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刃天青法对溪黄草抗菌活性部位的筛选
张洪利，康大力，莫小路* (广东食品药品职业学院 广州 510520)
摘要:目的 初步确定溪黄草抗菌活性的有效部位。方法 采用刃天青法测定溪黄草石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位和水部位的最低抑
菌浓度(MIC)。结果 溪黄草氯仿部位对临床常见的致病菌均有良好的抑制作用。结论 初步判定氯仿部位为溪黄草的抗菌活性部位。刃
天青法作为一种快速的检测细胞活性的方法，可用于中药抗菌作用的研究，为抗菌有效部位的筛选与开发提供了新思路。
关键词:溪黄草;抗菌;有效部位
中图分类号:Ｒ932;Ｒ282. 71 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2013)-09-0050-02
作者简介:张洪利，男(1972 －)。学历:硕士研究生。从事食品化学
研究。联系电话:13794348042
通讯 作 者:莫 小 路。联 系 电 话:020-28854995，Email:moxl @
gdyzy. edu. cn
广东省 科 技 厅 粤 港 关 键 领 域 重 点 突 破 项 目 资 助 (编 号
2009A030901011)
Preliminary Screening for Bioactive Parts of Ｒabdosin serra(Maxim)Hara
by Ｒesazurin-based
ZHANG Hong-li，KANG Da-li，MO Xiao-lu(Guangdong Food and Drug Vocational College，Guangzhou
510520，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To preliminarily screen antibacterial parts of Ｒabdosin serra (Maxim) Ha-
ra. METHODS The MIC of petroleum，chloroform，n-butanol and water parts was detected by Ｒesazur as-
say. ＲESULTS The chloroform part possesses antibacterial effect on common clinical pathogens. CONCLUSION
The results show that the chloroform part is the antibacterial part of Ｒabdosin serra(Maxim)Hara. Ｒesazurin assay
may dramatically detect the cell growth and can be used to evaluate antibacterial effects of TCM. This resazurin-assay
has provided a new method for antibacterial component development.
KEY WOＲDS:Ｒabdosin serra(Maxim)Hara;Antibacterial effect;Active parts
溪黄草为唇形科香茶菜属植物，是我国南方民间常用的
草药，具有抗菌、抗炎、保肝等功效〔1，2〕，刃天青(Ｒesazurin)是
一种蓝色非荧光染料，在活细胞的多种还原酶(如乳酸脱氢
酶)作用下，可将蓝色的刃天青还原成粉红色的荧光染料--试
卤灵，试卤灵能继续被还原成白色的二氢试卤灵。无活性或
死亡的细胞(细菌)没有代谢能力，不能将刃天青还原，继续
保持蓝色，所以刃天青法能检测活性细菌存在，进而根据颜色
变化判定药物最低抑菌浓度值(MIC)。本文采用刃天青法研
究了溪黄草不同溶解提取部位对临床广泛存在的病源微生物
生长的影响，测定了不同极性部位的 MIC，初步筛选了溪黄草
抗菌有效部位。
1 实验材料
·05·
海峡药学 2013 年 第 25 卷 第 9 期
1. 1 仪器与试剂 TN-30 微型提取浓缩机组(天津隆业轻工
机械有限公司)，ＲE-52cs 旋转蒸发器(上海百申仪器设备有
限公司)，营养肉汤培养基和营养琼脂培养基均为广东环凯
微生物科技有限公司生产，石油醚、氯仿、正丁醇等试剂均为
分析醇。
1. 2 菌种 金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆
菌、粪肠球菌、表皮葡萄球菌菌株来自广东食品药品职业学院
微生物教研室。
1. 3 药材 溪黄草购自广州市清平药材市场，由成都中医药
大学刘晓春副教授鉴定为 Ｒabdosin serra(Maxim)Hara。
2 样品制备
溪黄草 2kg采用 90%乙醇提取 2 次，合并提取液，采用旋
转蒸发仪挥干乙醇，采用蒸馏水溶解后依次用等体积石油醚、
氯仿、正丁醇萃取，各萃取 3 次，合并萃取液，挥干溶剂，即得
石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位、余下的溶液挥干水份即
位水部位。临用时采用蒸馏水溶解到 1%浓度作为测试样
品。
3 方法与结果
3. 1 细菌培养 各菌种保存于营养琼脂培养基，采用营养肉
汤培养基复苏，划线培养，筛选，扩大培养，菌株密度计数后即
得。
3. 2 刃天青法测定 MIC 100μL 的指示剂溶液(刃天青，
800μg·mL －1)放置到无菌的 96 孔板上的 11 列板孔里。约
9mL的指示剂溶剂与 6mL的待测菌混合，转移混合液 100μL
到所有测试孔第一 ～十列板孔和 12 列板孔里。将待测样品
溶液(100μL)加入到第一列板孔中的 4 个空中(相当于 4 次
重复)，混匀。取出 100μL的第一列溶液转移到第二列，然后
用同样方法倍增稀释至第十列，最后一列混匀后，取出 100μL
弃去。将加好样品的 96 孔板放入恒温箱，37℃，7 ～ 8h。颜色
由蓝紫色过度变成粉红色的那一孔对应的的浓度即为该样品
的 MIC。
3. 3 实验结果 溪黄草氯仿部位对金黄色葡萄球菌、沙门氏
菌、大肠杆菌、粪肠球菌和表皮葡萄球菌均具有良好的抗菌作
用，石油醚部位和正丁醇部位在实验浓度下只对粪肠球菌和
表皮葡萄球菌具有抑菌作用(见表 1)。
表 1 溪黄草各提取部位的 MIC结果
样品 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌
大肠杆菌 MIC
(%，mg·mL －1) 绿脓杆菌 粪肠球菌 表皮葡萄球菌
石油醚部位 － － － － 0. 5 1
氯仿部位 0. 1 1 0. 167 － 0. 125 0. 125
正丁醇部位 － － － － 1 1
水部位 － － － － － －
－:代表在最大浓度下无抑菌作用
4 讨论
有研究表明刃天青法与稀释法测定 MIC 的结果具有良
好的一致性〔3〕，刃天青显色法用于抗菌药物的筛选具有较好
的可行性。刃天青法同时也能够缩短检测时间，8h 以内即可
完成实验，比较适合药物抗菌作用的筛选，对于中药抗菌活性
成份的研究具有重要的借鉴意义。本文对溪黄草这种民间常
用的草药进行了抗菌有效部位的筛选，得到结论是氯仿部位
具有较好的抗菌活性，对临床常见致病菌具有较好的抗菌作
用。
根据相似相溶原理，一般来说，中药提取物的石油醚部位
主要含有挥发油和脂肪酸等低极性成分，氯仿部位主要含有
甾体、黄酮、蒽醌、萜类、氨基酸类成分，正丁醇部位主要含有
皂苷和萜苷类成分，水部位主要为水溶性成份，例如:糖类、氨
基酸肽类及含有较多糖基的苷类。有研究表明，溪黄草主要
有效成分为萜类、黄酮类、酚类和氨基酸等〔4〕，本实验结果可
能与氯仿部位对溪黄草中的抗菌有效成分如二萜类、黄酮类
成分具有较好的溶解能力有关。本研究为中药抗菌有效部位
快速筛选和溪黄草的进一步开发和利用提供了基础。
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·15·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 25 No. 9 2013