全 文 ：·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７
第一作者简介：冯智鹏（１９９１－），男，青海西宁人，硕士研究生，
研究方向为森林培育。Ｅ－ｍａｉｌ：１６５５６５２８３９＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：马玉花（１９７８－），女，回族，青海乐都人，博士，副教
授，现主要从事森林培育理论与技术及植物资源开发利用等
研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：３５６１３５７２＠ｑｑ．ｃｏｍ．
基金项目：中国科学院 “西部之光”人才培养计划资助项目。
收稿日期：２０１６－０９－２９
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１７０１０３１
青海野生西藏沙棘果渣黄酮的提取工艺
冯 智 鹏，冶 贵 生，袁 海，马 玉 花
（青海大学 农牧学院，青海 西宁８１００１６）
摘 要：以青海野生西藏沙棘果实为试材，采用乙醇浸提法，设计单因素试验和正交实验，研
究了料液比、提取时间、提取温度、乙醇浓度４个提取参数对总黄酮得率的影响，优化了提取工艺。
结果表明：提取黄酮的最佳工艺为料液比１∶６０ｇ·ｍＬ－１、提取温度６５℃、６５％乙醇、提取２．０ｈ，
对最佳工艺进行验证试验，总黄酮得率达到１．７２％。４个因素中提取温度对提取效果影响最大，
其次是乙醇浓度，提取时间和料液比对试验无影响。正交实验和验证试验优化了总黄酮提取工
艺，该工艺提取率高，操作简便，无毒害，具有可信度。
关键词：西藏沙棘；总黄酮；提取工艺
中图分类号：ＴＳ ２６２．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１７）０１－０１４２－０６
沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ Ｌ）属胡颓子
科（Ｅｌａｅａｇｎａｃｅａｅ）沙棘属的一种耐旱、耐盐碱的落叶
灌木或小乔木，又名黑刺、酸柳、达普（藏名）［１－２］。分
布于亚欧大陆的温带、寒带和亚热带高山区，是一种
良好的防风固沙树种［３－４］。我国华北、西北、东北及
西南地区是集中分布区。主要分布有６种（鼠李沙
棘、柳叶沙棘、西藏沙棘、棱果沙棘、江孜沙棘、肋果
沙棘）［５］。西藏沙棘（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｈｉｂｅｔａｎａ），别名鸡
爪柳，植株高５～５０ｃｍ，果实球形，果顶端有６条放
射状青褐色条纹，花期５—６月，果期９月［６－７］，生长在
西藏、青海等海拔３ ０００～４ ５００ｍ的高原草地、河漫
滩、低阶地和山麓［８］。西藏沙棘中含沙棘油、黄酮、
多糖、蛋白质、维生素等［９］，在医学、林学、食品保健、
营养学等多个领域均有很高的利用价值。
黄酮类化合物在自然界中广泛存在，沙棘总黄
酮主要存在于沙棘的叶、果实中，是沙棘含有的重要
的生物活性物质，２０世纪５０年代，前苏联学者就用
色谱技术从沙棘果实和叶片中鉴定出槲皮素、杨梅
素、异鼠李素等３０多种黄酮类物质［１０］。研究发现，
沙棘黄酮对抗心肌缺血、降血脂、抑制动脉硬化、预
防癌症等疾病都有很好的功效［１１－１３］，这更加表明沙
棘果实的黄酮成分具有开发和提取利用的价值。
目前，国内外对黄酮类化合物的提取方法主要
包括有机溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波法提
取［１４］、酶法提取、分子烙印技术等［１５］。我国对沙棘
黄酮的开发研究起步较晚，近几年，人们对天然生物
活性物质的需求增加，沙棘黄酮的开发利用迅猛发
展，但有关西藏沙棘黄酮成分提取的研究尚鲜见报
道，该试验利用有机溶剂提取法以及正交设计试
验［１６］，对西藏沙棘黄酮成分进行提取，优化提取工
艺，以期为今后西藏沙棘资源的开发利用提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试的西藏沙棘采自青海省大通县，采集的果
实去除杂质，用冻干机冷冻干燥后冷冻保存。
恒温水浴锅，索式提取器，旋转蒸发仪，恒温加
热套，果实粉碎机，真空泵，定性滤纸，无水乙醇，正
己烷（分析纯），芦丁标准品购买自Ｓｏｌａｒｂｉｏ生物试剂
公司。
１．２ 试验方法
１．２．１ 西藏沙棘果实总黄酮的提取 冷冻干燥后
的西藏沙棘果实粉碎并脱脂，称取５ｇ脱脂后的沙棘
果渣，在研钵中用７０％乙醇研磨碎，按一定料液比
（１∶２０ｍｇ·Ｌ－１）加入一定浓度的乙醇，在合适温度
的水浴下浸提，然后过滤，滤液定容至１００ｍＬ容量
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北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７ ·贮藏保鲜加工·
瓶中得提取液，备用。再用分光光度计于５１０ｎｍ波
长测定提取液中总黄酮的含量。吸取样品量１ｍＬ
放入１０ｍＬ容量瓶中，用７０％乙醇加到２ｍＬ，加入
５％亚硝酸钠溶液０．５ｍＬ摇匀，放置６ｍｉｎ，加入１０％
硝酸铝溶液０．５ｍＬ，放置６ｍｉｎ后，加入４％氢氧化
钠溶液４ｍＬ，加７０％乙醇定容，摇匀后放置１５ｍｉｎ，在
５１０ｎｍ处测吸光度，根据标准曲线计算黄酮含量。
总黄酮得率（％）＝＝Ｃ×Ｖ×ｎ／Ｍ×１００，Ｃ－根据标准
曲线计算出的提取液中黄酮的浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），Ｖ－
提取液的总体积，ｎ－稀释倍数，Ｍ－果渣的质量。
１．２．２ 标准曲线的绘制 称量１３．２ｍｇ芦丁标准
品，用７０％乙醇定容到２５ｍＬ容量瓶中作标准液。
准确吸取芦丁标准液０、０．４、０．８、１．２、１．６、２．０ｍＬ，放
入１０ｍＬ容量瓶内（标记），分别加入２．０、１．６、１．２、
０．８、０．４、０ｍＬ的７０％乙醇溶液，再加入５％亚硝酸
钠溶液０．５ｍＬ摇匀，放置６ｍｉｎ，加入１０％硝酸铝溶
液０．５ｍＬ，放置６ｍｉｎ后，加入４％氢氧化钠溶液
４ｍＬ，加７０％乙醇定容，摇匀后放置１５ｍｉｎ，在
５１０ｎｍ处测吸光度，制作标准曲线。
１．２．３ 提取溶剂的选择 选择无水乙醇、甲醇、乙
酸乙酯、丙酮４种有机溶剂，取沙棘果渣３ｇ，在料液
比１∶３０ｇ·ｍＬ－１，温度６０℃的条件下浸提２．０ｈ，
测定提取液中的总黄酮含量，确定较佳提取溶剂，重
复３次。
１．２．４ 单因素试验 以料液比、提取温度、提取时
间、乙醇浓度４个试验参数研究对西藏沙棘果渣中
总黄酮含量的影响，根据结果确定有效提取参数，优
化提取工艺，每组试验３次重复。料液比对黄铜含
量的影响：用７０％乙醇提取，提取时间３．０ｈ，提取
温度为６５℃，料液比１∶１０、１∶２０、１∶３０、１∶４０、
１∶５０、１∶６０ｇ·ｍＬ－１，提取３次，计算黄酮含量，取
平均值。提取时间对黄酮含量的影响：以７０％乙醇
为提取溶剂，料液比１∶２０ｍｇ·Ｌ－１，提取温度
６５℃，提取时间分别为１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ｈ，各提
取３次，测定黄酮含量。提取温度对黄酮含量的影
响：用７０％乙醇提取，料液比为１∶２０ｇ·ｍＬ－１，提
取时间３．０ｈ，在提取温度６０、６５、７０、７５、８０℃的条件
下，分别提取３次，计算黄酮含量，取平均值。乙醇
浓度对黄酮含量的影响：以料液比为１∶２０ｇ·ｍＬ－１，
提取时间３．０ｈ，温度６５℃的条件下，在乙醇浓度为
６０％、６５％、７０％、７５％、８０％的梯度条件下分别提取
３次，计算黄酮含量，取平均值。
１．２．５ 正交实验 在单因素试验的基础上，以料液
比、提取时间、提取温度、乙醇浓度为４因素，总黄酮
含量为指标，进行Ｌ１６（４５）的正交实验设计，因素及水
平见表１。
表１ 正交实验的因素与水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
水平
Ｌｅｖｅｌ
Ａ料液比
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
／（ｇ·ｍＬ－１）
Ｂ提取时间
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
／ｈ
Ｃ提取温度
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／℃
Ｄ乙醇浓度
Ｅｔｈａｎｏｌ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
空列
Ｅｍｐｔｙ
ｃｏｌｕｍｎｓ
１ １∶３０ １．５ ６５ ６０ １
２ １∶４０ ２．０ ７０ ６５ ２
３ １∶５０ ２．５ ７５ ７０ ３
４ １∶６０ ３．０ ８０ ７５ ４
１．３ 数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ、ＤＰＳ软件进行处理和方差
分析。
２ 结果与分析
２．１ 标准曲线绘制结果
以黄酮浓度（Ｘ）为横坐标，吸光值（Ｙ）为纵坐标
绘制标准曲线，考察线性关系。回归方程为Ｙ＝
０．００１ １Ｘ－０．００１ ６，Ｒ２＝０．９９９ ３。
图１ 黄酮标准曲线
Ｆｉｇ．１ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
图２ 提取溶剂的选择
Ｆｉｇ．２ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔｓ
２．２ 提取溶剂对黄酮含量的影响
由图２可知，４种有机溶剂提取西藏沙棘总黄
酮，丙酮的提取效果最好，得率达到１．３８５％，其次是
乙醇，得率为１．０５２％，乙酸乙酯提取效果最差，只有
０．５２８％。虽然丙酮提取效果最好，但考虑到丙酮具
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·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７
有毒性，而无水乙醇提取效果较好，没有毒性，且价
格低廉、是理想的提取剂，因此，最终选择乙醇为西
藏沙棘果渣黄酮的提取溶剂。由表２可以看出，４种
溶剂对西藏沙棘果渣黄酮提取的影响达到极显著水
平（Ｐ＜０．０１）。表３多重比较结果表明，４种溶剂间
乙醇与甲醇对黄酮得率影响无显著差异，而丙酮、乙
酸乙酯与乙醇和甲醇对得率影响存在极显著差异
（Ｐ＜０．０１）。
表２ 不同溶剂对西藏沙棘黄酮提取的
方差分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
Ｔｉｂｅｔ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ
ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ
ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
ｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐ
ｖａｌｕｅ
处理间Ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ １．１２７ ３ ０．３７６ ９１．５５３ ０．０００ １
处理内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．０３３ ８ ０．００４
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ １．１５９ １１
表３ 不同溶剂对沙棘黄酮提取
差异显著性分析
Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ
ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
溶剂
Ｓｏｌｖｅｎｔ
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ
ｖａｌｕｅ／％
５％显著水平
５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
１％极显著水平
１％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
丙酮Ａｃｅｔｏｎｅ １．３８５±０．０４４ ａ Ａ
乙醇Ｅｔｈａｎｏｌ １．０５２±０．０３８ ｂ Ｂ
甲醇 Ｍｅｔｈａｎｏｌ ０．９３５±０．０８７ ｂ Ｂ
乙酸乙酯Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ０．５２８±０．０７４ ｃ Ｃ
图３ 料液比对黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｙｉｅｌｄ
２．３ 料液比对黄酮含量的影响
由图３可知，随着料液比的增加，提取的黄酮含
量逐渐增加，当料液比达到１∶５０ｇ·ｍＬ－１时，黄酮
得率最大为１．６０５％，当料液比大于１∶５０ｇ·ｍＬ－１
时，得率逐渐下降，再增加料液比，对提取效果没有
太大影响，因此，在料液比为１∶５０ｇ·ｍＬ－１时，提取
效果更好。由表４可知，不同料液比对西藏沙棘果
实黄酮得率的影响差异极显著（Ｐ＜０．０１）。表５多
重比较显示，料液比１∶５０ｇ·ｍＬ－１与１∶６０、
１∶４０、１∶３０、１∶２０ｇ·ｍＬ－１之间及１∶１０ｇ·ｍＬ－１
与１∶６０、１∶４０、１∶３０、１∶２０ｇ·ｍＬ－１之间黄酮得
率影响无极显著差异，而１∶５０ｇ·ｍＬ－１与
１∶１０ｇ·ｍＬ－１之间对得率影响差异极显著（Ｐ＜
０．０１）。
表４ 料液比对西藏沙棘黄酮提取的方差分析
Ｔａｂｌｅ ４ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ
Ｔｉｂｅｔａｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ
ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ
ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
ｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐ
ｖａｌｕｅ
处理间Ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ １．１６１ ５ ０．２３２ ５．３１７ ０．００８
处理内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．５２４ １２ ０．０４４
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ １．６８５ １７
表５ 料液比对西藏沙棘黄酮提取的
差异显著性分析
Ｔａｂｌｅ ５ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ
Ｔｉｂｅｔａｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
料液比
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ
／（ｇ·ｍＬ－１）
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ
／％
５％显著水平
５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
１％极显著水平
１％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
１∶６０ １．４９４±０．１０４ ａ ＡＢ
１∶５０ １．６０５±０．１９０ ａ Ａ
１∶４０ １．３８５±０．１８０ ａ ＡＢ
１∶３０ １．３６６±０．２６３ ａｂ ＡＢ
１∶２０ １．２１２±０．３３１ ａｂ ＡＢ
１∶１０ ０．８１２±０．０６７ ｂ Ｂ
图４ 提取时间对黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｙｉｅｌｄ
２．４ 提取时间对黄酮含量的影响
由图４可知，随着时间的延长，黄酮得率逐渐增
加，在时间达到２．５ｈ后，提取效果最高，得率达到
１．５７３％。２．５ｈ之后，提取效果开始下降，而且提取
时间过长，不仅增加试验困难，而且易造成黄酮类物
质的变性分解。因此最终确定提取最佳时间为
２．５ｈ。由表６方差分析结果可知，说明西藏沙棘果
渣黄酮的得率在不同提取时间下达到极显著水平
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北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７ ·贮藏保鲜加工·
（Ｐ＜０．０１）。表７的多重比较结果表明，不同提取时
间对黄酮得率影响的比较中，２．５、２．０、１．５ｈ与３．０ｈ
之间无显著差异，１．５、３．０ｈ与１．０ｈ之间也无显著
差异，而２．５、２．０ｈ与１．０ｈ之间对黄酮得率得影响
差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
表６ 提取时间对西藏沙棘黄酮
提取的方差分析
Ｔａｂｌｅ ６ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ
Ｔｉｂｅｔ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ
ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ
ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
ｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐ
ｖａｌｕｅ
处理间Ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．１８１ ４ ０．０４５ １０．４０１ ０．００１ ４
处理内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．０４４ １０ ０．００４
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ０．２２５ １４
表７ 提取时间对西藏沙棘黄酮提取的
差异显著性分析
Ｔａｂｌｅ ７ Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ
Ｔｉｂｅｔ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
提取时间
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ／ｈ
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ／％
５％显著水平
５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅｖｅｌ
１％极显著水平
１％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅｖｅｌ
２．５ １．５７３±０．０３９ ａ Ａ
２．０ １．５０１±０．０７９ ａ Ａ
１．５ １．４５６±０．０７７ ａ ＡＢ
３．０ １．４１５±０．０６０ ａｂ ＡＢ
１．０ １．２４５±０．０６７ ｂ Ｂ
图５ 提取温度对黄酮得率的影响
Ｆｉｇ．５ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｙｉｅｌｄ
２．５ 提取温度对黄酮含量的影响
由图５可知，刚开始提取时，随着温度逐渐增
加，黄酮得率逐渐增加，温度达到７５℃，提取得率最
大达到１．５９６％，温度超过７５℃后，提取效果下降，
这是因为温度过高会使一些黄酮类物质发生降解，
致使含量下降。此外，随着温度的升高，溶剂的易挥
发性会降低回收率，增加提取成本，因此，选择７５℃
为最佳提取温度。由表８方差分析结果可知，不同
提取温度对果渣黄酮得率的影响达到极显著水平
（Ｐ＜０．０１）。表９多重比较结果表明，不同提取温度
的比较在７５℃与７０℃、７０℃与６５℃、６５℃与８０℃
之间对黄酮得率得影响差异不显著，７５℃与６５、８０、
６０℃之间对得率影响达到极显著差异水平。
表８ 提取温度对西藏沙棘黄酮
提取的方差分析
Ｔａｂｌｅ ８ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ
Ｔｉｂｅｔａｎ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ
ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ
ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
ｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐ
ｖａｌｕｅ
处理间Ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．６１３ ４ ０．１５３ ５０．０５１ ０．０００ １
处理内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．０３１ １０ ０．００３
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ０．６４３ １４
表９ 温度对西藏沙棘黄酮提取的
差异显著性分析
Ｔａｂｌｅ ９ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｏｒ
Ｔｉｂｅｔ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔ
温度
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／℃
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ
ｖａｌｕｅ／％
５％显著水平
５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
１％极显著水平
１％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
７５ １．５９６±０．０６５ ａ Ａ
７０ １．５２７±０．０２０ ａｂ ＡＢ
６５ １．３８３±０．０３１ ｂｃ ＢＣ
８０ １．２５１±０．００１ ｃ Ｃ
６０ １．０３１±０．０９８ ｄ Ｄ
２．６ 乙醇浓度对黄酮含量的影响
由图６可知，提取得率随着乙醇浓度的增加而
增加。当浓度达到７０％，得率最大达到１．３７０％，浓
度超过７０％后，得率下降，继续增加乙醇浓度，对黄
酮含量几乎没有影响。因此，选择７０％为最佳提取
浓度。从表１０可以看出，不同乙醇浓度对西藏沙棘
果实黄酮得率的影响差异达到极显著水平。由表１１
可知，乙醇浓度梯度间的比较中，７０％乙醇、６５％乙
醇、８０％乙醇对得率影响无显著差异，７５％乙醇与
８０％乙醇对得率影响也无显著差异，７０％乙醇、６５％
乙醇与６０％乙醇之间对得率差异极显著（Ｐ＜０．０１）。
图６ 乙醇浓度对黄酮含量的影响
Ｆｉｇ．６ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ
５４１
·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７
表１０ 不同乙醇浓度对西藏沙棘黄酮
提取的方差分析
Ｔａｂｌｅ １０ Ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎ Ｔｉｂｅｔ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ
ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ
ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ
ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆ
ｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐ
ｖａｌｕｅ
处理间Ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．２７２ ４ ０．０６８ １５．２７９ ０．０００ ３
处理内 Ｗｉｔｈｉｎ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ０．０４４ １０ ０．００４
总变异Ｔｏｔａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ０．３１６ １４
表１１ 乙醇浓度对沙棘黄酮提取率的
差异显著性分析
Ｔａｂｌｅ １１ Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｆｏｒ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ
乙醇浓度
Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／％
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ
／％
５％显著水平
５％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
１％极显著水平
１％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｅｖｅｌ
７０ １．３７０±０．０５４ ａ Ａ
６５ １．３５６±０．０４５ ａｂ Ａ
８０ １．１９２±０．０６１ ａｂ ＡＢ
７５ １．１８２±０．０７８ ｂ ＡＢ
６０ １．００３±０．０８７ ｃ Ｂ
２．７ 正交实验
由表１２结果可知，４个单因素对西藏沙棘果渣
中黄酮得率影响最大的是提取温度，其次是乙醇浓
度、提取时间，料液比影响最小。根据４个因素在正
交实验中的水平变化，最后选择较优的提取工艺为
Ａ４Ｂ２Ｃ１Ｄ２，即料液比１∶６０ｍｇ·Ｌ－１、提取时间２ｈ、
提取温度６５℃、乙醇浓度６５％。
表１２ 正交实验结果分析
Ｔａｂｌｅ １２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ
试验号
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
Ｎｏ．
料液比
Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ
ｒａｔｉｏ
／（ｇ·ｍＬ－１）
提取时间
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｉｍｅ
／ｈ
提取温度
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
／℃
乙醇浓度
Ｅｔｈａｎｏｌ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／％
空列
Ｅｍｐｔｙ
ｃｏｌｕｍｎｓ
黄酮得率
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｙｉｅｌｄ
／％
１ １∶３０ １．５ ６５ ６０ １ １．５２４
２ １∶３０ ２．０ ７０ ６５ ２ １．４６３
３ １∶３０ ２．５ ７５ ７０ ３ １．２３０
４ １∶３０ ３．０ ８０ ７５ ４ １．０４２
５ １∶４０ １．５ ７０ ７０ ４ １．２２９
６ １∶４０ ２．０ ６５ ７５ ３ １．４９７
７ １∶４０ ２．５ ８０ ６０ ２ １．１９０
８ １∶４０ ３．０ ７５ ６５ １ １．５４５
９ １∶５０ １．５ ７５ ７５ ２ １．３３１
１０ １∶５０ ２．０ ８０ ７０ １ １．１９５
１１ １∶５０ ２．５ ６５ ６５ ４ １．６８９
１２ １∶５０ ３．０ ７０ ６０ ３ １．１２０
１３ １∶６０ １．５ ８０ ６５ ３ １．２９８
１４ １∶６０ ２．０ ７５ ６０ ４ １．７１９
１５ １∶６０ ２．５ ７０ ７５ １ １．０４１
１６ １∶６０ ３．０ ６５ ７０ ２ １．７３４
Ｋ１ ５．２６０ ５．３８２ ６．４４４ ５．５５３ ５．３０５
Ｋ２ ５．４６１ ５．８７４ ４．８５４ ５．９９５ ５．７１８
Ｋ３ ５．３３５ ５．１５０ ５．８２６ ５．３８８ ５．１４５
Ｋ４ ５．７９２ ５．４４２ ４．７２５ ４．９１１ ５．６７９
ｋ１ １．３１５ １．３４６ １．６１１ １．３８８ １．３２６
ｋ２ １．３６５ １．４６９ １．２１３ １．４９９ １．４３０
ｋ３ １．３３４ １．２８７ １．４５６ １．３４７ １．２８６
ｋ４ １．４４８ １．３６０ １．１８１ １．２２８ １．４２０
Ｒ ０．１３３ ０．１８１ ０．４３０ ０．２７１ ０．１４３
２．８ 方差分析与显著性检验
根据正交实验结果，对各因素进行方差分析，判
断其对试验结果的影响。方差分析结果表明（表
１３），提取温度对总黄酮得率的影响差异极显著
表１３ 正交实验方差分析
Ｔａｂｌｅ １３ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
Ｓｕｍ ｏｆ ｓｑｕａｒｅ
自由度
Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｆｒｅｅｄｏｍ
均方
Ｍｅａｎ ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐｖａｌｕｅ
变异来源
Ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
料液比Ｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｒａｔｉｏ ０．０４２ ３ ０．０１４ Ｆ０．０１（３，９）＝６．９９２
提取时间Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ０．０６９ ３ ０．０２３ Ｆ０．０５（３，９）＝３．８６３
提取温度Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ０．５０２ ３ ０．１６８ ８．８９０ Ｆ０．１（３，９）＝２．８１３ ＊＊＊
乙醇浓度Ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ０．１５０ ３ ０．０５０ ２．６６０ Ｆ０．２５（３，９）＝１．６３２ ｏ
误差Ｅｒｒｏｒ ０．０６０ ３ ０．０２０
修正误差Ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ ｅｒｒｏｒｓ ０．１７０ ９ ０．０１８ ９
总和Ｓｕｍ ０．８２２
（Ｐ＜０．０１），乙醇浓度对黄酮得率有一定影响（Ｐ＜
０．２５），而料液比和提取时间对黄酮得率的影响没有
显著性差异。
２．９ 验证试验
结合单因素试验和正交实验结果，取料液比
１∶６０ｇ·ｍＬ－１，用６５％的乙醇在６５℃下提取２．０ｈ，
进行３次平行试验对结果验证，由表１４可知，在最佳
提取工艺条件下得到的黄酮得率平均值为１．７２２％，
高于正交实验中的其它试验，说明试验结果有效。
表１４ 验证试验结果
Ｔａｂｌｅ １４ Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ
验证试验
Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ
总黄酮得率
Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｙｉｅｌｄ／％
得率均值
Ｙｉｅｌｄ ｍｅａｎ ｖａｌｕｅ
１ １．６６７
２ １．７８９ １．７２２
３ １．７１２
３ 结论与讨论
试验选择乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯４种有机
６４１
北方园艺２０１７（０１）：１４２～１４７ ·贮藏保鲜加工·
溶剂分别提取沙棘黄酮，最终确定无毒，价格低廉的
乙醇作为最佳提取剂。通过设定的料液比、提取时
间、提取温度、乙醇浓度４个参数进行单因素和正交
实验，结果显示影响西藏沙棘果渣总黄酮得率最大
的因素是提取温度，对试验影响非常显著，其次是乙
醇浓度，对结果有一定影响，提取时间和料液比对试
验几乎无影响。根据正交实验及方差分析结果，确
定提取西藏沙棘果渣黄酮提取的较优工艺是料液比
１∶６０ｇ·ｍＬ－１，提取时间２．５ｈ，提取温度６５℃，乙
醇浓度６５％。该试验的研究结果可为西藏沙棘的开
发利用提供技术支持。
祖元刚等［１７］利用超声波法优化了沙棘叶总黄
酮的提取工艺在最佳工艺条件下总黄酮的提取率为
１．７２％；朱洪梅等［１８］通过纤维素酶法研究了沙棘黄
酮类化合物的提取工艺，最高得率为０．９５％；赵春健
等［１９］选择匀浆法提取沙棘总黄酮，在优化条件下，总
黄酮提取率为０．７６％。因此，超声波、酶提取等方法
虽然用时短，但提取效率略低，成本高，且存在酶以
及超声波辐射对生物活性物质分解的可能性。而溶
剂提取法是提取沙棘果渣的总黄酮最常用的方
法［２０］，操作简便，提取效率较其它方法更高，该试验
选择乙醇作提取剂，无毒害性，且节约成本。随着经
济发展，沙棘黄酮的提取方法还在深入研究，选择低
成本高效率的提取方法，充分利用沙棘资源，保证提
取物的生物活性，需要进一步关注和探讨。
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Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ Ｆｒｏｍ Ｆｒｕｉｔ Ｍａｒｃ ｏｆ
Ｗｉｌｄ Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｈｉｂｅｔａｎａｉｎ Ｑｉｎｇｈａｉ
ＦＥＮＧ Ｚｈｉｐｅｎｇ，ＹＥ Ｇｕｉｓｈｅｎｇ，ＹＵＡＮ Ｈａｉ，ＭＡ Ｙｕｈｕａ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ，Ｑｉｎｇｈａｉ ８１００１６）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｙｉｅｌｄ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ ｔａｋｉｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ
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ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
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１∶６０ｇ·ｍＬ－１，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ６５℃，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ２．０ｈｏｕｒｓ ｗｉｔｈ ６５％ｅｔｈａｎｏｌ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ
１．７２％．Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓ，ｆｏｌｏｗｅｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏ ｌｉｑｕｉｄ．Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ａｎｄ ｖａｌｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｔｏ
ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｈｉｇｈ，ｓｉｍｐｌｅ，ｎｏｎ－ｔｏｘｉｃ，ｗｉｔｈ ｃｒｅｄｉｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ ｔｈｉｂｅｔａｎａ；ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
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