全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品安全与检测
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年 第卷 第期
收稿日期：2012-08-03
基金项目：黑龙江省自然基金课题项目(D200875)；佳木斯大学重点科研项目(Sjz2012-24)。
作者简介：王丽红(1968—)，女，硕士，副教授，研究方向为植物药的研究与开发利用。
王丽红，孙伟佳，李来军，田丽华，赵 龙
(佳木斯大学药学院，佳木斯 154007)
摘要：目的：测定不同采收期光果葶苈中叶黄素的含量。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱
为C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为100%甲醇，流速1 mL/min，检测波长446 nm，进
样量10 μL，柱温室温。结果叶黄素含量在1~100 μg/mL范围内线性关系良好，r=0.9977；幼
苗期含量为95.50 mg/kg，花蕾期含量为 113.95 mg/kg，花期含量为62.65 mg/kg，花果期含量为
35.67 mg/kg，而花中含量为7.12 mg/kg。结论：该方法灵敏、准确、专属性强，适用于光果葶苈
中叶黄素的测定；光果葶苈不同时期的叶黄素含量存在显著差异，其中花蕾期的含量最高，花
中含量最少。
关键词：叶黄素；光果葶苈；HPLC
中图分类号：TS 207 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2013)03-0264-04
Determination of lutein in Draba nemorosa var. leiocarpa of different
growth stages by HPLC
WANG Li-hong, SUN Wei-jia, LI Lai-jun, TIAN Li-hua, ZHAO Long
(School of Medicine, Jiamusi University, Jiamusi 154007)
Abstract: Object: Determination the content of lutein in Draba nemorosa var. leiocarpa of different
periods. Methods: By HPLC, chromatographic column for using C18 column (4.6 mm x 250 mm, 5 μ m),
mobile phase for methanol. The fl ow rate, injection volume of the sample and the column temperature
were 1 mL/min, 10 μL, room temperature respectively and the UV detection wave-length was set at 446
nm. Results: There was good linear relationship between integral value of peak area and lutein in the
range of 1~100 μg/mL (r=0.9977). The content of seedling period is 95.50 mg/kg, the content of bud
period is 113.95 mg/kg, The content of fl owering content is 62.65 mg/kg, the content of fl ower fruit period
is 35.67 mg/kg, and the content of fl owers is 7.12 mg/kg. Conclusions: This method is sensitive, accurate
and strong specifi city. It could be used for determination of lutein in Draba nemorosa var. leiocarpa. It has
signifi cant differences in different periods, among which the highest content of bud period.
Key words: Draba nemorosa L var. Leiocarpa Lindl; lutein; HPLC
HPLC法测定不同采收期猫耳朵菜中
叶黄素的含量
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猫耳朵菜，学名光果葶苈(Draba nemorosa L.
var. Leiocarpa Lindl.)，十字花科葶苈属植物，为早
春植物[1-3]。我国北方一些地区有食用其幼苗的习
惯，为将其推广成一种经济作物，课题组前期对
其所含的各种营养成分进行了研究。本文为进一
步研究其食用及药用价值对不同时期的光果葶苈
中的叶黄素含量进行了测定，为确定其食用及药
用的最佳采收期提供理论依据。叶黄素(Lutein)是
类胡萝卜素的一种，存在于多数蔬菜、水果、花
中，有多种生理功能[4]。目前研究表明，叶黄素具
有保护视力[5]、抗氧化[6]、延缓动脉硬化[7]及抗癌[8]
等作用。尽管大部分植物的叶片、花及果实中均
含有叶黄素，但目前叶黄素主要来源于万寿菊、
金盏菊花。因二者的来源有限，致使叶黄素的价
格居高不下，开发新叶黄素资源植物尤为重要[9]。
目前有关猫耳朵菜中叶黄素含量的测定尚未
见报道。为此，本实验采用HPLC法测定猫耳朵菜
中叶黄素的含量，从而为猫耳朵菜这一食药同源
的野生蔬菜的进一步应用与开发提供科学的理论
依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
光果葶苈药材：采自于佳木斯大学周边及四
丰山，经佳木斯大学药学院生药教研室王丽红老
师鉴定为十字花科植物光果葶苈。
叶黄素标准品(90%)：Sigma公司；甲醇(色谱
纯)；娃哈哈纯净水；其他试剂为分析纯。
1.2 仪器与设备
安捷伦高效液相色谱仪系统：Agilent 1100四
元泵，Agilent柱温箱，Agilent色谱数据工作站，
Agilent二极管阵列紫外检测器；EclipseXDB-ⅡC18
柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)、凌光UV7547CRT
紫外可见分光光度计：上海玉田分析仪器公司；
KQ-250DE型超声波清洗器：昆明市超声仪器有限
公司；RE-52A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器
厂；SHB型循环水式多用真空泵：郑州杜甫仪器
厂；BP211D型Sartorius电子天平：德国。
1.3 实验方法
1.3.1 叶黄素的提取 称取猫耳朵菜粉末：幼苗
期、花蕾期、花期、花果期各5 g，光果葶苈花3
g。将以上材料分别放入锥形瓶中，加入1:40的丙
酮溶液。放入超声波清洗器中超声提取，提取条
件：60 Hz、温度30 ℃、提取时间30 min。将提取
液减压抽滤后，上旋转蒸发仪浓缩滤液定容至10
mL，过滤后，将幼苗期、花蕾期、花期、花果
期原液稀释5倍，光果葶苈花原液直接采用HPLC
测定。
1.3.2 对照品溶液的配制 精密称取叶黄素对照品
10.0 mg，用丙酮溶解并定容于10 mL容量瓶中，摇
匀，得到对照品储备液(1 mg/mL)。将储备液分别
稀释为1、10、25、50、75、100 μg/mL。
1.3.3 高效液相色谱条件 EclipseXDB-ⅡC18柱
(250 mm×4.6，5 μm)，流动相为100%甲醇，流
速1 mL/min，柱温室温，进样量10 μL。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的选择
2.1.1 检测波长的确定 将叶黄素对照品溶液在
350~500 nm波长范围内进行扫描，测得其在446
nm波长处有最大吸收峰，如图1所示。故确定446
nm为检测波长。
图1 叶黄素对照品波长扫描曲线
图2 叶黄素标准曲线
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2.1.2 流动相的选择 在实验过程中先后采用甲
醇:水(90:10)、甲醇:水(95:5)、甲醇:水(98:2)、100%
甲醇为流动相，结果表明：在前3个做流动相时，
其保留时间较短，在样品中叶黄素的分离度不
高；在100%甲醇为流动相时，分离效果好，操作
简便，色谱峰形最佳，保留时间适中，且具有良
好的分离度。在此条件下，叶黄素与其他组分的
色谱峰实现了良好的分离，故本实验采用100%甲
醇作为流动相。
2.2 叶黄素标准曲线的绘制
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分别吸取1、10、25、50、75、100 μg/mL
的对照品溶液10 μL，进样，按上述色谱条件测
定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)、质量浓度(μg/
mL)为横坐标(X)，进行分析，得线性回归方程：
y=104.10x+209.74(r=0.9977)，叶黄素对照品在
1~100 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，
如图2所示。
2.3 精密度实验
精密吸取浓度为25 μg/mL的叶黄素对照品溶
液连续进样5次，每次进样10 μL，测定峰面积，
结果见表1，其RSD为1.44%。
表1 精密度实验结果
编号 1 2 3 4 5
峰面积/mAU 3076.4 3162.3 3190.1 3180.5 3139.8
2.4 稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液(幼苗期)，分别于
0、4、8、12、24、48 h测定峰面积，结果见表
2，供试品溶液在2 d内基本稳定，峰面积的RSD为
4.4%。
表2 稳定性实验结果
时间/h 0 4 8 12 24 48
峰面积/mAU 1260.9 1186.7 1176.4 1215.7 1179.9 1100.5
2.5 加样回收实验
稀释10倍的幼苗期样品中精密加入叶黄素
对照品溶液等体积混合，每次进样10 μL，并测
定其叶黄素的含量，结果见表3。平均回收率为
101.19%，RSD为3.19%(n=5)。
表3 加样回收实验结果
样品浓度/
(μg/mL)
加标浓度/
(μg/mL)
测得浓度/
(μg/mL) 回收率/% RSD/%
平均回收
率/%
15.91 101.00
15.76 99.08
3.285 12.5 16.45 105.32 3.19% 101.19
15.44 97.24
16.20 103.32
2.6 重复性实验
精密吸取猫耳朵菜同一样品(幼苗期)，按
1.3.3色谱条件分别进样5次，测定峰面积并计算叶
黄素含量，结果见表4。样品中叶黄素平均含量为
95.50 mg/kg，RSD为3.6%。
表4 重复性实验结果
编号 1 2 3 4 5 平均含量
RSD/
%
叶黄素含量/
(mg/kg) 100.98 93.85 92.86 96.63 93.20 95.50 3.6
2.7 样品中叶黄素含量
图4 样品(A~E)HPLC色谱图
图3 叶黄素对照品HPLC色谱图
A 幼苗期
B 花蕾期
C 花期
D 花果期
E 光果葶苈花
按照检测波长446 nm，流动相100%甲醇，进
样量10 μL，分别检测对照品和不同采收期的光
果葶苈中的叶黄素。标准品的HPLC色谱图如图
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3所示；按照1.3.1中的方法制备不同采收期的样
品，经测定不同采收期光果葶苈中叶黄素的HPLC
色谱图见图4，根据回归方程计算叶黄素含量，结
果见表5。
表5 不同时期光果葶苈中的叶黄素含量比较
不同时期 幼苗期 花蕾期 花期 花果期 花
叶黄素含量/(mg/kg) 95.50 113.95 62.65 35.67 7.12
从表5可见，不同时期光果葶苈中叶黄素含
量的差异显著：花蕾期含量最高，达到113.95 mg/
kg，花中含量最少，为7.12 mg/kg。
3 讨论与结论
叶黄素的提取大多数采用超声波提取[10-12]，
而目前叶黄素的主要测定方法有：分光光度法、
高效液相色谱法，高效液相色谱法因其简单、方
便、准确，所以现阶段大多数检测手段都采用
高效液相色谱法。虽然都用高效液相色谱法检
测叶黄素，但是在色谱柱的选择上也有差异，有
C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)、C18(250 mm×4.6
mm，5 μm)、C18(300 mm×3.9 mm，5 μm)，导致
流动相的选择也不相同，有乙腈和甲醇、乙腈和
氯仿、甲醇和水等。本实验针对因安全、成本考
虑，选择甲醇作为流动相[13-15]。
高效液相色谱法可以较好地分离光果葶苈
中叶黄素组分峰和杂质峰，能反映样品的真实含
量，该方法稳定性和重复性均较好，简便，准确。
不同采收期的光果葶苈中叶黄素含量存在较
大差异，幼苗期和花蕾期含量较高，花期叶黄素
的含量骤然下降，花果期含量更低。猫耳朵菜是
田间、路旁的常见杂草，民间也有食用其幼苗，
但真正了解其营养价值的却少之又少，测定其叶
黄素含量为其合理食用提供依据，为今后对其大
力开发研究奠定基础。
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