全 文 ：· 1414· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.18 中国药房 2009年第 20卷第 18期
花蕾(6.28%)和枝干(14.16%)中的含量远远高于叶(3.55%)
中的含量 。
由此可见 , 河南产忍冬花蕾 、叶和枝干三者的挥发油成分
有明显的不同 , 在以挥发油为主要入药成分时 , 不能将河南产
忍冬的叶 、枝干代替花蕾入药 。
参考文献
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(收稿日期:2008-12-04 修回日期:2009-02-06)*副主任药师。研究方向:药物分析。电话:0751-8722975。E-
mail:sghhw@21cn.com
十味溪黄草颗粒由溪黄草 、余甘子、白花蛇舌草等 10味中
药组成 ,具有清热利湿 、健脾消滞的功效 。该产品原有的质量标
准是用薄层扫描法测定没食子酸的含量 ,操作复杂 、耗时 ,重现
性较差 。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定十味溪黄草颗
粒中没食子酸的含量 , 方法简便、准确 、重现性好 , 可用于十味
溪黄草颗粒的质量控制 。
1 仪器与试药
HPLC仪 , 包括 EasysepTM -1010LC高压输液泵 、Easy-
sep
TM -1010UV 检测器 、TW30色谱工作站(上海通微分析技
术有限公司);AG -135型电子天平 (梅特勒-托利多上海有
限公司):AS10200ADT 型超声清洗仪 (天津奥特赛恩斯仪器
有限公司)。三乙胺(邯郸市四有生物科学有限公司)、甲醇(广
州市东红化工厂)、盐酸(东莞市东江化学试剂厂)、磷酸(汕头
市光华化工厂)、醋酸乙酯(广州市东红化工厂)均为分析纯 ,水
为纯化水;没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号:
0713-200107);十味溪黄草颗粒 (广东省翁源县青云山制药
HPLC 法测定十味溪黄草颗粒中没食子酸的含量
黄红雯 1 * , 钟桂雄 2 , 谢仁东 3(1.广东韶关市药品检验所 , 韶关市 512028;2.丽珠集团利民制药厂 , 韶关市
512028 ,3.广东青云山药业有限公司 ,翁源县 512600)
中图分类号 R283.627;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)18-1414 -02
摘 要 目的:建立以高效液相色谱法测定十味溪黄草颗粒中没食子酸含量的方法 。方法:色谱柱为 DiamonsilT M C18(200 mm×
4.6 mm , 5 μm),流动相为含 0.1%三乙胺的 0.1%磷酸溶液-甲醇(95∶5),检测波长为 220 nm 。结果:没食子酸进样量在 0.1 ～
0.5 μg 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r =0.999 6);平均回收率为 98.63%, RSD =0.4%(n =6))。结论:本方法简
便 、准确 、重现性好 ,可用于十味溪黄草颗粒的质量控制 。
关键词 十味溪黄草颗粒;没食子酸;高效液相色谱法;含量测定
Determination of Galic Acid in Shiwei Xihuangcao Granules by HPLC
HUANG Hong-wen(Guangdong Shaoguan Insti tute for Drug Control , Shaoguan 512028 , China)
ZHONG Gui -xiong(Lim in Pharmaceutical Facto ry o f Lizhu Pharmaceutical Group , Shaoguan 512028 ,
China)
XIE Ren-dong(Guangdong Qingyunshan Pharmaceutical Co.Ltd., Wengyuan 512600 , China)
ABSTRACT OBJECT IVE :To est ablish an HPLC met hod fo r the dete rmination o f the content o f gallic acid in Shiwei xi-
huangcao granules.METHODS:The sample w as separated on DiamonsilT M C 18(200 mm ×4.6mm , 5 μm)wit h 0.1%phosphoric
acid so lution(cont aining 0.1% triet hy lamine) -methano l (95∶5)as mobile phase under a detection w avelengt h of 220 nm.
RESU LTS:T he linear range of gallic acid w as 0.1 ～ 0.5μg(r =0.999 6)and its average recovery w as 98.63 %(RSD =0.4%,
n =6).CONCLUSION :This method w as p roved to be sim ple , accu rate , rep roducible , and suitable for quality contro l o f Sh_
iw ei xihuangcao granules.
KEY WORDS Shiw ei x ihuangcao granule;Gallic acid;HPLC;Content de term ina tion
中国药房 2009年第 20卷第 18期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.18 · 1415·
厂 ,批号:050509 、050510 、050511 ,规格:每袋 10 g)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:DiamonsilTM C 18(200 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动
相:含 0.1%三乙胺的 0.1%磷酸溶液-甲醇 (95∶5);流速:
1.0 mL ·min -1;检测波长:220 nm ;柱温:室温;灵敏度:0.02
AU FS;进样量:20 μL 。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的没食子酸对照品
12.50 mg ,置于 100 mL 容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为对照品贮备液 。精密吸取该贮备液 2.0 mL ,置于 25
mL 容量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.3 供试品溶液的制备
取样品 20袋 , 混匀 , 取颗粒约 1.25 g ,精密称定 ,置于 100
mL 具塞三角瓶中 ,加甲醇超声(250 W , 25 kHz)提取 3次 , 每
次 30 mL 、20 min ,合并提取液 ,离心 ,上清液蒸干 ,残渣用水 50
mL 溶解;加盐酸调 pH 2 ～ 3 , 摇匀 , 用水饱和的醋酸乙酯提取
5次 , 每次 50 mL ,醋酸乙酯液蒸干 ,残渣用甲醇溶解并定容至
25 mL ,摇匀 ,精密量取续滤液 5 mL ,置于 25 mL 量瓶中 ,用水
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.4 阴性对照溶液的制备
取除余苷子以外的 9味药 ,按十味溪黄草颗粒制备工艺制
得阴性对照浸膏 ,精密称取 1.513 g , 置于 100 mL 具塞三角瓶
中 ,按“2.3”项下方法制得阴性对照溶液 。
2.5 系统适应性试验
取阴性对照溶液 、对照品溶液和供试品溶液 , 按上述色谱
条件进样测定 。结果 ,主峰的理论塔板数 n=4 800 ,与其它杂
质峰的分离度 R =5.8。色谱见图 1 。
2.6 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液 1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 mL , 置于
25 mL 容量瓶中 , 分别用流动相稀释至刻度 (浓度分为 5 、10 、
15 、20 、25 μg ·mL -1),按上述色谱条件进样测定 ,得其峰面积
积分值(A)分别为 287 295 、608 144 、893 856 、1 166 062 、1 453
480。以没食子酸进样量(C , μg)对 A 进行线性回归 ,得回归方
程为 C=3.456 9×10 -7A -4.818 3×10 -3(r =0.999 6)。结
果表明 , 没食子酸进样量在 0.1 ～ 0.5 μg 范围内与峰面积积分
值呈良好线性关系 。
2.7 精密度试验
取对照品溶液 , 按上述色谱条件连续进样 5次 , 测定 。结
果 , RSD =0.4%,表明仪器精密度良好 。
2.8 稳定性试验
取供试品溶液 ,分别测定放置 1 、2 、3 、4 、5 、6 、8 h后的没食
子酸含量 。结果 ,没食子酸的含量基本不变 , RSD =1.7%,表
明供试品溶液在 8 h 内基本稳定 。
2.9 重现性试验
取同一批样品 , 按 “2.3” 项下方法制备供试品溶液 , 按
“2.11”项下方法测定 ,平行 6次 。结果 ,样品中没食子酸的平均
含量为 1.118 mg ·g -1 , RSD =1.3%,表明方法重现性良好 。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知含量 (1.118 mg ·g -1)的同一批样品约
0.45 g , 共 6份 ,分别置于 100 mL 具塞三角瓶中 , 再精密加入
对照品贮备液 4.0 mL ,按 “2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按
“2.11”项下方法测定 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery test(n=6)
取样量/g 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% x/% RSD/ %
0.452 4 0.505 8 0.5 0.998 9 98.62
0.449 3 0.502 3 0.5 0.997 7 99.08
0.448 0 0.500 9 0.5 0.991 5 98.12 98.63 0.4
0.453 2 0.506 7 0.5 1.001 5 98.96
0.451 4 0.504 7 0.5 0.996 8 98.42
0.450 1 0.503 2 0.5 0.996 2 98.60
2.11 样品含量测定
取供试品溶液和对照品溶液 , 按上述色谱条件进样 , 用外
标法测定没食子酸的含量 。结果 , 3批样品 (批号分别为
050509 、050510 、050511)中没食子酸的含量分别为每袋 11.5 、
11.8 、11.6 mg , RSD分别为 0.5%、0.4%、0.6%。
3 讨论
没食子酸在甲醇中的溶解度较大 , 样品用甲醇超声提取 3
次后没食子酸已基本提取完全 。用醋酸乙酯再次提取是为了去
除样品中的水溶性杂质 , 使主成分峰与其它杂质峰的分离度能
达到要求 。
笔者曾试用 0.1%磷酸和甲醇按不同比例的组合作为流
动相 , 但峰分离度均不理想 。后在此基础上加入 0.1%的三乙
胺 , 使得主峰的拖尾因子及与其它杂质峰的分离度得到明显的
改善 。
由于样品中所用余苷子药材有广东产的 , 也有云南产的;
有去核的 , 也有不去核的 , 其含没食子酸的平均含量(标示量)
为 1.86%,按大生产中药材的转移率为 70%计算 ,本品的含量
测定限度应不低于每袋 10 mg 。
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(收稿日期:2009-01-12 修回日期:2009-04-10)