全 文 ：第 29卷 第 2期 青 海 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) Vol.29 No.2
2011年 4月 JournalofQinghaiUniversity(NatureScience) Apr.2011
RP-HPLC法测定中国沙棘和西藏沙棘
枝条中黄酮苷含量
祁生贵 ,李 莉
(青海省心脑血管病专科医院 ,青海西宁　 810012)
摘要:为进一步开发沙棘资源提供研究数据 ,采用 RP-HPLC法测定西藏沙棘和中国沙棘枝
条中黄酮苷含量 。并采用 WatersODSC18柱(250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇∶0.4%磷酸溶
液(60∶40);检测波长:360nm;流速:1mL/min;柱温:27 ℃;以槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素为对
照 ,外标法定量。结果表明:西藏沙棘和中国沙棘枝条中 ,黄酮苷含量分别为 0.151%和
0.134%,两种沙棘枝条中黄酮苷含量不同 ,其中西藏沙棘中黄酮苷含量较高。
关键词:西藏沙棘;中国沙棘;黄酮苷;RP-HPLC
中图分类号:S793.6　　文献标志码:A　　文章编号:1006-8996(2011)02-0058-04
MeasuringflavonoidglycosidescontentinbranchofHippophae
rharnnoidesandHippohaethibetanawithRP-HPLC
QIShenggui, LILi
(QinghaiCardio-CerebrovascularDiseaseSpecialHospital, Xining810012, China)
Abstract:TodeterminethecontentofflavonoidsglycosidesinbranchofHippophaerharnnoidesand
HippohaethibetanabyRP-HPLC.TheseparationwasperformedonWatersODS-C18 column
(250mm×4.6 mm)withamobilephaseconsistingofamixtureofmethanol-0.4% phosphoric
acid(60∶40), thecolumntemperatureis27 ℃, theflowratewas1mL/minandthedetectivewave-
lengthwas360nm.Thestandardcurvesweremadeusingquercetin, kaempferolandisorhamnetin
byMsExcel.ThecontentofflavonoidsglycosidesinbranchesofHippophaerharnnoidesandHippohae
thibetanawere0.134% and0.151%respectively.Thecontentofflavonoidsglycosideswasdiferent
betweenHippophaerharnnoidesandHippohaethibetana.ThecontentinHippophaerharnnoideswas
higherthanthatinHippohaethibetana.
Keywords:Hippophaerharnnoides;HippohaethibetanaFlavonoidsGlycosides;RP-HPLC
中国沙棘(Hippophaerharnnoides)是广泛生长于我国北方的一种植物 ,其资源量相当丰富 。西藏沙
棘(Hippohaethibetana)是生长于海拔2 500 m以上的一种沙棘属的植物 ,属于青藏高原特有植物。自 20
世纪 80年代中期以来 ,我国开始重视沙棘的综合开发和加工利用。有关沙棘的研究资料 、论著等日益
增多 [ 1 -3 ] 。大量研究表明 ,沙棘果及沙棘叶中的化学成分主要有黄酮类 、萜类及甾体类 、挥发油类 、有
机酸 、酚类 、糖类等 ,特别是沙棘的果实 、叶子和果渣中均有数量相当可观的黄酮类化合物 [ 4-5 ] 。黄酮
在治疗和缓解人类的某些疾病 ,如高血脂症 、高血糖 、抑制血小板凝聚 、心力衰竭等方面具有明显的作
用 [ 6-7 ] 。本文选取西藏沙棘和中国沙棘的枝条为试验材料 ,对其中黄酮苷含量进行了测定 ,为进一步
开发沙棘资源提供理论依据。
收稿日期:2011-03-08
作者简介:祁生贵(1979—),男 ,青海互助人 ,助理研究员。
DOI :10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2011.02.012
第 2期 祁生贵等:RP-HPLC法测定中国沙棘和西藏沙棘枝条中黄酮苷含量
1　材料与方法
1.1　材料
选用产于青海省湟源县(平均海拔 2 800m)野生西藏沙棘和乐都县(平均海拔 2 000m)中国沙棘
的枝条 。
1.2　测定方法
1.2.1　仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪 、Waters2487泵 、Waters1525双波长紫外检测器 、FD-1型冷冻干燥机(上海
予华仪器有限公司)、超纯水器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)、旋转蒸发仪(上海申生科技有限公
司);槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素标准品均购自 Sigma公司;甲醇(色谱纯),其余试剂均为分析纯 ,水为超
纯水。
1.2.2　色谱条件
色谱柱:WatersODSC18(250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇∶0.4%磷酸溶液 (60∶40);检测波长
360nm;流速 1mL/min;柱温 27 ℃。
1.2.3　样品液的制备
准确称取冷冻干燥的西藏沙棘枝条粗粉 5.0 g,置 100 mL圆底烧瓶中 ,加入 40 mL石油醚回流提
取 ,过滤;滤渣减压干燥 ,分别加甲醇 40、20mL回流提取 2次 ,回收溶剂;提取物用 30 mL甲醇溶解 ,再
加入 25%HCl5 mL, 85 ℃(±1 ℃)水浴水解 60min,转移至 50mL容量瓶中 ,甲醇定容到 50 mL,备用。
中国沙棘枝条待测样品液的制备方法同上 。
1.2.4　标准曲线的制作
分别准确称取槲皮素 4.0mg,山奈酚 3.0mg,异鼠李素 1.0mg,甲醇定容至 50mL,吸取 1、2、3、4、5
mL,分别置 10mL容量瓶中 ,甲醇定容至 10 mL,吸取 10 μL进样 ,经 HPLC检测后 ,记录峰面积;分别以
浓度 C为横坐标 ,峰面积 A为纵坐标 ,分别得 3种标准物对应的标准曲线及其线性回归方程 。
1.2.5　加样回收率试验
准确称取中国沙棘 5.0 g,石油醚脱脂后 ,过滤;滤渣减压干燥 ,分别加入槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素
混合对照品溶液 0.5mL,其余处理同 “1.2.3”步骤 ,按 “1.2.5”色谱条件进样 10μL,测定三种苷元槲皮
素 、山奈酚 、异鼠李素的平均回收率。
1.2.6　稳定性试验
取中国沙棘样品 ,按 “ 1.2.5”处理 ,在与标准曲线相同的色谱条件下 ,吸取 10 μL,分别于 0、2、4、6、
8 h进样 ,测定样品在 8h内的变化 ,计算出槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素的相对标准偏差(RSD)。
1.2.7　样品测定
分别取 2种沙棘枝条样品液进样 ,经 RP-HPLC分析 ,将样品所得面积分别代入 3个线性回归方
程 ,根据样品黄酮苷含量(%)=C槲皮素% ×2.51﹢ C山奈酚%×2.59﹢ C异鼠李素%×2.44,计算出黄酮苷含
量 [ 5] 。
1.3　数据处理方法
所得数据用 Excel软件进行处理 。
2　结果
2.1　标准曲线线性回归方程
3种标准物浓度与对应的峰面积值 ,经 Excel软件线性回归分析 ,得到其线形回归方程(表 1)。各 r
值趋近于 1,相关性显著 。
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青海大学学报 第 29卷
表 1　标准曲线的回归方程及相关系数
Tab.1　Equationoflinarregressionandcorrelationcoeficientofstandards
标样 回归方程 相关系数 置信区间
槲皮素 A=3.974 3×106C-4.80×104 r=0.999 7 8.2～ 40.7
山奈酚 A=3.723 6×106C-4.23×104 r=0.999 3 6.0～ 30.2
异鼠李素 A=2.983 3×106C-1.27×104 r=0.999 6 2.1～ 10.5
2.2　加样回收率及稳定性试验的相对标准偏差(RSD)
3种苷元槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素的平均回收率及稳定性实验的相对标准偏差结果见表 2。
表 2　3种标准物的加样回收率及稳定性实验的 RSD
Tab.2　Potingrecoveriesandtherelativestandarddeviationofstabilityofthreestandardsamples
标样 加样回收率 /% 稳定性 RSD
槲皮素 98.25 1.53
山奈酚 99.03 1.72
异鼠李素 101.06 2.16
2.3　样品测定结果
西藏沙棘和中国沙棘枝条中黄酮苷含量分别为 0.151%和 0.134%。结果见表 3及图 1。
表 3　两种沙棘中黄酮苷含量结果
Tab.3　Thecontentofflavonoidsglycosidesinthebranchesof
BothHippophaerharnnoidesandHippohaethibetian(n=3)
样品
标　准　物
C槲皮素 ×10-2 C山奈酚 ×10-2 C异鼠李素 ×10-2
黄酮苷含量 /%
西藏沙棘 3.72 1.31 0.95 0.151
中国沙棘 3.35 1.27 0.71 0.134
1:槲皮素;2:山奈酚;3:异鼠李素
图 1　两种沙棘样品的HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramsof2kindsofsamples
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第 2期 祁生贵等:RP-HPLC法测定中国沙棘和西藏沙棘枝条中黄酮苷含量
3　讨论
(1)沙棘黄酮中含有 30多种黄酮类成分 ,如果样品不经过处理就直接进行 HPLC分析 ,则很难实
现各组分的完全分离 [ 8 -10] ;各种黄酮所含的糖配基种类和数量及分子量相差很大 。但是它们当中绝大
部分的组成均为苷元结合不同种类和数量的糖配基 ,而苷元主要是槲皮素 、山奈酚 、异鼠李素这 3种成
分 ,其分子量分别为 302、286、316,分子量基本接近 [ 8] 。在 HPLC测定中 ,由于沙棘黄酮的这几类苷元
在分子结构上极为相似 ,只是少数非强生色基团不同 ,因而紫外吸收强度基本相同 ,同时它们的分子量
也相差不大 ,对槲皮素的相应因子可认为接近于 1,因此用 3种标准品分别测定时 ,无疑增加了吸收峰
值面积 ,三者的叠加使得测量结果升高 ,从而产生误差。
(2)黄酮苷含量在西藏沙棘和中国沙棘枝条中存在差异 ,其中西藏沙棘枝条中黄酮苷含量较高 ,可
能与这两种沙棘不同种的差异有关 ,亦可能与其生长在较高海拔白天光合作用强和夜间呼吸作用弱 ,从
而使其次生代谢产物蓄积产生差异。
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(责任编辑 李渝珍)
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