全 文 ：色反应结果显示蛇六谷醋酸乙酯萃取物存在有机酸、生物碱、黄酮
类、挥发油、香豆素、内酯等成分。蛇六谷石油醚萃取物中存在挥发
油。其系统定性测试结果见表 3 ～4。
表3 蛇六谷乙酸乙酯部位化学成分系统预试验结果
鉴别试验 试验结果 鉴别试验 试验结果
1．开环闭环反应 内酯、香豆素(+) 7． 10%KOH试验 蒽醌 (－)
2．异羟污酸铁反应 内酯、香豆素(+) 8．盐酸 －镁粉反应 黄酮 (+ )
3． Legal试剂 强心苷 (－) 9．浓氨水反应 黄酮 (+ )
4．碘 －碘化钾试剂 生物碱 (+) 10．油斑反应 挥发油 (+ )
5．雷氏铵盐 生物碱 (+) 11． PH (4． 5 )
6．醋酸镁反应 蒽醌 (－)
表4 蛇六谷石油醚部位化学成分系统预试验结果
鉴别试验 试验结果 鉴别试验 试验结果
1．磷钼酸反应 油脂、三萜(－) 3．氯仿 －浓硫酸 甾体、三帖类(－)
2．醋酐 －浓硫酸试剂 甾体、三帖类(－) 4．油斑反应 挥发油(+ )
4 讨论
本实验中我们对浙江地区常用抗肿瘤中药蛇六谷进行成分分
离，得蛇六谷醇提物、石油醚萃取物、醋酸乙酯萃取物及醇提后水提
物四个部位，采用MTT法，选用二种与临床应用有较好一致性的肿
瘤细胞株进行抑瘤试验，以期得到具有较高可信度的体外抗肿瘤活
性的有效部位，为蛇六谷的进一步研究提供依据。蛇六谷不同提取
物体外抑瘤实验结果表明:蛇六谷石油醚萃取物和醋酸乙酯萃取物
具有较明显的抑瘤作用。本实验为蛇六谷抗肿瘤有效成分的筛选及
抗肿瘤作用机理的研究，提供了初步的理论依据，但其作用机制仍有
待进一步研究。
中药是具有我国特色及切实可行的创制新药的物质来源，弄清
中药疗效的物质基础，对于新药的研制开发及中医药现代化均具有
重要意义。中药化学成分的研究从 20世纪 60年代开始，引起了国
内外学者的广泛关注。但是中药化学研究存在以下难点［4］:①成分
复杂:每味药往往有几十种甚至上百余种成分，复方则往往有数百种
至数千种成分;②成分浓度低:复方水溶液中有效成分含量低至万分
之几或十万分之几;③成分间的协同作用(吸收、代谢过程):中药有
效物质有时并不是某一成分，而是不同成分作用于不同靶点，通过多
途径发挥作用(活性成分群);④中药炮制、制剂过程中发生了化学反
应，产生了新的有效物质。由于这些原因，对中药化学成分分析、分
离及鉴定等方面均存在诸多困难。
至今大部分中药的活性成分仍未阐明或完全阐明，特别是有些
疗效确切的常用中药，如人参、党参、当归等，虽已分离鉴定了百余种
成分，但能代表其传统疗效的活性成分至今仍未阐明。所以中药化
学成分的研究目前仍处于探索阶段。
本研究通过沉淀反应或颜色反应，对蛇六谷石油醚、醋酸乙酯萃
取部位进行化学成分系统定性。结果表明，蛇六谷醋酸乙酯萃取物
存在有机酸、生物碱、黄酮类、挥发油、香豆素、内酯等成分;蛇六谷石
油醚萃取物中存在挥发油。本实验结果为该中药的进一步研究其作
用物质基础提供了实验依据。
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收稿日期:2011-02-28; 修订日期:2011-10-08
基金项目:海南省自然科学基金项目(No． 20804)
作者简介:范超君(1987-)，男(汉族)，湖北孝感人，现为海南师范大学在读硕
士研究生，学士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
* 通讯作者简介:毕和平(1955-)，男(汉族)，山西新绛人，现任海南师范大学化
学与化工学院教授，学士学位，主要从事天然产物化学研究工作．
白千层叶多糖提取及含量测定
范超君，毕和平* ，陈湛娟，陈光英，鲍长余
(海南师范大学化学与化工学院
海南师范大学“省部共建 －热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571127)
摘要:目的 研究白干层叶多糖的提取及含量测定方法。方法 采用水提醇沉法提取白千层叶中的粗多糖，苯酚 －硫酸比色法
测定白千层叶中多糖的含量。结果 白千层叶中的粗多糖提取率为 8． 26%，测得其平均含量为 14． 46 %，平均加样回收率为
100． 58 %(RSD =3%)。结论 该方法操作简便，准确度高，研究结果为白千层的进一步开发利用提供了科学依据。
关键词:白千层; 分光光度法; 多糖
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 03． 028
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)03-0581-02
植物多糖是由许多相同或不同的单糖以 α －或 β －糖苷键所组
成的化合物。近年来的大量药理研究表明多糖具有免疫调节、降血
糖、抗感染、抗衰老、抗艾滋病、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血、抗炎、抗疲劳
等功效，被广泛地应用于医疗和保健行业，具有极大的开发和应用前
景［1 ～4］。
桃金娘科白千层属植物白千层(Melaleuca leucadendron Linn．)
又名脱皮树、千层皮、玉树、玉蝴蝶等，原产澳大利亚，我国海南、广
东、广西、福建、台湾均有分布，其精油有镇痛、驱虫及防腐等功效，可
治牙痛、耳痛、风湿痛及神经痛等［5］。近年来已有学者对部分不同品
种和不同产地的白千层叶挥发油组份进行了研究［6 ～8］，但有关白千
层叶中多糖成分的研究尚未见相关文献报道。笔者采用水提醇沉的
方法提取白千层叶中粗多糖［9 ～11］，采用苯酚 －硫酸比色法［12 ～15］测定
白千层叶中多糖成分的含量，为进一步开发利用白千层提供基础研
究数据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 UV 2600紫外可见分光光度计(上海国美科学仪器有限
公司);FZ －102型微型植物试样粉碎机(天津泰斯特仪器有限公
司);TG3288电子天平(上海天平仪器厂);SHB －Ⅲ循环水式多用真
空泵(郑州长城科工贸有限公司);HS 3120超声波清洗器(天津市恒
奥科技发展有限公司);HWS 24型电热恒温水浴锅(上海一恒科技
有限公司);酒精计(杭州汇尔仪器设备有限公司)等。
1． 2 试剂 葡萄糖(标准品，天津市福晨化学试剂厂，含量≥98 %);
苯酚(广州化学试剂厂);浓硫酸(浓度≥98 %，广州东红化工厂);石
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 3 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 3 期
油醚(沸程为 60 ～90 ℃，天津富宇精细化工有限公司);丙酮(天津富
宇精细化工有限公司);无水乙醇(浓度≥95 %)等。以上试剂均为
分析纯。
1． 3 药材 白千层叶采自海南省海口市海南师范大学校园内，经海
南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师鉴定为桃金娘科白千层
属植物白千层Melaleuca leucadendron Linn．的叶，标本现存于海南省
热带药用植物化学重点实验室。
2 方法与结果
2． 1 白千层叶总多糖的提取 将自然晾干的白千层叶粉碎，精确称
取 50 g，按料液比1∶ 20加入丙酮 －石油醚(体积1∶ 1)在70 ℃回流
脱脂 3次，每次1 h。抽滤后加入500 ml水，超声处理30 min，90 ℃水
浴加热 2 h［14］。抽滤后滤渣重复提取 1次，合并两次滤液，减压浓缩
至 200 ml，加入无水乙醇至乙醇浓度达到 80 %，搅拌后冷藏过夜，抽
滤并用活性炭脱色得精制粗多糖。称重得到白千层叶粗多糖 4． 1302
g，其提取率为 8． 26 %。
2． 2 标准溶液的制备 精密称取 105 ℃烘干至恒重的葡萄糖标准品
20 mg于100 ml容量瓶中，用蒸馏水定容得0． 2 mg/ml葡萄糖标准溶
液。分别精确量取葡萄糖标准溶液 1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，5． 0，6． 0 ml 置
于 10 ml容量瓶中，定容得到 20，40，60，80，100，120 μg /ml 浓度的溶
液。精确量取 12． 50 ml 苯酚，置于 250 ml 容量瓶中，用蒸馏水定容
得5． 0 %苯酚溶液。
2． 3 检测波长的选择 精密吸取葡萄糖标准溶液 2． 0 ml，另取 2． 0
ml蒸馏水作为空白对照，两管中分别加入 5 %苯酚溶液 1． 0 ml，混
匀，再加入浓硫酸5． 0 ml，摇匀后放置5 min，置沸水浴中加热15 min，
冷却后，用紫外可见分光光度计从 400 nm到 600 nm扫描，得出最大
吸收波长为 485 nm。
2． 4 标准曲线的绘制 分别精确量取6个对照品系列溶液1． 0 ml置
于 50 ml小烧杯中，分别加入 1． 5 ml苯酚溶液、7． 5 ml浓硫酸，混匀
后放置 20 min，用紫外可见分光光度计在 485 nm处测其吸光度。以
对照品浓度 C为横坐标，吸光度 A为纵坐标绘制标准曲线如图 1，得
回归方程为 A =0．012 36 C －0．004，r =0． 999 6。
图1 葡萄糖对照品标准曲线
2． 5 白千层叶多糖含量的测定 精确称取白千层叶粗多糖 0． 020 0 g
置于 100 ml容量瓶中，加入 1 mol /L H2SO4 2 ml加热水解 2 h，冷却
至室温定容。精确量取 1． 0 ml 粗多糖样品液 5 份置于 50 ml 烧杯
中，分别加入 1． 5 ml苯酚溶液、7． 5 ml浓硫酸，混匀后放置 20 min，用
紫外可见分光光度计在波长 485 nm处测其吸光度，根据回归方程得
出浓度 C，从而计算出样品中多糖含量。结果见表 1。平均含糖量为
14． 46 %。
2． 6 加样回收率实验 精确称取白千层叶粗多糖5 mg置于50 ml容
量瓶中，加入1 mol /L H2SO4 2 ml，加热水解2 h后冷却至室温，定容。
精确量取 0． 2 ml样品液5份置于50 ml小烧杯中分别加入5个浓度
对照品系列溶液，经测定，平均回收率为 100． 58%，RSD = 3． 00%。
白千层多糖含量加样回收率实验数据见表2。
表1 吸光度与多糖含量对应关系
吸光度值 A 多糖含量(%)
0． 401 13． 54
0． 460 15． 52
0． 411 13． 86
0． 443 14． 92
0． 429 14． 46
表2 加样回收率实验结果
粗多糖量
m /mg
加入标准品量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0． 020 0． 010 0． 029 96． 67
0． 020 0． 020 0． 041 102． 5
0． 020 0． 030 0． 052 104． 0 100． 58 3． 00
0． 020 0． 040 0． 059 98． 33
0． 020 0． 050 0． 071 101． 4
3 讨论
本实验采用水溶醇析法提取白千层叶粗多糖，采用苯酚 －硫酸
比色法测定多糖含量，结果显示，粗多糖提取率为 8． 26 %，多糖平均
含量为 14． 46 %，平均加样回收率为 100． 58 %，RSD为 3． 00 %。结
果表明本法操作简单，测定误差小，准确可靠，可用于白千层药材的
质量控制和为其相关基础研究提供参考数据。
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 3