免费文献传递   相关文献

粗皮桉的组织培养与植株再生研究



全 文 :收稿日期:2012-11-12
基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(2011c04025);国家“十二五”科技计划项目(2012BAD19B08);国家星火计划项目
(2011GA780067,2011GA780057);广东高校边缘热带特色植物资源工程技术开发中心开放基金项目[(20120102);广
东省自然科学基金项目(S2013040014690);湛江市科技攻关项目(2011C3104010)
作者简介:*为通信作者,欧阳乐军(1976),博士,主要从事桉树基因工程育种研究工作,E-mail:ljouyang@zhjnc.edu.cn。沙月娥(1986-),
研究方向为植物分子生物学,E-mail:shayuee2011@163.com
粗皮桉的组织培养与植株再生研究
沙月娥1,吴志华2,欧阳乐军1*,黄真池1,曾富华1,李再峰1
(1湛江师范学院,广东 湛江 524048;2国家林业局 桉树研究开发中心,广东 湛江 524022)
摘要:【目的】研究不同植物生长调节剂组合对粗皮桉茎段愈伤组织诱导及再生的影响,为建立粗皮桉再生体系
和粗皮桉商品化育苗提供参考。【方法】以粗皮桉茎段为外殖体,通过对不同植物生长调节剂组合的优化,建立粗皮桉
再生体系。【结果】在MS培养基上添加2.0 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,21 d后,外植体愈伤组织诱导率达98.4%;将愈
伤组织接种在添加0.8 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA的1/2MS培养基上,诱芽率高达86.0%;用1/2MS培养基添加0.8 mg/L
PBU与0.1 mg/L NAA诱导粗皮桉不定芽增殖,用1/2MS培养基附加0.5 mg/L IBA和0.5 mg/L NAA诱导生根,炼苗15 d
后,组培苗移栽到黄心土与腐殖质土质量比为1∶1的基质中,成活率高达95.0%。【结论】2.0 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA
是诱导粗皮桉愈伤组织的最适植物生长调节剂组合,添加0.8 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA的1/2MS培养基诱芽效果
最好,添加0.1 mg/L NAA、0.8 mg/L PBU组合时,芽增殖、生长情况较好,添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L IBA组合时生根
效果最佳。
关键词:粗皮桉;植物生长调节剂;组合优化;愈伤组织;再生
中图分类号:S722.37 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2013)09-1511-06
0 引言
【研究意义】桉树因生长快、耐贫瘠、耐干旱而在
热带亚热带地区广泛种植,是世界三大人工林树种之
一(Dibax et al.,2010),是我国重要的经济林树种(杨
明胜等,2011)。中国引种桉树已有120多年历史,近年
来随着“林浆纸”一体化进程的深入开展,桉树人工林
总面积已扩展到368万ha,年木材总产量达4000万
m3,年生产纸浆材占国内自主生产纸浆材总量的50%
Tissue culture and regeneration of Eucalyptus pellita
SHAYue-e1,WUZhi-hua2,OUYANGLe-jun1*,HUANGZhen-chi1,
ZENGFu-hua1,LIZai-feng1
(1Zhanjiang Normal University,Zhanjiang,Guangdong 524048,China;2China Eucalypt Research Centre,Zhanjiang,
Guangdong 524022,China)
Abstract: 【Objective】The effects of different growth regulator combinations on callus induction and regeneration of
Eucalyptus pellita were studied to provide references for establishing Eucalyptus pellita regeneration system and cultivating
commercial seedlings. 【Method】Using Eucalyptus pellita stems as explants, the regeneration system was established by
comparing the variety of combinations of different plant growth regulators. 【Result】MS medium supplemented with the syn-
thetic growth regulator 2 mg/L PBU and 0.05 mg/L IAA. After cultivation for 21 d, 98.4% of explants formed callus. Callus
were transferred to MS medium containing 0.8 mg/L 6-BA and 0.1 mg/L-NAA to induce bud formation, and 86.0% of cal-
lus exhibited adventitious bud formation. Proliferation of adventitious buds was then stimulated on 1/2MS supplemented
with 0.8 mg/L PBU and 0.1 mg/L NAA for 20 d. For rooting, the elongated shoots were cultivated on root induction medi-
um containing 0.5 mg/L IBA and 0.5 mg/L NAA. After seedling stress for 15 days, the survival rate reached 95.0% with a
mixture of red-heart soil and humus soil (1∶1 by volume) as a substrate for transplanting. 【Conclusion】The plantlet regen-
eration system of Eucalyptus pellita was successfully established by comparing the variety of combinations of different plant
growth regulators. The optimum combinations of plant growth regulators for inducing the callus of Eucalyptus pellita were 2
mg/L PBU and 0.05 mg/L IAA. The optimum combinations of plant growth regulators for inducing the bud differentiation of
Eucalyptus pellita were 0.8 mg/L 6-BA and 0.1 mg/L NAA. The optimum combinations of plant growth regulators for in-
ducing buds proliferation of Eucalyptus pellita were 0.10 mg/L NAA and 0.8 mg/L PBU. The optimum combinations of
plant growth regulators for inducing rooting were 0.5 mg/L NAA and 0.5 mg/L IBA.
Key words: Eucalyptus pellita; plaut growth regulator; combination optimization; callus; regeneration
DOI:10.3969/j:issn.2095-1191.2013.9.1511
南方农业学报 JOURNAL OF SOUTHERN AGRICULTURE 2013,44(9):1511-1516
ISSN 2095-1191;CODEN NNXAAB http://www.nfnyxb.cn
南 方 农 业 学 报
以上。粗皮桉(Eucalyptus pellita)木材强度好,坚固耐
用,适用作建筑、枕木、造船等实木用材,也是优良的
纸浆用材树种之一(赵荣军等,2012)。粗皮桉愈伤诱
导与不定芽分化难度较大,将不同植物生长调节剂组
合优化用于粗皮桉组织培养,对建立粗皮桉再生体系
和粗皮桉商品化育苗具有参考价值。【前人研究进展】
作为富含酚类物质的多年生木本植物,桉树是公认的
不定芽分化比较困难的树种。组织培养过程中,外植
体极易褐化,细胞脱分化与再分化均比较困难,且不
同品种间再生条件差异较大。目前,有不少文献报道
了关于桉树组织培养的研究成果。裘珍飞等(2009)研
究了TDZ对巨尾桉(E. grandis × E. urophylla)胚性愈
伤组织诱导和再生的影响,结果表明,当TDZ为
0.02~0.05 mg/L时,愈伤组织诱导率最高。刘纯鑫等
(2009)以斑皮柠檬桉(Corymbia citriodora ssp. varie-
gate)的茎段为材料,利用添加6-BA和NAA的DCR培
养基诱导斑皮柠檬桉的愈伤组织和不定芽,生根培
养基1/2MS培养基添加了NAA和IBA,最终获得了斑
皮柠檬桉植株。杨春梅等(2009)研究了本泌桉(E.
benthamii Maiden & Cambage)的组织培养与快速繁
殖,以茎尖和腋芽为材料诱导的不定芽置于含不同浓
度IBA的培养基中,结果发现,生根时间与根的粗细都
不相同。宛淑艳等(2010)以尾叶桉(E. urophylla)无菌
苗茎段为材料,研究不同IAA、6-BA用量对尾叶桉茎
段愈伤组织诱导芽、生根的影响,结果表明,IAA对桉
树愈伤组织及芽再生有一定诱导作用,也能诱导愈伤
组织生根,但产生的根愈伤组织容易老化,而0.5 mg/L
6-BA使愈伤组织褐化更加严重。曾静等(2010)研究了
TDZ/NAA对尾赤桉(E. urophylla×E. camaldulensis)茎
段愈伤组织分化及植株再生的影响,结果得到最高丛
生芽诱导率为57.0%,获得48.3%的再生植株。张兆合
等(2010)以茎段为材料对贝克桉(Eucalyptus baker)
进行组织培养研究,得到了贝克桉的愈伤组织,但结
果不理想。宋建英(2008,2010)、燕丽萍等(2011)分别
以邓恩桉(E. dunnii)的茎段和种子为外植体,通过不
同条件对邓恩桉组织培养进行研究,均得到邓恩桉的
再生植株。【本研究切入点】虽然关于桉树组培的研究
较多,但是已报道的不同品种桉树的愈伤组织诱导率
及不定芽诱导率均低于80%。由于粗皮桉木质化程度
高,脱分化困难,愈伤诱导与不定芽分化均有较大难
度,因此关于粗皮桉再生研究鲜见报道。【拟解决的关
键问题】通过新型分裂素PBU等不同植物生长调节剂
的组合运用,建立粗皮桉组织培养再生体系,为生产
上粗皮桉商品化育苗提供一定的借鉴与参考,也为粗
皮桉遗传转化体系的建立奠定基础。
1 材料与方法
1. 1试验材料
1. 1. 1 外植体 选取室外种植的粗皮桉优良无性系
植株嫩枝,切除顶芽与叶片后,将嫩枝条用自来水冲
洗干净,在超净工作台上用无菌水冲洗2~3次,再用
75%乙醇浸泡30 s,无菌水冲洗3~4次后,切成0.5~0.8
cm长不带腋芽的茎段作为外植体。
1. 1. 2 试剂 噻唑基脲类新型分裂素(N-phenyl-N′
-[6-(2-chl-orobenzothiazol)-yl]urea,PBU)由李再峰
教授(2001)合成,配制成100 mg/L 母液备用;IBA、
IAA、2,4-D、6-BA、NAA、Vc、TDZ均购自上海生工,
亚精胺(Spd)、腐胺(Put)从广州卓越生物试剂公司购
置,其他试剂均为国产分析纯,购于广州化学试剂厂。
1. 2试验方法
1. 2. 1 愈伤组织的诱导 以MS+琼脂7 g/L+蔗糖30
g/L为基本培养基进行愈伤组织诱导,附加100 mg/L
Vc,添加不同6-BA与2,4-D组合、PBU与IAA组合,pH
为5.8~6.0,暗培养14 d后,转入光暗交替培养,5个重
复,21 d后统计愈伤组织诱导率。
1. 2. 2 不定芽的分化 将培养21 d的愈伤组织接种
于不定芽分化培养基上,不定芽分化培养基以1/2 MS
+Spd 100 μmol/L+Put 500 μmol/L + 蔗糖30 g/L+ 琼
脂7 g/L为基本培养基,附加100 mg/L Vc,添加不同
NAA和6-BA组合,pH为5.8~6.0,5个重复,10 d左右更
换新鲜培养基,20 d后观察不定芽分化情况,统计不
定芽诱导率。
1. 2. 3 不定芽的增殖 将带不定芽的愈伤组织转移
到不定芽增殖培养基中,以1/2MS为基本培养基,附加
100 mg/L Vc、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L以及不同的PBU
与NAA组合,5个重复,10 d左右更换新鲜培养基,20 d
后观察不定芽增殖情况。
1. 2. 4 不定芽的生根 将3~5 cm高的不定芽转入
1/2MS基本培养基中,附加不同NAA与 IBA组合,
20 d后统计生根情况。
1. 2. 5 炼苗与移栽 将生根良好的生根苗从恒温光
照培养箱移至室外自然环境中炼苗15 d左右。以黄心
土:腐殖质土质量比=1∶1为基质,将生根苗移栽至基质
中,20 d后观察移栽成活率。
1. 2. 6 培养条件 培养条件为:光照12 h/d,温度
(25±2)℃,光照强度2000~2500 lx。
1. 3统计分析
利用SAS分析软件进行数据处理和差异显著性
分析。
1512· ·
沙月娥等:粗皮桉的组织培养与植株再生研究
2 结果与分析
2. 1不同植物生长调节剂组合对愈伤组织形成的影响
在愈伤组织诱导过程中发现,外植体接种7 d后,
下胚轴两端切口处先形成愈伤组织,下胚轴呈哑铃
状,以后逐渐从两端向中间延伸,形成膨大的愈伤组
织。愈伤组织颜色各异,有白色、黄绿色、暗红色、绿
色,其中大部分白色愈伤组织体积膨大、结构疏松,而
黄绿色、绿色、暗红色愈伤组织结构致密,呈颗粒状,
其中暗红色愈伤组织易于老化,无法诱导芽分化,易
于分化出芽的是黄绿色、绿色的愈伤组织。
由表1可知,不同IAA与PBU组合对愈伤组织诱导
率影响较大,诱导率从79.6%到98.4%不等。低量
IAA诱导形成的愈伤组织大多呈白色,结构松散。随着
IAA用量的增加,诱导率相应提高;高用量IAA诱导形
成的愈伤组织大多呈暗红色,结构紧密,并随着PBU
用量的提高,诱导率呈现出下降的趋势。当PBU 为
2.0 mg/L、IAA 为0.05 mg/L时,愈伤组织诱导率达到
98.4%,愈伤组织呈黄绿色、结构紧密、活力旺盛。因此
2.0 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA是诱导粗皮桉愈伤组
织的最适植物生长调节剂组合。
不同2,4-D与6-BA组合诱导粗皮桉愈伤组织差异
明显,最低为35.7%,最高为91.7%。低量的2,4-D更有
利于愈伤组织的产生,随着2,4-D用量的提高,愈伤组
织诱导率呈现下降趋势;随着6-BA用量的增加,诱导
率呈上升趋势。
表 1 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响
Tab.1 Effects of different growth regulator combinations on callus induction
2,4-D 6-BA IAA PBU
0.1 0.2 73.2±2.3dC 生长慢,白色,质地松散 0.03 1.0 85.7±2.4deCDE 生长慢,白色,质地松散
0.2 0.2 56.3±1.3fD 生长较慢,白色,质地松散 0.03 2.0 88.2±1. 8cdBCD 生长快,黄绿色,质地紧密
0.3 0.2 35.7±1.9gE 生长慢,暗红色,质地紧密 0.03 3.0 92.8±2.7bcABC 生长快,黄绿色,质地紧密
0.1 0.4 83.4±3.3bcAB 生长快,暗红色,质地紧密 0.05 1.0 94.6±2.5abAB 生长快,黄绿色,质地紧密
0.2 0.4 82.6±2.4cB 生长快,白色,质地松散 0.05 2.0 98.4±3.4aA 生长快,黄绿色,质地紧密
0.3 0.4 60.8±1.8eD 生长慢,白色,质地紧密 0.05 3.0 93.1±1.7abcABC 生长快,黄绿色,质地紧密
0.1 0.6 91.7±2.5aA 生长快,黄绿色,质地紧密 0.10 1.0 93.7±0.8abABC 生长快,暗红色,质地紧密
0.2 0.6 88.9±3.6abAB 生长快,暗红色,质地紧密 0.10 2.0 82.2±2.1efD 生长快,暗红色,质地紧密
0.3 0.6 63.2±0.9eD 生长慢,黄绿色,质地紧密 0.10 3.0 79.6±3.5fD 生长慢,暗红色,质地紧密
植物生长
调节剂组合(mg/L)
Growth regulator
诱导率(%)
Induction
rate
生长情况
Growing
character
植物生长
调节剂组合(mg/L)
Growth regulator
诱导率(%)
Induction
rate
生长情况
Growing
character
同列数据后不同大写字母表示差异显著(P<0.01)。下同
Different capital and lower-case letters in the same column represent significant difference at 0.01 and 0.05 level,respectively. The same was applied in
the following tables
2. 2不同NAA与6-BA组合对不定芽分化的影响
将长势较好的愈伤组织转入不定芽分化培养基
后,愈伤组织在接种7 d内有所增大,且颜色逐渐变绿,
但未见明显芽点。14 d后,大部分愈伤组织上可见明
显芽点,愈伤组织表面湿润光滑,质地致密,部分可见
3~5个黄绿色小芽;经21 d左右所有处理均能诱导愈
伤组织分化形成不定芽,但诱芽率差异很大,为29.3%~
86.0%(表2)。在较高用量NAA诱导下,不定芽诱导率
较高;当NAA为0.1 mg/L、6-BA为0.8 mg/L时,单个愈
伤组织出芽数量较多,不定芽诱导率为86.0%。
2. 3不同NAA和PBU组合对不定芽增殖的影响
不同NAA和PBU组合对不定芽增殖的影响结果
见表3。将经过芽分化后的小芽转移到芽增殖培养基
中培养,7 d后观察发现不定芽数量开始增多。14 d后
观察发现部分不定芽已明显增多,芽苗呈黄绿色。20 d
后统计,所有植物生长调节剂浓度组合处理诱导的不
定芽小芽数量均增多,最多的每个不定芽可增加到20
个小芽。总体看来,在适量NAA诱导下,不定芽增殖较
多;当NAA为0.1 mg/L、PBU为0.8 mg/L时,芽增殖数
量较多,为3~9个,叶片绿色,芽苗生长情况较好。
表 2 不同NAA与6-BA的组合对不定芽分化的影响
Tab.2 Effects of different NAA and 6-BA combinations on ad-
ventitious buds induction
NAA 6-BA
0.05 0.5 150 89 59.3%±1.4dE +
0.05 0.8 150 91 60.7%±3.1dDE ++
0.05 1.0 150 102 68.0%±2.2cCD ++
0.10 0.5 150 109 72.7%±1.9bcBC +++
0.10 0.8 150 129 86.0%±2.5aA +++
0.10 1.0 150 118 78.7%±0.8bAB +++
0.15 0.5 150 69 46.0%±1.6eF +
0.15 0.8 150 56 37.3%±3.2fG +
0.15 1.0 150 44 29.3%±1.1gH ++
植物生长调节剂
组合(mg/L)
Growth regulator
接种外
植体数
Explant
number
出芽外
植体数
Adventitious
buds number
诱芽率(%)
Induction
rate
生长
情况
Growing
character
+表示一般,++表示较好,+++表示好。下同
+ means common,++ means good,+++ means very good. The same was
applied in the following tables
1513· ·
南 方 农 业 学 报
2. 4不同植物生长调节剂组合对不定芽生根的影响
组织培养苗的生根质量是影响移栽成活率的关
键因素之一,包括分化的根系类型、粗细、长短及健壮
程度等。不同植物生长调节剂组合对生根的影响见表
4。生根培养9 d后,不定芽茎基部开始膨大,并有白色
根点突起,9~15 d内陆续长根,无愈伤组织形成。生根
率从39.6%到95.6%不等,随着 IBA浓度升高,生根率
降低。当NAA为0.5 mg/L、IBA为0.5 mg/L时生根率最
高,且生根时间短,生根较多,根粗壮,平均根长最长,
根系发达。
选取生长健壮、根系发达的无菌苗,炼苗15 d后,
用镊子将培养基捣碎,小心将苗取出,用无菌水冲洗
残留的培养基,再移植到装有黄心土∶腐殖质土=1∶1营
养基质的小盆中,覆盖塑料薄膜保湿,7~10 d后移去塑
料薄膜,正常管理,移栽后成活率可达95.0%。
表 3 NAA和PBU不同组合对不定芽增殖的影响
Tab.3 Effects of different PBU and NAA combination on pro-
liferation of adventitious buds
NAA PBU 增殖情况 生长情况
(mg/L)(mg/L) Character of proliferation Growing
character
0.05 0.5 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为2~4个 +
0.05 0.8 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为2~5个 ++
0.05 1.0 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为3~5个 ++
0.10 0.5 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为3~6个 +++
0.10 0.8 不定芽增殖较多,每个愈伤组织上约为3~9个 +++
0.10 1.0 不定芽增殖较多,每个愈伤组织上约为3~7个 +++
0.15 0.5 不定芽增殖少,每个愈伤组织上约为2~3个 +
0.15 0.8 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为2~4个 +
0.15 1.0 不定芽增殖较少,每个愈伤组织上约为2~4个 ++
表 4 不同IBA和NAA组合对生根的影响
Tab.4 Effects of different IBA and NAA combination on root-
ing
NAA IBA 生根率(%) 生根状况
(mg/L) (mg/L) Rate of rooting Character of rooting
0.25 0.5 79.3±1.1cBC 10 d生根,根粗壮,须根多
0.25 1.0 67.5±1.8dD 11 d生根,根粗壮,须根较少
0.25 1.5 56.1±2.5eE 12 d生根,根纤细,须根很少
0.50 0.5 95.6±3.2aA 9 d生根,根粗壮,须根很多
0.50 1.0 85.2±3.7bB 9 d生根,根粗壮,须根多
0.50 1.5 69.4±1.4dD 11 d生根,根粗壮,须根少
0.75 0.5 72.5±0.7dCD 11 d生根,根粗壮,须根多
0.75 1.0 43.2±2.6fF 15 d生根,根纤细,须根很少
0.75 1.5 39.6±1.5fF 15 d生根,根纤细,须根很少
图 1 粗皮桉再生过程
Fig.1 Genetic transformation of E. urophylla × E. grandis
A:愈伤组织诱导; B:不定芽诱导;C,D:不定芽增殖;E:不定芽生根;F:组培苗移栽
A:Callus induction;B:Induction of adventitious buds;C,D:Proliferation of adventitious buds; E:Rooting of adventitious buds;F:Plantlets in a
plastic pot in greenhouse
1514· ·
3 讨论
影响桉树愈伤组织诱导与植株再生的因素有很
多。欧阳乐军等(2012)、Ouyang 等(2012a,2012b)以尾
叶桉、尾巨桉(E. urophylla×E. grandis)、尾赤桉以及邓
恩桉为材料进行组织培养及植株再生研究,发现不同
树种间的培养条件差异较大。有报道表明,外植体的
幼嫩程度以及外植体的来源部位等对桉树愈伤组织
及植株再生也有影响(Pinto et al.,2010;Prakash and
Gurumurthi,2010)。因此,本研究选用刚抽出的嫩梢作
为外植体,发现细胞脱分化容易,更有利于愈伤组织
诱导与不定芽分化。NAA和6-BA是诱导植株再生的
两种常用植物生长调节剂,不同桉树品种间再生对植
物生长调节剂的要求不同。本研究中,在粗皮桉愈伤
组织诱导与不定芽增殖阶段应用的PBU是一种新合
成的植物生长调节剂,具有与天然植物细胞分裂素相
类似的功能。研究发现,PBU比6-BA更有利于大花蕙
兰、文心兰、香蕉等植物的不定芽分化(李再峰等,
2005)。在本研究中,应用PBU与IAA组合对粗皮桉愈
伤组织诱导效果较好,外植体愈伤组织诱导率最高可
达98.4%,且愈伤组织生长较好,有利于后续不定芽的
分化,远高于已报道的桉树愈伤组织及不定芽诱导
率;PBU与IAA对不定芽增殖的效果也较好,每个外植
体最多可增殖20个小芽。
培养基中其他添加物如椰子汁、酪蛋白水解产物
和酵母提取液等对桉树再生也有较大的影响(Pinto et
al.,2002;Arruda et al.,2000;赵苏海等,2007),因
此,在粗皮桉组织培养再生过程中,选用合适的培养
基和添加物对其愈伤组织诱导及植株再生很重要。
在粗皮桉再生过程中发现,发生褐化的愈伤组织
随即失去活力,不能继续生长分化。因此,褐化问题是
限制粗皮桉再生的一个重要因素。部分研究表明,影
响褐变发生的因素有培养基成分、培养条件、外植体
的生理状态以及外植体材料的基因型等(赵苏海等,
2007)。粗皮桉酚类物质含量很高,防止其在组织培养
过程中的褐化是获得成功的关健。本研究通过向培养
基中加入100 mg/L Vc、500 μmol/L Put、100 μmol/L
Spd等物质有助于减少褐化。同时,及时将外植体移入
新鲜培养基也能减少褐化产生。
4 结论
本研究通过不同植物生长调节剂组合的优化建
立了粗皮桉再生体系。2.0 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA
是诱导粗皮桉愈伤组织的最适植物生长调节剂组合,
0.8 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA的1/2MS培养基诱芽
效果最好,0.1 mg/L NAA、0.8 mg/L PBU组合时,芽增
殖、生长情况较好,0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L IBA组合
时生根效果最佳。
参考文献:
李再峰,黄麒参,陈翠萍,罗富英. 2005. 植物高活性制剂对
文心兰组培芽增殖的影响[J]. 湛江师范学院学报,26
(3):41-45.
Li Z F,Huang Q C,Chen C P,Luo F Y. 2005. Effects of the
plant high active agent on adventitious buds proliferation in
tissue culture of Oncidium[J]. Journal of Zhanjiang Teach-
ers College,26(3):41-45.
刘纯鑫,张 ,刘天颐,黄少伟. 2009. 斑皮柠檬桉的组织
培养与快速繁殖[J]. 植物生理学通讯,45(4):399-400.
Liu C X,Zhang Y Y,Liu T Y,Huang S W. 2009. Tissue cul-
ture and rapid propagation of Corymbia citriodora ssp. var-
iegate(F. Muell.)K. D. Hill & L. A. S. Johnson[J]. Plant
Physiology Communications,45(4):399-400.
欧阳乐军,沙月娥,黄真池,曾富华. 2012. 广州一号桉树高
效组培再生体系的建立[J]. 东北林业大学学报,40(7):
14-17.
Ouyang L J,Sha Y E,Huang Z C,Zeng F H. 2012. Establish-
ment of tissue culture regeneration system of Eucalyptus
Guangzhou No.1[J]. Journal of Northeast Forestry Univer-
sity,40(7):14-17.
裘珍飞,曾炳山,李湘阳,刘英. 2009. TDZ对巨尾桉(GL9)
胚性愈伤组织诱导和再生的影响[J]. 林业科学研究,22
(5):740-743.
Qiu Z F,Zeng B S,Li X Y,Liu Y. 2009. Embroyogenic callus
induction and plant regeneration of clones GL9 of Eucalyp-
tus grandis × E. urophylla[J]. Forest Research,22(5):
740-743.
宋建英. 2008. 邓恩桉种子组织培养的研究[J]. 中南林业科技
大学学报,28(6):75-80.
Song J Y. 2008. Tissue culture of Eucalyptus dunnii seeds[J].
Journal of Central South University of Forestry & Technolo-
gy,28(6):75-80.
宋建英. 2010. 邓恩桉的组织培养和植株再生[J]. 林业科学,
46(6):138-145.
Song J Y. 2010. Bud micropropagation and plantlet-transplan-
ting techniques for breeding cold-resistant strain of Euca-
lyptus dunnii[J]. Scientia Silvae Sinicae,46(6):138-145.
宛淑艳,陈文渊,何晓玲. 2010. 尾叶桉茎段再生系统的建立
[J]. 基因组学与应用生物学,29(5):937-942.
Wan S Y,Chen W Y,He X L. 2010. The establishment of Eu-
calyptus urophylla stem regeneration system[J]. Genomics
and Applied Biology,29(5):937-942.
燕丽萍,夏阳,毛秀红,刘翠兰,王太明,李丽,李双云.
2011. 邓恩桉的组织培养[J]. 林业科学,47(5):157-161.
Yan L P,Xia Y,Mao X H,Liu C L,Wang T M,Li L,Li S
沙月娥等:粗皮桉的组织培养与植株再生研究 1515· ·
南 方 农 业 学 报
Y. 2011. Tissue culture of Eucalyptus dunnii[J]. Scientia
Silvae Sinicae,47(5):157-161.
杨春梅,赵培飞,汪国鲜,张倩. 2009. 本泌桉的组织培养与
快速繁殖[J]. 植物生理学通讯,45(9):890.
Yang C M,Zhao P F,Wang G X,Zhang Q. 2009. Tissue cul-
ture and rapid propagation of Eucalyptus benthamii Maiden
& Cambage[J]. Plant Physiology Communications,45(9):
890.
杨明胜,谢耀坚,刘杰锋. 2011. 中国桉树研究三十年[M].
北京:中国林业出版社.
Yang M S,Xie Y J,Liu J F. 2011. Thirty Years of Research of
Eucalyptus in China[M]. Beijing:China Forestry Industry
Press.
曾静,杨晓红,刘奕清,陈泽雄. 2010. TDZ/NAA对尾赤桉茎
段愈伤分化及植株再生的影响[J]. 西南大学学报,32
(10):87-90.
Zeng J,Yang X H,Liu Y Q,Chen Z X. 2010. Effects of TDZ/
NAA on callus differentiation and plantlet regeneration of
Eucalyptus urophylla × E. camaldulensis from stem segments
of subcultured plantlets[J]. Journal of Southwest Universi-
ty,32(10):87-90.
张兆合,逯昀,孙景梅,侯佳. 2010. 贝克桉组织培养的初步
研究[J]. 北方园艺,(13):151-153.
Zhang Z H,Lu Y,Sun J M,Hou J. 2010. Preliminary study of
tissue culture of Eucalyptus Baker.[J]. Northern Horticul-
ture,(13):151-153.
赵荣军,邢新婷,吕建雄,张俊珍. 2012. 粗皮桉木材力学性
质的近红外光谱方法预测[J]. 林业科学,48(6):106-
111.
Zhao R J,Xing X T,Lü J X,Zhang J Z. 2012. Estimation of
wood mechanical properties of Eucalyptus pellita by near
infrared spectroscopy[J]. Scientia Silvae Sinicae,48(6):
106-111.
赵苏海,周瑾,李桂祥,仲秀娟,王玮玮. 2007. 植物组织培
养中褐变的产生机理及控制措施[J]. 河北农业科学,11
(5):59-61.
Zhao S H,Zhou J,Li G X,Zhong X J,Wang W W. 2007.
Analysis on the browning of callous in tissue culture and
controlling measures[J]. Journal of Hebei Agricultural Sci-
ences,11(5):59-61.
Arruda S C C,Souza G M,Almeida M,Goncalves A N. 2000.
Anatomical and biochemical characterization of the calcium
effect on Eucalyptus urophylla callus morphogenesis in vitro
[J]. Plant Cell,Tissue and Organ Culture,63:143-154.
Dibax R,Deschamps C,Bespalhok Filho J C,Vieira L G E,
Molinari H B C,De Campos M K F,Quoirin M. 2010.
Organogenesis and Agrobacterium tumefaciens -mediated
transformation of Eucalyptus saligna with P5CS gene[J].
Biologia Plantarum,54(1):6-12.
Ouyang L J,He W H,Huang Z C,Zhao L Y,Peng S,Sha Y
E,Zeng F H,Lu X Y. 2012a. Introduction of the Rs -
AFP2 gene into Eucalyptus urophylla for resistance to Phy-
tophthora capsici[J]. Journal of Tropical Forest Science,
24(2):198-208.
Ouyang L J,Huang Z C,Zhao L Y,Sha Y E,Zeng F H,Lu X
Y. 2012b. Efficient regeneration of Eucalyptus urophylla ×
Eucalyptus grandis from stem segments[J]. Brazilian Archives
of Biology and Technology,55(3):329-334.
Pinto G,Santos C,Neves L,Araujo C. 2002. Somatic embryo-
genesis and plant regeneration in Eucalyptus globulus La-
bill[J]. Plant Cell Reports,21:208-213.
Pinto G,Silva S,Neves L,Araujo C,Santos C. 2010. Histocy-
tological changes and reserve accumulation during somatic
embryogenesis in Eucalyptus globulus[J]. Trees,24:763-
769.
Prakash M G,Gurumurthi K. 2010. Effects of type of explant
and age,plant growth regulators and medium strength on
somatic embryogenesis and plant regeneration in Eucalyptus
camaldulensis[J]. Plant Cell,Tissue and Organ Culture,
100:13-20.
(责任编辑 思利华)
1516· ·