全 文 ：黑 龙 江 大 学 自然 科学 学报
第 9卷 第 2期
19 2年 6月
J C凡JR N从 J 以 ; N满丁 t卫U猛创 SC IE卜 [C石
以 ; H王且 D冲 J IA N G
V匕1 .9 N o .2
Ju n e
,
l卯2
荧光分光光度法测定大戟狼毒中
微量元素一 硒 ( se )
张楠楠 金 、 蹄 张玉清 王 丽 王翌听
(佳木斯医 学院 ) (佳木斯师专 ) (佳木斯环保局 ) (哈尔滨建工学院 ) (化学系 )
摘要 本文采用 2 , 3 一 二氛基茶 ( 2 , 3 一 D i a m i n o n a p h t a h a l e n e 简称 D A哟 I , , 2 ]
荧光分光光度法对中草药大找狼毒中微量元素硒含量进行测定 。 实验结果表 明 : 大戟
狼毒中含硒量为 3 . 5 6 士 0 .8 3雌 / g 。 此方法不受一般干扰 , 灵敏度 高 , 每毫升环 已烷 中
硒的最低测 出值为 .0 0 1绍 ; 精密度和准确度 : 大戟狼毒中硒的测 出值的 变异系数为
.2 3 %
, 样品 中加入标准硒 的回收率为 9 .0 83 ~ 108 石% 。
关键词 大找狼毒 二氛基茶 环 已烷
月幼青
近十年来的研究表明。 , ` l , 微量元素对人体健康有重要作用 ; 研究人体 、 环境以
及各种物质中含硒量的工作 , 已为人们所关注 。 特别是近年来对中草药 中微量元素及
有机化合物成分的研究 , 已引起广泛的重视 。 目前国外关于 中草药中微量元素的测定
方法的报导 尚不多见 l5] 。 大戟狼毒是一 种毒性很大的中草药 , 本草纲 目中早有记 载 ;
但人们对其毒性至今也不清楚 , 对其中微量元素的测定文献中未见有报导 。 本文主要
对中草药大戟狼毒中硒含量测定作了一些探讨和分析 、 测定结果令人满意 。
原理 样品经消化液消化 , 使其中的硒化物转变为无机的 S e 4 十 , S e4 十 在 弱酸条件
下 , 与 D A N 生成 4 , 5 一 苯并羞硒脑 ( 4 , 5 一 B e n z o p i a 一 s e l e n o l ) , 此络合物具有很
强的荧光 , 用环 已烷萃取 , 在一定反应条件下 蜚硒脑生成的荧光强度与 S沙十 的浓度成
正 比 。 以荧光分光光度计测定出的荧光强度与标准相比较 , 计算出样品 中的硒含量 。
收稿 日期 19 9 0一 1 2一 3 1
第 2期 张楠楠等 :荧光分光光度法测定大戟狼毒中微量元素 一 硒 ( Se )· 9 5
1实验部分
1
.
1仪器与试剂
1
.
1
.
1仪器型号 :RF一 50 4(s l hma du z )荧光分光光度计
1
.
1
.
2试剂标准硒溶液
准确称取 0 .0 0 50 9金属硒 , 置于 50 m l 烧杯中 , 加 10 m l 浓 H N O 3 , 表面皿 , 加
热溶解后取下 , 逐除棕色氧化氮气体 , 冷却后用蒸馏水洗人 50 训 容量瓶中定容 。 为
每毫升含硒 10 0拼g 的贮备液 。 取此液 50 m l , 加 Z iln 浓盐酸 , 加水定容于 25 0 m l 容量 瓶
中 , 即为每毫升含硒 20 铭 。 再取该液 5m l , 用水稀至 10 0 m l , 则为每毫升含 硒 0 . 1绍
的工作液 。
1
.
1
.
3 环已烷
分析纯 , 纯化 ; 测定至无荧光物质 。
1
.
1
.
4 D A N 试剂的配制
在暗室内进行 , 称取 D A N 6 . 0 0 0 g , 置于具塞三角烧瓶中 , 加人 2 0 m l0 . IN 盐酸后
于康氏振荡器上振荡 30 分钟 , 使 D A N 溶解 , 加人 10 m l 环 已烷后再振荡 10 分钟 , 倾
人分液漏斗中 , 待分层后弃去有机相 , 收集水相 。 反复抽取 4 一 5 次 , 直 至 D A N 溶
液在光度计上的读数最小时为止 。 将纯化后的 D A N 溶液贮 于棕色试剂瓶中 , 加人适
量环 已烷 以隔绝空气 , 置于冰箱内备用 。
1
.
1
.
5 消化液的制备(略 )
1
.
1
.
6 去硒硫酸
将浓硫 酸 (优级纯 ) 20 o m l 与等体积的水在烧杯中混合 , 加人氢滨酸 (分析纯 )
3 0m l 混匀 , 加热至 冒白烟 , 继续加热到硫酸原体积为止 。
1
.
1
.
7 硫酸 一 高氯酸 一 铝酸钠混合液
称取铝酸钠 (分析纯 ) .7 5 9 溶于 150 m l 水 中 , 加人 20 m l 高氯酸和 150 m l 去硒硫
酸 。
l
。
1
.
8
1
.
1
.
9
E D T A 一 盐酸经胺 一 甲酚红混合液
7% 乙二胺四 乙酸二钠 (分析纯 ) 溶液
称取 14 g ED I A , 加人 2 0 o m l 水溶解 。
1
.
1
.
1 0 10 % 盐酸轻胺溶液
称取 1 0 9 盐酸轻胺 (分析纯 ) 溶于 10 0m l 水中 。
1
.
1
.
1 取 甲酚红 0 . 19 , 加人 1 一 2 滴氢氧化按溶液溶解 , 加水稀至 50 而 。
将 1 . 1.9 溶液 10 o m l , 人 1 . 1 . 10 溶液 50 m l , 1 . 1 . 1 溶液 5时 , 三者混为一体 , 加水稀至
1 00 ml 于棕色瓶中 , 贮于冰箱内备用 。
l
·
l
·
1 2 1: l (V /v ) 氨水溶液 (分析纯 ) 。
1
.
1
.
13 样品 大戟狼毒粉末 (干燥 )
1
.
2 测定步骤
1
.
2
.
1 测定方法
黑龙江 大学自然科学学报 第 夕卷
称取干燥样品 .0 01 529 放于具塞烧瓶内 , 加人 s iln 消化液 , 放置 1 . 5 小时 , 然后在
电炉上加热消化约 10 分钟 , 瓶中溶液即发生激烈反应 , 并伴有白烟出现 , 溶液颜色变
为淡黄绿色 , 立 即取下 , 冷却 , 溶液颜色重又变为无色 . 加人 10 间 E D T A 混合液 , 摇
匀 ; 溶液颜色变为淡粉红色 , 用 卜 1氨水调 p H 至 1 . 5 一 2 . 0 , 此 时溶液颜色呈微红橙
色 。 至此 , 以下步骤均移至暗室内完成 : 将此液加人 Zm l D A N 溶液 , 混匀置于沸水中
水浴加热 7 分钟 , 取出后置于冷水中冷却 , 待冷却后加人 s m l 环 已烷 , 于 振荡器 上充
分振荡 7 分钟 , 收集环 已烷层 , 测定其相对荧光强度 , 并作相应空 白试验 。
1
.
.2 2 计算公式
样品中硒含量的计算公式
每克 样 品 中含硒 量 (拜g)
样 品荧光 读数 一 空 白荧 光读数
标准 硒荧 光 读 数 一 空 白荧 光读 数 样 品重 ( g )
2 实验结果
2
.
1 激发波长和发射波长的选择
以硒标准溶液按测定方法用环已烷提取后 , 分别采用激发波长 3 8On m , 测发射光
谱如图 1 . 由图可知发射波长为 5 2 0 n m 。 然后 固定发射波长 5 2 o n m , 测硒标准液的激
发光谱 , 如图2 。 由图可知激发波长为 38 0 n m , 狭缝为 10 m m 。
-
峥 卜 · ·一二 ,一望
川一卿.20 30一.0ō
图 2
第 2期 张杨楠等 : 荧光分光光度法刚定大找狠毒中微量元素 一 硒 ( S )e · 97
吸
2. 2 酸度与荧光强度的关系
Se
` 十 在酸性条件下与 D A N 反应生成茎硒脑 , 在 p H 值低时 , 其反应速度递增 。 p H
值在 1 . 0 一 .2 0 时较好 。 随着 p H 值的增加 , 当 p H > 2 . 0 时 , D A N 氧化分解 , 反应速
度降低 。 以 .0 02 拜g 标准硒为例 , 按测定方法测其相对荧光强度 , 列表如下 : (取平均
值 )
光荧强度
P H 0 5 1
.
0 1
.
5 2
.
0 3
.
0
相对荧光强度 1 3 . 8 2 4 . 9 2 7 0 2 4 . 8 2 1 . 7
图 3 溶液酸度与荧光强度关系
八é八曰ù0月JZ
劝.1
荧光强度
D A N 用量与荧光强度的关系
按试验方法 . , 以 0 . 0 2户g 标准硒为例 ,
列表如下 :
D A N 用量 (m l ) 1 . 0 2 . 0 3 0 4 . 0
相对荧光强度 1 8 . 1 2 7 . 0 2 6 . 8 2 7 . 4 D N A
1
.
0 2刀 3 . 0 4 . 0一 ,卜(m l)图 4 D A N 用量与荧光强度关系.2 4 艺硒脑旋转时间与荧光强度关系仍以 0 . 02 拼g 标准硒为例 : 萃取后测其荧光强度为 27 . 0 ; 24 小时后再测其荧光强 .度为 2 7 . ;4 苯硒脑避光存放非常稳定 。 经 24 小时后 , 其荧光强度仍无变化 。.2 5 样品测定结果本实验测定六个大戟狼毒样品 , 结果列表如下 :样品编号 l 2 3 4 5 6
硒含量 (拜 g /g ) 3 . 49 3. 7 1 3 . 5 1 3 . 52 3 . 6 0 3 . 5 2
x f S D 3
.
5 6 士 0 . 0 8 3
.2 6
. 共存离子的影响
已测得大戟狼毒 中含有钻 、 镍 、 钙 、 镁 、 铝 、 锌 、 铁等元素 ; 为测其干扰情况 ,
取标准硒 0 . 1拜g , 加人相当于硒量 50 倍的共存离子 , 按试验方法 , 测其干扰情况 。
黑龙江大学自然科学学报 第夕卷
结果如下 :
钻 、 镍 、 钙 ;镁 、 铝 、 锌 、 铁等离子 , 对硒的测定无干扰 。
数据列表如下 :
共存离子 S e’ 十 的测定全 相对误差 (% )
C o Z
+
0
.
10 10 + 1
.
2
N i
Z+
0
.
10 0 0 0
C a Z
+
0
.
10 10 + 1
.
2
M g Z
十
0
.
0 9 8 1 一 1 . 7
A 13
十
0
.
1 00 0 0
Z n
Z+
0
.
1 0 0 2 + 0
.
2
F e 3
+ ,
0
.
10 10 + 0
,
2
3 分析方法的灵敏度 , 精密度和准确度
.3 1 标准曲线的制作
分别取含硒量 0 . 0 2户g 、 0 . 0 4拜g 、 0 . 0 6拜g 、 0 . 0 8拜g 、 0 . 1 0户g 的标准硒溶液 , 按 试验方
法测其相对荧光强度 。 结果表明 , 此浓度范围内 , 其线性关系为直线 。 灵敏度为每毫
升环已烷中硒的最低测出量为 0 . 0 0 1尸g 。
列表如下 :
硒含量 (尸g ) 荧光强度 荧光强度与不含
石咬光强度之差
0 15
.
4 0
0
.
0 2 2 7
.
0 1 1
.
6
0
.
0 4 3 6
.
7 2 1
.
3
0 0 6 4 9
.
2 3 3
.
8
0
`
0 8 6 0
,
7 4 5
.
3
0
.
10 7 3
.
4 5 8
.
0
.3 2 精密度与准确度
按试验方法 , 将样品测定 6 次 。
精密度 :
列表如下 :
S e 量 (尸9 X 0 . 1)
图 5 硒含量与荧光强度关系
序号 l 2 3 4 5 6
样品重 0 . 0 16 4 0 . 0 1 5 1 0刀 1 5 3 0 . 0 1 5 1 0 . 0 1 5 1 0 . 0 1 5 ]
荧光强度 4 8 . 6 4 1 9 4 6 . 4 4 6 . 2 4 7 . 0 4 6 . 2
/ 了士 s D 3 . 5 6士 0 . 0 8 3
第 2 期 张楠楠等 : 荧光分光光度法刚定大栽狼毒中微量元素 一 硒 ( S )e · 9
变异系数 = 标准偏差平均值 x1 0 0 % =
0
.
0 8 3
3
.
5 6
x10 0 % = 2
.
3 3 %
准确度 : 编号 样品含硒盈 (产) g ` 加人标准硒量 (户)g 测定硒含量 ( 拌)g 回收率 ( % )
l 0
.
3 4 5 0 0
.
0 3 4 5 /
2 0
.
3 4 5 O
、
0 2 0
.
0 5 2 7 9 0
.
8 3
3 0
.
3 4 5 0 0 2 0
.
0 5 6 2 10 8
.
6
4 0
.
3 4 5 0
.
0 2 0
.
0 5 5 0 10 2
.
3
5 0
.
3 4 5 0
.
0 2 0
.
0 54() 9 5
.
6 5
6 0
.
3 4 5 0
.
0 2 0
.
0 5 5 10 1
.
5 7
测定结果 : 标准偏差为 士 0 . 0 83
变异系数为 2 . 3 %
回收率为 9 0 . 8 3 一 1 0 8 . 6 %
参 考 文 献
【 l】L ot t, P . E . e t a l , A n a l . hC em
.
,
1 9 6 3 ; 3 5 ; 1 15 9
【2 ] iW k i e , J . B . e t a l , A g r i e . F o o d C h e m . , 19 7 0 ; 18 : 9 4 4
[3 ] 周济桂 李统贵 , 中草药 , 19 8 6 : 17 ( 8 ) : 17 一 1 8
[ 41 马成龙 王 家 , 中草药 , 1 9 8 5 ; 16 ( 6 ) : 4 一 5
【5 ] X u S B e t a l . A m e r ie a n J o u r n a l o f C h in es e M ed ie ine , 1 9 8 0 ;
【6 ] 杨访元 杜宝珍 , 环境化学 , 1 9 8 5 4 ( 4) : 4 5 ~ 5 0
[ 7】1 . N . , K a le n c h u k G . E . … / / 狱 a H a刀 . x o 19 87 : 4 2 ( 6 ) :
10 : 7 5
1 0 5 9 ~ ] 0 6 2
D e P e r m i n a t i o n o f M i e r o e l e m e n t S e l e n i u m i n E u P h o r b i a
P e沁 n e n is s b y a F l u o r e sc e n e e S P e e tr o P h o t o m e t r i e M e t h o d
Z h a ” 9 N a 摊凡 a n , J i n J i n g , Z h a 九9 Y u q i n g , V[ a n g L i
,
W
a n g Y i x i n
A b s t r a e t M i e r o e le m e n t s e l e n i u m i n a C h i n e s e m e d i e i n a l h e r b
,
E u Ph o r b ia P c k i n e n s is
,
w a s d e t e r m i n e d b y a fl u o r e s c e n e e s P e e t r o P h o t o m e t r i e m e t h o d u s e i n g Z
3 一 d i a m i n o n a Ph t h a l e n e (D A N E x P e r im e n t a l r e s u l t s h o w ed t h e S c c o n t c n st o f
E u P h o r b i a P e k i n e n s i w e r e 3
.
5 6 士 0 . 0 8 3召g /9 . T h e m e t h o d u s e d w a s fr e e fr o m e o m m o n
in t e r fe r e n e e a n d h ig h l y s e n s i t iv e
.
M in im u m d e t e r m i n a b l e S e in l ml e y e l
o h e x a n e w a s
0
.
0 0 1群9 . P r e e i s i o n a n d a e c u r a e y o f t h e m e t h o d y 15 : e o e if c i c n f o f v a r i a t io n : 2 . 3 3%
R e c o v e r y ar t es o f s e l e n i u m s t a n d a dr s a d d e d : 9 0
.
8 3 一 1 0 8 . 6% .
K e y w o r d s E u P h o r b i a P e k i n e n s i s
,
2
.
3 一 d i a m i n o n a P h t h a l e n e , e y e l o h e x a n e