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苗药观音草中总皂苷的含量测定



全 文 :民 族 医 药
Ethnomedicine and Ethnopharmacy
基金项目:贵州省教育厅自然科学研究项目,黔教科 (2007)074 号。
作者简介:刘亮 (1981 ~) ,男,汉,硕士研究生,主要从事中药、民族药化学成分及质量研究,联系电话:18212120284
苗药观音草中总皂苷的含量测定
刘 亮1* 杜 江2 潘炉台2 冯 华3
1. 遵义医药高等专科学校,贵州 遵义 563002;2. 贵阳中医学院,贵州 贵阳 550002;
3. 遵义市药品检验所,贵州 遵义 563000
【摘 要】 目的:建立观音草总皂苷含量测定的方法。方法:以薯蓣皂苷为对照品,采用紫外分光光度法,高氯酸显色,在 460nm
处测定吸光度,计算观音草中总皂苷的含量。结果:薯蓣皂苷的质量浓度在 4 ~ 24μg·mL -1与吸光度成良好线形关系,r = 0. 9995 (n = 6) ,
平均回收率为 98. 96%,RSD = 1. 78%。结论:该法可用于观音草的含量测定。
【关键词】 苗药观音草;总皂苷;含量测定
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2011)04 - 0002 - 02
观音草 Reineckia carnea (Andr.)Kunth 为百合科植物
吉祥草的带根全草,苗医理论认为其药性为性冷,质征为
气微味甜,入热经,走肺、肝二架,表、中、里三关。治
疗肺热咳嗽,跌打损伤,疮毒等。观音草是苗族地区常用
药之一。现在观音草主要作为止咳化痰药来使用,如贵州
省安顺制药厂生产的“咳速停糖浆”;贵州联盟药业生产的
“咳清胶囊”;遵义万才药业公司生产的 “复方吉祥草含
片”。通过查阅文献,我们发现以观音草为主药的制剂在质
量控制,含量测定方面的研究较少,难以进行深入开发,
本文通过紫外法,以薯蓣皂苷为对照品对观音草中总皂苷
的含量测定进行了方法学的考察,为苗药观音草的质量控
制提供了新思路,新尝试。
1 仪器与试药
UV75 - 18 可见分光光度计 (天津市拓普仪器有限公
司) ;DHG 90AOA型电热恒温鼓风干燥箱 (宁波江南仪器
厂) ;Senco R系列旋转蒸发仪 (上海申生科技有限公司) ;
FY130 型药物粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公司) ;DKS
- 26 型电热恒温水浴锅 (宁波江南仪器厂) ;FA20048 型
电子天平 (上海越平科学仪器有限公司)。
薯蓣皂苷对照品购于上海华壹生物科技有限公司 (批
号:19057 - 60 - 4) ;观音草药材采集于贵州遵义,经遵义
医药高等专科学校张学愈副教授鉴定为百合科植物观音草
Reineckia carnea (Andr.)Kunth;其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备
精密称取观音草药材粗粉 5 克,置索氏提取器中用甲
醇回流提取 4h,提取液回收甲醇后加入蒸馏水溶解,过滤,
并转移至 100mL 的容量瓶中加蒸馏水稀释至刻度,摇匀。
准确吸取 10mL于分液漏斗中,用石油醚分 6 次萃取 (15,
10,10,10,10,10mL) ,弃去石油醚液,水液再用水饱合
正丁醇分 4 次萃取 (15,10,10,10mL) ,正丁醇萃取液用
正丁醇饱和的水 20mL洗涤,减压回收正丁醇至干,残渣用
甲醇溶解并定容于 25mL容量瓶中,作为供试品溶液。
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取薯蓣皂苷对照品 1. 2mg,置于 10mL 容量瓶
中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
2. 3 测定波长的选择
分别精密吸取对照品溶液 1. 0mL、供试品溶液 0. 3mL
置于 10mL具塞试管中,挥干甲醇,再分别加入 5%的香草
醛冰醋酸溶液 0. 2mL 和高氯酸 0. 8mL,摇匀,密塞,60℃
水浴显色 15min,取出后立即用冰水冷却 5min,再加入 5mL
冰醋酸稀释,摇匀,静置 10min,在 400 ~ 800nm进行扫描,
结果见图 1 及图 2,两者均在 460nm 处有最大吸收峰 (在
410nm以下出现无限吸收)。
2. 4 标准曲线的制备
分别精密移取薯蓣皂苷对照品溶液 0. 0,0. 2,0. 4,
0. 6,0. 8,1. 0 和 1. 2mL 置于 10mL 具塞试管内,挥干甲
醇,再分别加入 5%的香草醛冰醋酸溶液 0. 2mL 和高氯酸
0. 8mL,摇匀,密塞,60℃水浴显色 15min,取出后立即用
冰水冷却 5min,再加入 5mL 冰醋酸稀释,摇匀,静置
10min,于 460nm处测定其吸光度。以吸光度 (A)为纵坐
标,质量浓度 (C)为横坐标进行线性回归。结果表明,薯
蓣皂苷在 4 ~ 24μg /mL 吸光度呈良好的线性关系。回归方
程为 A =0. 019121C + 0. 006133,r = 0. 9995。
图 1 对照品溶液波长扫描
图 2 供试品溶液波长扫描
2. 5 稳定定性试验
精密吸取样品溶液 0. 2mL,按 2. 4 项下的操作方法显
色,于 460nm 处分别在 0,15,30,45,60,90,120min
测定吸光度,结果表明样品液显色后在 120min 内稳定,
RSD = 0. 59%。
2. 6 精密度试验
精密吸取对照液 0. 4mL,共 6 份,按 2. 4 项下的操作方
法显色,于 460nm 处测定吸光度,计算 RSD = 1. 60%。结
果表明方法的精密度良好。
2. 7 重复性试验
精密称取同一批样品 6 份,按 2. 1 项下方法制备供试
品溶液,按 2. 4 项下操作方法显色,于 460nm 处测定吸光
度,并计算含量,结果平均含量为 2. 82%,RSD = 0. 71%。
结果表明方法的重复性良好。
2. 8 加样回收率试验
精密吸取已知含量的样品溶液 0. 1mL 于具塞试管中,
加入对照品溶液 0. 5mL (浓度为 91. 23μg /mL) ,按 2. 4 项
下操作方法显色,于 460nm处测定吸光度,结果见表 1。
·2·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
民 族 医 药
Ethnomedicine and Ethnopharmacy
基金项目:科技部基础项目 (2006FY110700)。
通讯作者:李先恩,电话:010 - 62810019。
沧源县佤族民间验方录
彭朝忠1 祁建军2 李先恩2
1. 中国医学科学院药用植物研究所云南分所,云南 景洪 666100;2. 中国医学科学院药用植物研究所,北京 100094
【关键词】 佤族民间验方
【中图分类号】R289. 5 【文献标识码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2011)04 - 0003 - 01
我们参加“云南及周边地区农业生物资源调查”2008
年 6 月 9 日至 2008 年 7 月 12 日,对云南省沧源县佤族医药
文化进行实地调查,杂用中药学佤族药用植物学与人类学
相结合的方法,沧源县植物资源十分丰富,有 4000 多种,
中草药有 2000 多种,佤族常用的有 150 多种,佤族就用当
地的植物来防病治病,有的药效为价值高、验方在当地广
泛流传,有地方特色和民族特色,现介绍如下。
验方 1:山大黄 15g、血满草 15g、肾茶 30g、大树甘草
15g、大仙茅 15g、扫把茶 15g、通光散 10g,水煎 30 分钟当
茶服用,1 日 3 次,1 次 800ml,3 日一个疗程,冶痛风。
验方 2:钩藤鲜品 20g、艾纳香鲜品 30g、千里光鲜品
40g、小红蒜鲜品 50g、小叶臭黄皮鲜品 70g、血满草根
20g、蒿枝鲜品 20g,水煎,洗患部,治风湿病。
验方 3:螃蟹脚 30g,盾翅藤 20g,肾茶 30g,海金沙
30g,藤茶 20g,水剪服,酒为引,治肾结石。1 日 3 次,1
次 500ml,6 日有 1 个疗程。
验方 4:大苦藤 20g,锅铲叶 30g,叶下珠 30g,干张纸
树皮 20g,白花蛇舌草 30g,水煎服,红糖引,1 日 1 剂,1
日 3 次,1 次 500ml,主治肝炎,9 日为一疗程。
验方 5:三丫苦 20g,三对节 20g,鱼子兰 20g,小白芨
20g,石斛 40g,水煎 30ml,蜂蜜引,主治上呼吸道感染,1
日 1 剂,1 日 3 次,1 次 500ml,9 日为一疗程。
验方 6:小丁香 25g,虎杖 20g,十大功劳 20g,绞股蓝
30g,水煎服,治气管炎,1 日 1 剂,1 日 3 次,1 次 500ml,
3 日为一疗程。
验方 7:大苦藤根 30g,美登木 20g,白花蛇舌草 20g,
蚕豆七 10g,重阳木叶 20g,水煎服,治癌症,1 日 1 剂,1
日 3 次,1 次 600ml,9 日为一疗程。
验方 8:山堆堆 15g,红山乌龟 20g,金线吊葫芦 20g,
芦子 30g,水煎服,1 日 1 剂,1 日 3 次,1 次 300ml,连渣
带汤服,治胃病,9 日为 1 个疗程。
验方 9:白花丹鲜叶 20g,红花丹鲜品 20g,大树跌打
树皮 20g,血满草根皮 20g,重楼 30g,姜黄 10g,冲细,包
于患处,治骨质增生,7 天换一次药,21 天为 1 疗程。
(收稿日期:2011. 01. 04
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)
表 1 观音草加样回收率试验结果 (n = 6)
试验号 取样量 (g) 样品含量 (μg) 加标量 (μg) 测得量 (μg) 回收率 (%) 平均回收率 (%) RSD (%)
1 5. 002 55. 677 45. 615 9. 744 96. 61 98. 96 1. 78
2 5. 012 56. 775 45. 615 102. 254 99. 70
3 5. 005 56. 305 45. 615 101. 313 98. 67
4 5. 013 56. 775 45. 615 102. 882 101. 08
5 5. 001 56. 305 45. 615 100. 685 97. 29
6 5. 011 56. 462 45. 615 102. 254 100. 39
2. 9 样品的含量测定
按照 2. 1 项下操作方法,制备 3 批供试品溶液,精密
吸取 0. 2mL,按 2. 4 项下操作方法显色,于 460nm处测定吸
光度,结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
样品号
取样量
(g)
含量
(%)
平均含量
(%)
RSD
(%)
1 5. 012 2. 86 2. 87 0. 40
2 5. 006 2. 86
3 5. 010 2. 88
3 讨论
根据前期化学成分的研究,结合紫外法的显色特点,
实验以薯蓣皂苷为对照品,采用香草醛 -高氯酸法显色,
对观音草中总皂苷的含量测定进行了方法学考察,实验过
程中应严格控制温度和时间,本法具有操作简单,准确等
优点,为观音草的质量控制提供了新的有效手段。
参考文献
[1]王旭,舒国伟. 蒺藜甾体皂苷的测定 [J]. 食品研究与开发,2006,27
(7) :171 - 173.
[2]宋艺军,王昌利,郭涛. 正交试验法优选穿山龙总皂苷的提取工艺
[J]. 西北药学杂志,2010,25 (2) :101 - 102.
[3]熊山,陈玉武,叶祖光. 楮实子中总皂苷含量测定 [J]. 中国现代中
药,2009,11 (7) :26 - 27.
[4]丁宁,杜江,贾宪生. 黄褐毛忍冬总皂甙的含量测定 [J]. 贵阳中医学
院学报,2001,23 (2) :39 - 40.
(收稿日期:2014. 01. 03)
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy