊，孙朝琴，张 姝，何 芸，吴 琼，莫 非，罗昭逊＊＊＊
(贵州医科大学，贵州 贵阳 550004)
［摘 要］目的:探讨苗药头花蓼对幽门螺杆菌(H． pylori)感染相关性胃炎大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞
介素-4(IL-4)含量的影响。方法:30 只 SD大鼠随机分为空白组、模型组及头花蓼组，采用 H． pylori灌胃造模，空
白组灌胃无菌脑心浸液肉汤，模型组和头花蓼组用消炎痛预处理后灌胃 H． pylori制作 H． pylori感染相关性胃炎
大鼠模型，之后空白组和模型组大鼠灌胃生理盐水、头花蓼组大鼠灌胃头花蓼 2 周;采用 HE染色评估胃黏膜炎
炎症损伤程度，酶联免疫(ELISA)法检测 3 组大鼠血清 IFN-γ、IL-4 含量，实时荧光定量 PCＲ(real time-PCＲ)检测
胃黏膜中 IFN-γ、IL-4 mＲNA的相对表达水平。结果:H． pylori 灌胃造模后，大鼠胃窦黏膜有 H． pylori 定植，HE
染色结果显示模型组大鼠胃组织呈现相关性胃炎病理形态改变;头花蓼干预后，H． pylori 感染大鼠胃黏膜炎症
明显改善，IFN-γ mＲNA表达水平明显下调、IFN-γ血清含量明显降低，与模型组比较差异均有统计学意义(P ＜
0. 05);而头花蓼干预对 IL-4 分泌的影响比较轻。结论:头花蓼可减轻 H． pylori对胃黏膜炎性损伤，其机制可能
是通过下调 IFN-γ mＲNA转录水平而实现的。
［关键词］头花蓼;苗药;幽门螺杆菌;干扰素-γ;白介素-4;炎症;大鼠，Sprague-Dawley
［中图分类号］Ｒ931 ［文献标识码］A ［文章编号］1000-2707(2016)09-1037-05
DOI:10． 19367 / j． cnki． 1000-2707． 2016． 09． 011
Effects of Polygonum capitatum on Content of IFN-γ and
IL-4 in Ｒats with Helicobacter pyloric Gastritis
FENG Haichao，SUN Chaoqin，ZHANG Shu，HE Yun，WU Qiong，MO Fei，LUO Zhaoxun
(Guiyang Medical University，Guiyang 550004，Guizhou，China)
［Abstract］Objective:To investigate the effects of Polygonum capitatum on content of IFN-α and IL-
4 in rats with Helicobacter Pyloric gastritis． Methods:30 SD rats were randomly divided into blank
group，model group and Polygonum capitatum group． Gastritis was induced in rats by oral gavage with
H． pylori;blank group was treated with sterile Brain Heart Infusion Broth，model group and Polygonum
capitatum group were first treated with indomethacin，then served to construct H． pylori infected rele-
vance gastritis rats model． Blank group and model group were treated with normal saline irrigation，Po-
lygonum capitatum group were treated with Polygonum capitatum irrigation for two weeks;HE staining
was adopted to evaluate the Acute gastritis inflammation damage level，ELISA to test IFN-γ and IL-4
content of three groups;real time-PCＲ to test relative expression level of IFN-γ mＲNA and IL-4 mＲ-
NA in mucositis． Ｒesult:After treatment，gastric inflammation in Polygonum capitatum group was im-
proved obviously． The mＲNA expression and the serum content of IFN-γ in Polygonum capitatum
group were significantly lower than the model group，it was statistically significant (P ＜ 0． 05)． But
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第 41 卷 第 9 期
2016 年 9 月
贵 州 医 科 大 学 学 报
JOUＲNAL OF GUIZHOU MEDICAL UNIVEＲSITY
Vol． 41 No． 9
2016． 9
* *［基金项目］贵州省科学技术基金［黔科合(2014)2027 号］;贵州省科技合作计划基金［黔科合 LH(2015)7417 号］;贵州省卫生计生委科学技术基金
(gzwikj2015 － 1 － 003) ;贵阳市科技局计划项目［筑科合同(2014001)］
＊＊贵阳医学院 2013 级硕士研究生
＊＊＊通信作者 E-mail:418611578@ qq． com
网络出版时间:2016 － 09 － 13 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /52． 5012． Ｒ． 20160913． 2240． 018． html
Polygonum capitatum had little effect on secretion IL-4 in the process of H． pylori infection． Conclu-
sion:Polygonum capitatum could inhibit H． pylori-associated gastritis probably via down-regulation of
IFN-γ mＲNA expression．
［Key words］Polygonum capitatum;Miao medicine;Helicobacter pyloric;interferon-γ;interleukin-4;
inflammation;rats，Sprague-Dawley
头花蓼是贵州省的精选苗药，具有清热利湿，
活血解毒的功效，对幽门螺杆菌具有抗菌活
性［1 － 3］。课题组前期研究发现头花蓼体外可刺激
淋巴细胞增殖，促进干扰素 γ(interferon-γ，IFN-γ)
和白细胞介素 4(interleukin-4，IL-4)的分泌，参与
机体免疫调节［4］。INF-γ、IL-4 分别作为 T 淋巴细
胞的两种亚型 Th1 型和 Th2 型的代表因子，其分泌
水平可一定程度上反映机体的免疫状态。本研究
采用酶联免疫(ELISA)和实时荧光定量 PCＲ(real
time-PCＲ)方法检测头花蓼治疗前后 H． pylori 胃炎
大鼠血清 IFN-γ、IL-4 的含量及胃黏膜 IFN-γ、IL-4
mＲNA相对表达水平，旨在探讨头花蓼改善 H． py-
lori感染相关性胃炎的免疫调节作用机制。
1 材料与方法
1． 1 材料、试剂与仪器
头花蓼浸膏粉(批号 141196)，由浙江众益有
限有限责任公司提供。H． pylori 驯化株 SS200 由
中国疾病控制中心传染病所张建中教授惠赠，保存
于贵州医科大学医学检验学院临床检验教研室。
SPF级 SD大鼠 30 只，周龄 6 ～ 8 周，体质量 150 ～
180 g，购自第三军医大学实验动物中心，合格证号
SYXK(渝)2012 － 0001，实验获得贵州医科大学伦
理委员会批准。试剂有哥伦比亚血琼脂粉(购自
Oxoid)，脑心浸液琼脂(购自 Oxoid)，无菌脱纤维
羊血(购自南京便诊生物科技有限公司)，ELISA
试剂盒(购自 ebioscience)，ＲNA 提取试剂盒(购自
Omega)，ＲNA 逆转录试剂盒(购自 Takara)，real
time-PCＲ试剂盒(购自 Takara)。主要仪器有酶标
仪(BIO-xMark生产)，三气培养箱(Thermo 生产)，
荧光定量 PCＲ仪(购自德国 ＲOCHE)。
1． 2 方法
1． 2． 1 H． pylori培养和菌液制备 H． pylori 培养:
H． pylori复苏后稳定传代 3 次，取长势良好菌苔接
种于哥伦比亚血琼脂平板，置微需氧环境(85%
N2，10%CO2，5%O2)培养 48 h。菌悬液制备:无菌
接种环从哥伦比亚血琼脂平板上收集 H． pylori 菌
落，以预冷的无菌脑心浸液肉汤制成混悬液，
3 000 g，4 ℃离心 3 min后，弃上清液，洗涤 3 次，采
用比浊法调整菌悬液浓度为 1 × 1012 cfu /L，预冷，
备用。
1． 2． 2 H． pylori感染相关性胃炎大鼠模型 30 只
SPF级 SD大鼠随机分为空白组、模型组和头花蓼
组，每组 10 只;参照文献［5 － 6］，大鼠适应性饲养
1 周后，禁食禁水 12 h，模型组和头花蓼组采用
1. 0 mL /只的消炎痛药液(1g /L)预处理 6 h 后用
H． pylori悬液 1. 5 mL /只隔天灌胃，连续 5 次;空白
组以等量的无菌脑心浸液肉汤代替。灌胃 8 周后，
每组随机取 3 只大鼠处死，留取胃窦黏膜组织用于
H． pylori相关性胃炎模型鉴定。
1． 2． 3 H． pylori 相关性胃炎模型鉴定 H． pylori
感染的鉴定:采用快速尿素酶实验、组织切片 Gi-
emsa染色以及细菌培养检测 H． pylori，3 项实验中
至少 2 项阳性判断为 H． pylori感染。H． pylori相关
性胃炎评价:取胃窦黏膜组织用 4%中性甲醛固
定，常规 HE 染色，病理医生双盲阅片，行胃黏膜慢
性炎症评分。SD大鼠胃黏膜有 H． pylori 定植且出
现慢性炎症病理学改变，判断为造模成功。
1． 2． 4 头花蓼干预治疗 成功建模后，头花蓼组
参照文献［7 － 8］的头花蓼临床［3. 49 g 生药 /(kg
·d)］3 倍剂量作为治疗 H． pylori 感染 SD 大鼠的
给药剂量进行灌胃处理，连续 14 d(1 次 /d)，空白
组和模型组给予等量的无菌生理盐水。治疗结束
后 4 周处死所有大鼠，留取大鼠胃窦黏膜组织和静
脉血，用于后续研究。
1． 2． 5 血清 FN-γ和 IL-4 含量 取各组大鼠血清
200 μL，采用 ELISA 法检测血清 IFN-γ 和 IL-4 含
量，具体操作按 ELISA试剂盒说明书进行。
1． 2． 6 胃黏膜组织 IFN-γ、IL-4 mＲNA 表达 采
用 real time-PCＲ 法，用 Omega 试剂盒提取胃窦黏
膜组织的 ＲNA，逆转录为 cDNA。采用 SYBＲ Ⅱ
进行 real time-PCＲ，引物由上海生物工程技术服务
公司合成，引物信息见表 1。PCＲ 反应条件:95 ℃
30 s，95 ℃ 5 s、60 ℃ 20 s，40 个循环。采集 IFN-γ、
IL-4、β-actin内参照基因各循环荧光信号，用 EX-
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贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷
CEL软件计算 Ct 值、ΔΔCt 值及相对表达值 ＲQ，
ΔCT = CT目的基因 － CT内参基因，ΔΔCT = ΔCT给药组 －
ΔCT模型组，IFN-γ、IL-4 的 ＲQ以 2
－ ΔΔCT表示。
表 1 PCＲ引物信息、基因序列号及产物大小
Tab． 1 Primers sequence of each gene
基因 引物序列(5 to 3) 基因序列号 产物(bp)
β-actin F GAGACCTTCAACACCCCAGC
NM_031144． 3 144
Ｒ ATGTCACGCACGATTTCCC
IFN-γ F CGAGGTGAACAACCCACAG
NM_138880． 2 104
Ｒ GACTCCTTTTCCGCTTCCTT
IL-4 F AACAAGGAACACCACGGAGA
NM_201270． 1 116
Ｒ CACCGAGAACCCCAGACTT
1． 3 统计学分析
数据使用 SPSS 18． 0 进行分析，计量资料采用
均数 ±标准差(x ± s)表示，组间差异行两独立样本
t检验，P ＜ 0. 05 为差异具有统计学意义。
2 结果
2． 1 H． pylori相关性胃炎模型
H． pylori感染 8 周后，模型组大鼠胃黏膜快速
尿素酶实验阳性，Giemsa 染色见胃窦腺腔内分布
有细小、弯曲的短杆菌，微需氧培养见细小、湿润、
透明的针尖样菌落，菌落经尿素酶、触酶和氧化酶
实验证实为 H． pylori，H． pylori感染率为 100%;HE
染色结果显示模型组大鼠胃黏膜破损、糜烂，腺体
肿胀，黏膜下层有大量淋巴细胞浸润，甚至形成
淋巴肉芽肿，呈现相关性胃炎病理形态改变(图
1)。说明成功构建 H． pylori感染相关性胃炎动物
模型。
2． 2 大鼠胃黏膜组织的 HE染色及病理评分
HE 染色结果显示，空白组大鼠胃黏膜完整，
腺体规则，黏膜下层偶见淋巴细胞浸润;模型组大
鼠胃黏膜破损、糜烂，腺体肿胀，黏膜下层有大量淋
巴细胞浸润;经头花蓼治疗后，大鼠胃黏膜损伤得
到一定程度的修复，黏膜比较完整，腺体比较规则，
黏膜下层散在少量淋巴细胞浸润，炎症有所改善;
与空白组病理评分比较，模型组显著升高，差异有
统计学意义(P ＜ 0. 05)，与模型组比较，头花蓼组
显著降低，差异有统计学意义(P ＜ 0. 05)。见图 1，
表 2。
注:A 为空白组，B为模型组，C为头花蓼组;箭头为胃黏膜腺体肿胀
图 1 SD大鼠胃黏膜组织的病理学变化(HE，× 400)
Fig． 1 The pathological change of gastric mucosa of SD rats
表 2 3 组大鼠胃黏膜病理评分(x ± s)
Tab． 2 Histological score of the gastric
mucosa in 3 groups
组别 病理评分(分)
空白组 0． 55 ± 0． 37
模型组 2． 59 + 0． 59(1)
头花蓼组 1． 73 ± 0． 40(1)(2)
(1)与空白组比较，P ＜ 0． 05;(2)与模型组比较，P ＜ 0． 05
2． 3 血清 FN-γ和 IL-4 含量
H． pylori感染后，模型组大鼠血清 IFN-γ 含量
明显高于空白组，差异有统计学意义(P ＜ 0. 05);
经头花蓼治疗后，IFN-γ含量明显降低(P ＜ 0. 05)。
H． pylori感染后，模型组大鼠血清 IL-4 含量虽较空
白组降低，但差异无统计学意义(P ＞ 0. 05);经头
花蓼治疗后，血清 IL-4 含量虽有所升高，但与模型
组比较，差异也无统计学意义(P ＞ 0. 05)。见图 2。
2． 4 胃黏膜组织 IFN-γ和 IL-4 mＲNA表达
与空白组比较，模型组大鼠胃黏膜 IFN-γ mＲ-
NA相对表达量升高，IL-4 mＲNA相对表达量降低，
差异有统计学意义(P ＜ 0. 05)，经头花蓼治疗后，
与模型组比较，大鼠胃黏膜 IFN-γ mＲNA的相对表
达量下降，差异有统计学意义(P ＜ 0. 05);IL-4
mＲNA的相对表达量虽有所升高，但差异无统计学
意义(P ＞ 0. 05)。见图 3。
9301
9 期 冯海潮等 头花蓼对幽门螺杆菌胃炎大鼠血清干扰素-γ和白细胞介素-4 含量的影响
注:A为 FN-γ，B为 IL-4;(1)与空白组比较，P ＜ 0． 05;(2)与模型组比较，P ＜ 0． 05
图 2 大鼠血清 FN-γ和 IL-4 含量
Fig． 2 Cytokine levels in serum of rats
注:(1)与空白组比较，P ＜ 0． 05;(2)与模型组比较，P ＜ 0． 05
图 3 3 组大鼠胃黏膜组织中 IFN-γ、
IL-4 mＲNA相对表达量比较
Fig． 3 mＲNA levels of IFN-γ and IL-4 of rat
gastric mucosa in the three groups
3 讨论
H． pylori感染是引起胃炎、胃及十二指肠溃疡
乃至胃癌的独立危险因素。随着广谱抗生素的广
泛应用，使得 H． pylori 耐药株不断增加，研发高效
及高选择性的抗 H． pylori 药物已成为趋势。有研
究报道，中药或中西医结合用药可提高 H． pylori根
除率，改善胃黏膜炎症或抑制消化性溃疡，从现代
医学角度分析有功效的中药抑制 H． pylori 感染的
作用机制［9］。中药抑制 H． pylori 相关性胃炎的可
能机制为抑制其毒力因子的表达、调节感染所致的
免疫失衡、纠正胃肠激素分泌紊乱、干扰信号通路
转导等。本研究采用头花蓼治疗 H． pylori 感染 SD
大鼠胃炎模型，对头花蓼的可能作用机制进行初步
分析。辅助性 T 细胞Ⅰ型和Ⅱ型(Th1、Th2)在人
体的免疫中起着重要作用。Th1 主要执行因子是
IFN-γ和 IL-2，而 Th2 主要执行因子是 IL-4、IL-10
等，二者通过分泌不同的细胞因子，彼此交叉调节，
相互抑制，共同维持 Th1 /Th2 平衡。H． pylori 感染
后，其抗原持续刺激引起机体局部或整体发生免疫
反应。人体和动物实验均证实 H． pylori 感染后胃
黏膜发生以 Th1 型为主的免疫反应，Th1 型细胞因
子分泌增多，而 Th2 型细胞因子 IL-4、IL-10 很少或
缺乏［10］。但机体在抵御外来抗原与限制自身组织
损伤的过程中同时存在 Th1、Th2 反应与炎症反应
自我平衡的过程，两种免疫反应相互制约，此起彼
伏，其结果决定疾病的结局［11］。
本研究中，H． pylori感染后，大鼠胃黏膜 IFN-γ
mＲNA表达量增高，血清 IFN-γ 水平上升，而胃黏
膜 IL-4 mＲNA 表达明显降低，血清 IL-4 水平无明
显改变，胃黏膜呈现慢性炎症损伤。表明 H． pylori
感染后，发生了 Th1 偏移，Th2 应答受到抑制，Th1
应答分泌的大量 IFN-γ，增强了局部各种炎症细胞
如巨噬细胞、中性粒细胞的活性，刺激释放炎症介
质、细胞因子、活性氧簇和活性单簇，引起胃上皮损
伤，同时因 IFN-γ与 IL-4 存在相互限制的关系，主
要针对胞外感染的 Th2 应答受到抑制，H． pylori 不
能有效的被清除，细菌长期持续感染，胃黏膜损伤
难以得到修复。另外，有研究报道 H． pylori 感染早
期 Th1 应答占优势地位产生过量 IFN-γ，增强各类
炎症细胞活性，造成胃黏膜上皮细胞的损伤;而关
于 H． pylori感染后 Th2 应答出现较晚，说明 Th2 应
答在 H． pylori感染早期发挥作用甚微［12］。本研究
中大鼠血清 Th2 型细胞因子在 H． pylori 感染后或
经治疗后，其水平变化轻微，支持以上观点。经头
花蓼治疗后，IFN-γ mＲNA表达量降低，血清 IFN-γ
水平降低，IL-4 mＲNA 及血清 IL-4 含量有所升高，
提示头花蓼在促进 T 细胞向 Th2 细胞分化方面起
重要作用，能抑制 IFN-γ水平并下调 Th1 型免疫反
应，从而减轻由 H． pylori感染所致的炎症反应。同
时下调 Th2 应答的因素减弱，有利于炎症的恢复。
总之，本研究发现头花蓼可减轻大鼠胃黏膜炎
0401
贵 州 医 科 大 学 学 报 41 卷
症反应，其机制与降低 IFN-γ 等致炎因子水平，抑
制 H． pylori感染所致 Th1 /Th2 失衡，从而减轻黏膜
炎症有关。然而参与 Th1 /Th2 免疫调节网络的细
胞因子众多，彼此之间相互联系，关系错综复杂，关
于头花蓼经何种途径调节 Th1 /Th2 的失衡作用机
制仍不明确，还有待进一步研究证实。
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(2016－04－28 收稿，2016－08－12 修回)
中文编辑:吴昌学;英文编辑:赵
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(2016－04－29 收稿，2016－08－08 修回)
中文编辑:周 凌;英文编辑:刘 华
1401
9 期 冯海潮等 头花蓼对幽门螺杆菌胃炎大鼠血清干扰素-γ和白细胞介素-4 含量的影响