全 文 ：江西农业学报　2008, 20(5):59 ～ 60ActaAgriculturaeJiangxi
用 HPLC法测定华北大黄中的 Desoxyrhaponticin含量
王娟娟 1 ,陈志强2, 3 ,王顺喜1
　 　收稿日期:2008-01-21
作者简介:王娟娟(1983-),女 ,山西吕梁人,博士 ,从事农业工程研究。
(1.中国农业大学工学院,北京 100083;2.天津科技大学 食品工程与生物技术学院 、天津市食品营养与安全重点实验室 ,天津 300000;
3.天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 ,天津 300457)
摘　要:以华北大黄分离纯化出的多羟基茋类化合物 Desoxyrhaponticin作为标准品, 利用 KromasilTMC18(250 mm×4.6
mm, 5μm)反相色谱柱, 以甲醇 -乙腈 -水(35∶5∶60)为流动相 ,以 320 nm为检测波长 ,对华北大黄中的 Desoxyrhaponticin含
量进行了测定。结果表明自制的 Desoxyrhaponticin纯度达到了 98%以上, 能够作为标准品使用;Desoxyrhaponticin的出峰时间
为 26.532 min,进样量在 0.245 ～ 2.356μg范围内峰面积与进样量呈良好线性关系;平均回收率为 100.2%。
关键词:华北大黄;Desoxyrhaponticin含量;高效液相色谱
中图分类号:S567.9　文献标识码:A　文章编号:1001-8581(2008)05-0059-02
MeasurementofDesoxyrhaponticininRheumfranzenbachi
byHighPerformanceLiquidChromatography
WANGJuan-juan1 , CHENZhi-qiang2, 3 , WANGShun-xi1
(1.ColegeofEngineering, ChinaAgriculturalUniversity, Beijing100083, China;2.ColegeofFoodEngineeringandBiotechnolo-
gy, TianjinUniversityofScienceandTechnology, TianjinKeyLaboratoryofFoodNutritionandSafety, Tianjin300000, China;3.
TianjinJianfengNaturalProductCo.Ltd, Tianjin300457, China)
Abstract:Thehigh-purityDesoxyrhaponticinstandardsamplewasobtainedfromRheumfranzenbachiiMǜnt.byrefluxing, re-
ducedpressureconcentration, filtrationandtheremovalofanthraqninone.ThepeaktimeofDesoxyrhaponticinwasdeterminedat26.
532 minbyusingHPLCwithKromasilTMC18(250mm×4.6mm, 5μm)columnandUVdetectorsetat320nm.Theisocraticelutionofmethanol-acetonitrile-water(35∶5∶60)wasusedasthemobilephase.Thecalibrationcurvewaslinearintherangefrom0.245 ～
2.356μg, withr=0.9991.Theaveragerecoverywas100.2%.
Keywords:Rheumfranzenbachii;Desoxyrhaponticin;HPLC
　　华北大黄又称波叶大黄、山大黄、河北大黄、峪黄等 ,
是蓼科(Polygonaceae)大黄属波叶组植物 Rhapontineum
franzenbachiMǜnt.的根和根茎 ,主要分布于天津、河北 、
山西等地。华北大黄主要含蒽醌苷类及游离蒽醌类衍生
物 ,同时含有多羟基茋类化合物(polyhydrostilbenes,简称
PHS)Desoxyrhaponticin。近年的研究发现 PHS类成分
具有抗氧化[ 1] 、抗病毒 [ 2] 、抗肿瘤[ 3] 、抗血栓 、降血糖 [ 4]
及抗过敏[ 5]等作用。为了深入研究大黄的活性成分 ,开
发 PHS类新药 ,需要制备大量的 PHS标准品 ,并对大黄
中的 PHS含量进行测定。因此 ,研究 PHS标准品的制备
方法及其含量测定方法具有重要的意义。
本文通过自制的 Desoxyrhaponticin标准品 ,利用高
效液相色谱法对不同产地华北大黄的 Desoxyrhaponticin
含量进行了测定。
1　仪器与试剂
RE-52AA型旋转蒸发器 ,上海亚荣生化试剂厂;星
宇 DZKW-C型水浴锅 ,河北黄骅市航天仪器厂;A2003
分析天平 ,上海天平仪器厂;Waters600E高效液相色谱
仪 ,配有 996型 PDA紫外检测器 , 717plus自动进样系统;
Milennium32色谱管理系统;甲醇(色谱纯);乙腈(色谱
纯);超纯水;其余试剂均为分析纯 。
2　Desoxyrhaponticin标准品的制备
取华北大黄根茎粉 ,加 95%乙醇回流提取 3次 ,过
滤 ,合并滤液 ,减压浓缩 ,得华北大黄乙醇浸膏。加水分
散 ,过滤 ,沉淀加入饱和碳酸钠水溶液 ,加热 ,过滤 ,滤液
调 pH至 7,过滤 ,沉淀以 95%乙醇充分溶解 ,加适量
CaCl2固体 ,以 NaOH水溶液调 pH为 8 ～ 9,静置过夜 ,过
滤 ,滤液浓缩 ,以 40%丙酮 -水重结晶 ,得 Desoxyrhapon-
ticin标准品。
3　Desoxyrhaponticin标准品纯度检测
3.1　HPLC检测条件　色谱柱:大连国家色谱研究分析
中心 KromasilTMC18分析柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);流
动相:甲醇 -乙腈 -水(35∶5∶60);紫外检测波长:320
nm;流速:1 mL/min;温度:25 ℃。
3.2　标准品纯度检测　精密称取 Desoxyrhaponticin标
准品 5.0 mg,置于 10 mL容量瓶中 ,甲醇定容 ,作为对照
品溶液 。进样 10μL进行纯度检测 ,其色谱图如图 1所 示 ,图谱数据列于表 1。
图 1　Desoxyrhaponticin标准品 HPLC图
表 1　Desoxyrhaponticin标准品 HPLC数据
峰号 保留时间(min) 峰高 峰面积
含量
(%)
1 10.185 54.286 515.200 0.017
2 26.532 125045.739 2973098.62 99.983
4　HPLC测定方法与结果
4.1　线性范围　精密称取 Desoxyrhaponticin标准品 10
mg,置 50 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,再分别精密吸取 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mL置 10 mL
容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,分别进样 10 μL,按
照上述色谱条件进行测定 ,以峰面积为纵坐标 ,进样量为
横坐标作标准曲线 ,得回归方程为 Y=0.27+3642.30X, r
=0.9991。结果表明 ,进样量在 0.245 ～ 2.356μg范围内
峰面积与进样量呈良好线性关系。
4.2　精密度试验　精密量取同一浓度对照品溶液 ,分别
进样 5次 ,每次 10 μL,测得 Desoxyrhaponticin含量 ,计算
相对标准偏差 RSD为 0.32%,表明仪器精密度良好。
4.3　稳定性试验　取同一样品溶液分别于 0、4、12、24、
48h时进样 10μL,峰面积基本不变 , RSD小于 3.00%。
4.4　回收率试验　精密称取含量已知的大黄样品 5份 ,
各 0.25 g,分别精密加入对照品 1.0 mg,按样品溶液的制
备方法操作 ,在上述液相色谱条件下进行 HPLC分析 。
每个样品测定 3次 ,根据峰面积计算平均回收率 ,其结果
为 100.2%, RSD为 2.4%。
4.5　样品分析　取不同产地华北大黄样品 ,按照样品溶
液的制备方法进行处理 ,在上述液相色谱条件下进行分
析 ,其色谱图见图 2,用外标法计算 Desoxyrhaponticin的
含量 ,结果见表 2。
表 2　不同产地华北大黄 Desoxyrhaponticin含量测定结果
样品号 产地 含量(mg/g)
1 河北承德 44.3
2 河北石家庄 42.1
3 山西太原 38.4
4 山西临汾 40.2
图 2　样品 HPLC图
5　讨论
在分离 Desoxyrhaponticin时 ,经过加水过滤 ,加入饱
和碳酸钠水溶液加热过滤 ,滤液调 pH至 7再过滤等处
理能够除去华北大黄粗提物中所含的大部分杂质;后期
加入适量氯化钙固体 ,溶液调 pH至 8 ～ 9,静置过夜 ,过
滤 ,其目的是除去华北大黄提取物中残留的蒽醌类化合
物。原理是蒽醌类化合物与钙离子在微碱性条件下会形
成蒽醌钙络合物 ,该络合物不溶于水及有机溶剂 ,可以过
滤除去 ,这样滤液中 Desoxyrhaponticin的含量相对较高 ,
结晶后即可得到 Desoxyrhaponticin标准品 。
华北大黄中除含有蒽醌类化合物外 ,还含有多羟基
茋类化合物 ,但是对多羟基茋类化合物的含量报道差异
很大 ,这和华北大黄的产地 、收获季节和生长年限及其检
测方法有很大关系。本研究建立的 HPLC测定方法简便
快捷 ,结果准确可靠 ,对不同产地的华北大黄中 Des-
oxyrhaponticin含量测定结果表明 ,其含量均高于 3.8%。
华北大黄中 Desoxyrhaponticin的高含量为 Desoxyrhapon-
ticin活性研究 、标准品的制备及其产业化开发奠定了
基础 。
(下转第 62页)
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14.3898x+1.0190,相关系数为 0.9994。
2.1.2　添加回收率、标准偏差　空白样品中分别添加相
当于样品中含多菌灵 0.1、0.5、1.0 mg/kg三个水平的标
准溶液 ,放置过夜 ,使标准溶液被样品充分吸收 ,按样品
处理步骤操作 ,液相色谱测定 ,结果见表 1。
表 1　梨中多菌灵回收率及相对标准偏差(n=5)
添加量
(mg/kg)
回收量
(mg/kg)
回收率
(%)
相对标准偏差
(%)
0.1 0.090 89.8 1.520
0.5 0.440 88.0 0.728
1.0 1.069 106.9 0.663
2.2　残留动态　按照上述方法 ,对经过不同贮藏时间的
梨样本进行测定 ,以残留浓度为纵坐标 ,取样间隔时间为
横坐标 ,绘制残留动态曲线。分别对梨果皮、果肉中多菌
灵进行动态曲线绘制 ,见图 1、2。
图 1　梨果皮中多菌灵残留动态曲线图
图 2　梨果肉中多菌灵残留动态曲线图
由图 1、2得出 ,在梨贮藏时 ,梨果皮、果肉中多菌灵
浓度随时间延长先增加后减少 ,果皮中多菌灵含量大于
果肉中 ,大约 3 ～ 10倍 ,在 25 ℃贮藏条件下 , 5 d后多菌
灵在果皮的浓度最高 ,检测出此时的多菌灵的浓度为
3.394mg/kg。目前国内制定多菌灵在梨果类水果中的
最大残留限量为 3.0 mg/kg(GB2763 -2005),从而得出
在 5 d时多菌灵的浓度已经超标 ,若在此时食用是不安
全的 。
3　讨论
本文采用高效液相色谱对梨中多菌灵残留进行分
析 ,并根据延长梨的货架期的条件采用贮藏温度为 25
℃,研究了多菌灵在梨贮藏期间的残留动态。试验结果
表明 , 在梨贮藏时 ,梨果皮、果肉中多菌灵浓度随时间延
长先增加后减少 ,果肉中多菌灵含量低于果皮中。果皮
中多菌灵含量大于果肉中大约 3 ～ 10倍。在贮藏期间 ,
贮藏 5d后多菌灵在果皮的浓度超标 ,随着时间的延长
浓度又变低 ,因此在保证果品的外观品质的前提下 ,建议
在贮藏温度为 25 ℃时 , 5 d以后再食用。
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(上接第 60页)
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