全 文 ：一 1 5 2 4一 药物分析杂志 i C h n J p hm a rA na l Z) (X5, 25 ( 12 )
R P
·
H P L C 测定黄珠子草中短叶苏木酚的含量 ’
牛晓峰 , 贺浪冲 ,徐东伟
(西安交通大学医学院药学系 西安 71 以)6 1 )
摘要 目的 :建立高效液相色谱法测定黄珠子草中短叶苏木酚的含量 。 方法 : 以 hT e mr o H yP esr il 一 eK ys ot en O D S C I: 为分析柱 ,
甲醇 一 1% 醋酸 ( 3 :6 64 )为流动相 ,流速 1 . o mL · 而 n 一 ` ,检测波长 2 78 ln ,采用外标法定量测定 。 结果 :短叶苏木酚在 10 -
10 此 · ntL 一 `范围内线性关系良好 ( r = 0 . 9 9 7 ) ;其平均回收率为 98 . 7 % , sR D 为 0 . 98 % ( n = 6 ) 。 结论 : 该方法简便可靠 ,
快速 ,重现性好 ,可用于黄珠子草中短叶苏木酚的含量测定 。
关键词 : 黄珠子草 ;短叶苏木酚 ;反相高效液相色谱法
R P
·
H P L C D e t e r而n a U o n o f B r e对 fo li n in hP y l a n ht u s s而P l e x
N IU X i a o 一 fe n g , H E L a n g e h o n g , X U D o n g 一 we i
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n i n P h y1』an ht u s s im P l e x . M e th .
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(
r = 0
.
9 9 9 7 )
, a n d t h e a v e卿
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.
9 8%
.
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K e y w o r ds
:
hP 州an ht u s 51呷 lex ; b er v而l i n ; RP 一H p LC
黄珠子草又称珍珠草 、 鱼骨草 , 日开夜闭 , 地珍
珠 ,假芋等 ,为大戟科叶下珠属植物黄珠子草 ( 尸梅之-
阮hnt us 。 imp lex R e st
.
)的全草 。 在民间用于黄疽 、肝
炎 、肠炎痢疾 、 泌尿系统感染等治疗川 。 近几年对
黄珠子草的同属植物的抗肝炎病毒及抗肝细胞损伤
作用研究较多 〔2 一 4〕 , 但对于黄珠子草的研究未见报
道 。 对黄珠子草进行了生药学 5[] 及化学成分研究 ,
分离出榭皮素 ( q ue or iet n) 、 懈皮素一住鼠李糖葡萄
糖昔 ( q u e cr e t i n一 O 一ht amn o gl u e o s id e )
、 木犀草素一
o
一葡萄糖昔 ( l ut e o u n一 0 一gl u e o s id e ) 、月一谷菌醇 (刀一 5 1-
ot s et olr )
、 短叶苏木酚 ( b er v ifol in ) 、 没食子酸 ( g al l i c
ac 记 )等化合物 , 初步药理学实验证明 , 短叶苏木酚
为抗病毒和抗肝细胞损伤的主要活性成分 。 为此 ,
建立了黄珠子草中短叶苏木酚的测定方法研究 ,并
对陕西省 10 个地区的黄珠子草中的短叶苏木酚进
行了含量测定 ,为黄珠子草的药用质量标准的制订
和综合开发利用提供一定科学依据 。
1 仪器与试药
s h im a d Z u Le Z o l o A 型高效液相色谱仪 ( 日本
岛津 ) ,包括 SDP 一10 A vP 型紫外检测器 ( 日本岛津 ) ,
L C
一
I OA v P 输液泵 ( 日本岛津 ) , C LA S 一V P 色谱工作
站 ;短叶苏木酚对照品 : 自制 ,经 Uv , IR , H N M R 测
试鉴定 , 与文献值 6j[ 一致 , H p L C 检测为单峰 , 归一
化法计算纯度达 98 % 以上 。 黄珠子草药材分别采
于陕西商洛 、柞水 、 镇安 、 洋县 、南郑 、紫阳 、 汉中、 安
康 、平利 、宁强 , 实验中将样品粉碎后过 50 目筛 , 置
干燥器中备用 。 水为重蒸水 , 甲醇为色谱纯 ,其他试
剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱 hT e~
H y p e sr i l
一
K e y s ot n e O D S C l : 柱 ( 1 5 0 m x 4
.
6 m )
,流
动相 : 甲醇 一 1% 醋酸 ( 3:6 64 ) ,检测波长 27 8 n m ,流
速 1 . 0 m L · 而 n 一 ’ ,柱温 : 室温 ,进样量 or 林L 。 理论
塔板数以短叶苏木酚峰计算应不低于 2 0( 刃 。 在该
* 陕西省 自然科学基金 ( N o . 2X() ls M 7 2 )资助
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2005. 12. 017
药物分析杂志 C h i n J p harn A n al 2 0 05
,
2 5 ( 12 ) 一 15 2 5 一
色谱条件下 ,对照品及样品分离的色谱图见图
l
剂 , 分别超声处理 10 , 20 , 30 m in , 按 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方
法制备供试品溶液 。 分别吸取上述 3 种溶液 ,依法
测定 。 试验结果表明 ,样品用超声处理 30 m in 后 ,
短叶苏木酚即可提取完全 , 故样品采用超声 提取
30 m in
,制备供试品溶液 。
2
.
7 重复性试验 取同一 产地 ( 汉 中 ) 的样 品 6
份 ,按 “ 2 . 2 . 2 ” 项下方法制备供试品溶液 ,按拟定的
色谱条件进行测定 ,并用面积外标法计算 ,结果短叶
苏木酚的平 均 含 量 为 0 . 20 % ( n 二 6 ) , R SD 为
图 1 HP LC 色图谱
凡9 1 f l P LC e li r o m a t o 『 a m s
A
. 对照品 ( e l飞e m i 、目 : e fe er n e e S u b s ra n e e ) B . 样品 ( s a m p le )
!
.短叶苏木酚 ( b r e v i fo l i n )
1
.
7%
2
。
8 稳定性试验 取供试品溶液 , 每隔 Z h 进样 1
7189肠2530651仓a住上LL02197327加6肠1a住已仓a
2
.
2 溶液制备
2
.
2
.
1 对照品储备液 精密称定短叶苏木酚对照
品 5 m g ,置 10 m L 的量瓶中 ,加 50 % 甲醇使溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品储备液 。
2
.
2
.
2 供试品溶液的制备 取全草粉末约 0 . 2 9 ,
精密称定 ,置锥形瓶中 , 加 50 % 甲醇 30 m L ,超声处
理 30 而 n , 滤过 , 药渣用 50 % 甲醇洗涤 3 次 , 每次
2 m L
,合并人滤液 ,水浴蒸干 ,残渣用 50 % 甲醇溶解
并移至 10 m L 量瓶中 ,用 50 % 甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,经微孔滤膜过滤器 (0 . 45 林m ) 滤过 ,作为供试
品溶液 。
2
.
3 检测波长的选择 精密吸取对照 品溶液在可
见 一 紫外进行全波长扫描 , 在 2 0 0 一 4 0 0 n m 波长范
围内进行扫描测定 ,结果表明 ,短叶苏木酚在 2 78 n m
处有一最大吸收峰 ,所以选定 278 n m 为检测波长 。
2
.
4 标准曲线及线性范 围 精密吸取对照品储备
液 0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 8 , 1 . 2 , 1 . 6 , 2 . 0 m L 分别置 1 0 o L 的
量瓶中 ,加 50 % 甲醇至刻度 ,摇匀 , 分别精密吸取上
述溶液各 10 林 L , 注人液相色谱仪 , 按上述色谱条
件 ,依法测定峰面积积分值 , 以短叶苏木酚对照品浓
度为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲
线 , 回归方程为 Y = 1 . 2 2 0 x I O4 X + 8 . 15 6 x 10 3
r 二 0
.
9 9 9 7
表明短叶苏木 酚的进样量在 10 一 10 林g 与峰
面积呈良好的线性关系 。
2
.
5 精密度试验 精密吸取验取上述 “ 2 . 4 ” 项标
准溶液系列中浓度为 60 林g · m L 一 ` 的溶液 , 重复进
样 5 次 , 以峰面积计算其 R S D 为 0 . 82 % ,说明仪器
操作过程中精密度良好 。
2
.
6 提取条件的选择 取同一产地 3 份样品细粉
约 0 . 2 只 , 精密称定 ,置 50 m L 量瓶中 , 以稀乙醇为溶
次 ,直至 10 h ,依法测定 ,记录峰面积 ,结果 6 次进样
短叶苏木酚峰面积积分值 R SD 为 0 . 91 % , 结果表
明 ,供试品溶液在 10 h 内稳定 。
2
.
9 加样 回收试验 取同一产地 (安康 ) 的样品
0
.
1 9 (含量 : 0 . 26 % ) ,精密称定 ,分别精密加人对照
品溶液 (浓度 0 . 2 5 m g · m L 一 ’ ) 1 . 0 m L , 按 “ 2 . 2 . 2 ”
项下方法制备溶液 6 份并测定 ,计算回收率 ,结果平
均回收率 ( n = 6 )为 9 8 . 7 7% , RS D 为 0 . 9 8% 。
2
.
10 样品测定 取不同产地的黄珠子草样 品 ,按
,’2 . 2 . 2” 项下方法制备供试品溶液 , 在上述色谱条
件下测定其峰面积 , 以外标法计算短叶苏木酚的含
量 。 结果见表 1。
表 1 样品测定结果 〔n = 3)
T a b 1 D e t e n朴 ian U o n r e s ul st of s翻P le
产地 ( 。 o u r e e s )
短叶苏木酚含量
(
e o n t e n t 可 七r e v i fo il n ) / %
R S D /%
商洛 ( Sh an 乡L: o )
柞水 ( Z h as h u : )
镇安 ( Z he n an )
洋县 ( Y an gx 】an )
南郑 ( N a 二 h e n g )
紫阳 ( Zi y an g )
汉中 ( H a n z h o n g )
安康 ( A n k an g )
平利 ( p l n幼 )
宁强 ( N i n g甲 an g )
3 讨论
3
.
1 用 H P Lc 法测定药材中短 叶苏木酚的含量文
献中未见报道 , 比较了多种比例的乙睛 一 水 、 乙睛 -
磷酸二氢钾溶液 、 乙睛 一 醋酸溶液 、 甲醇 一 水 、 甲醇
一磷酸二氢钾溶液 、 甲醇 一醋酸溶液的分离效果 , 以
甲醇 一 1% 醋酸 ( 3 6 : 64 ) 为优 , 分离效果较好 , 保留
时间适中 ,且无干扰 。 本方法操作简便 , 快速 , 重现
一 15 26一 药物分析杂志 Ci h n J Pham rA na l 25 00, 2 ( 12 )
性好 ,适用于黄珠子草中短叶苏木酚含量的测定 。
见图 1。
3
.
2 由于短叶苏木酚难溶于丙酮 、氯仿 、 甲醇中 , 故
提取采用 50 % 甲醇做为提取溶剂 , 超声时间提取
30 m in
, 可提取完全 。 在将提取溶剂 、 时间确定后 ,
还比较了不同溶剂体积 ( 10 , 20 , 30 , 40 mL ) 对提取
效率的影响 ,结果表明 ,溶剂体积为 30 mL 时提取效
率最高 ,故选用 30 m L 作为提取溶剂用量 。
3
.
3 本文对 10 份不同产地黄珠子草中的短叶苏木
酚进行了含量测定 ,结果表明 ,不同产地短叶苏木酚
的含量存在较大的差异 ,含量在 0 . 02 % 一 0 . 39 % 之
间 ,其应是衡量药材内在质量的一个重要指标 。
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(本文于 20 5 年 1 月 19 日修改回 )