全 文 :China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 21 中国药房 2016年第27卷第21期
也与苦荞适应在高海拔地区种植的研究结果相一致[9]。
本试验建立的方法排除了荞麦中所含其他物质和其他酚
类化合物产生的干扰,操作简便、稳定、重复性好,可用于不同
产地和不同品种荞麦中芦丁、槲皮素和总黄酮含量的测定。
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(收稿日期:2016-02-15 修回日期:2016-03-04)
(编辑:张 静)
Δ基金项目:广东省中医药局项目(No.20141199)
*实验师,硕士。研究方向:天然药产物。电话:020-28854900
# 通信作者:副教授,博士。研究方向:天然药产物。E-mail:
liugy@gdyzy.edu.cn
HPLC法同时测定野老鹳草中5种活性成分的含量Δ
王如意 1*,刘纲勇 1 #,梁晓欣 2,廖丽嫦 1(1.广东食品药品职业学院实验中心,广州 510520;2.广东药科大学附属
第一医院药学部,广州 510080)
中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2016)21-2972-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.21.29
摘 要 目的:建立同时测定野老鹳草中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚含量的方法。方法:采用高效液相色
谱法。色谱柱为 WondaSil C18 WR,流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为 1.0 ml/min,检测波长为 280 nm,柱温为
40℃,进样量为20 μl。结果:没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚的检测质量浓度线性范围分别为0.02~20.02、
0.01~20.10、0.02~19.78、0.02~20.02、0.02~20.10(r=0.999 9、0.999 7、0.999 6、0.999 9、0.999 5);精密度、稳定性、重复性试验的
RSD<3.0%;加样回收率分别为 95.1%~100.6%(RSD=2.20%,n=6)、95.8%~100.6%(RSD=1.74%,n=6)、95.1%~101.9%
(RSD=2.71%,n=6)、97.7%~103.1%(RSD=2.04%,n=6)、95.3%~99.0%(RSD=1.46%,n=6)。结论:该方法操作简便、结果
准确、重复性好,可用于同时测定野老鹳草中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚的含量。
关键词 野老鹳草;没食子酸;原儿茶酸;儿茶素;柯里拉京;短叶苏木酚;高效液相色谱法
Simultaneous Determination of Five Active Compounds in Geranium carolinianum by HPLC
WANG Ruyi1,LIU Gangyong1,LIANG Xiaoxin2,LIAO Lichang1(1.Experiment Center,Guangdong Food and
Drug Vacational College,Guangzhou 510520,China;2.Dept. of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Guang-
dong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a method for simultaneous determination of gallic acid,protocatechuic acid,catechuic
acid,corilagin and brevifolincarboxylic acid in Geranium carolinianum. METHODS:HPLC was performed on the column of Won-
daSil C18 WR with mobile phase of acetonitrile-0.1% Phosphoric acid(gradient elution)at a flow rate of 1.0 ml/min,the detection
wavelength was 280 nm,the column temperature was 40 ℃,and the volume injection was 20 μl. RESULTS:The linear range was
0.02-20.02 for gallic acid(r=0.999 9),0.01-20.10 for protocatechuic acid(r=0.999 7),0.02-19.78 for catechuic acid(r=0.999 6),
0.02-20.02 for corilagin(r=0.999 9)and 0.02-20.10 for brevifolincarboxylic acid(r=0.999 5);RSDs of precision,stability and re-
producibility tests were lower than <3.0%;recoveries were 95.1% -100.6%(RSD=2.20%,n=6),95.8% -100.6%(RSD=
1.74%,n=6),95.1%-101.9%(RSD=2.71%,n=6),97.7%-103.1%(RSD=2.04%,n=6)and 95.3%-99.0%(RSD=1.46%,n=
6). CONCLUSIONS:The method is simple,accurate and reproducible,and can be used for the contents determination of gallic ac-
id,protocatechuic acid,catechuic acid,corilagin and brevifolincarboxylic acid in G. carolinianum.
KEYWORDS Geranium carolinianum;Gallic acid;Protocatechuic acid;Catechuic acid;Corilagin;Brevifolincarboxylic acid;
HPLC
··2972
中国药房 2016年第27卷第21期 China Pharmacy 2016 Vol. 27 No. 21
老鹳草为我国传统中药,来源于牻牛儿苗科植物牻牛儿
苗 Erodium stephanianum Willd.、老鹳草 Geranium wilfordii
Maxim. 或野老鹳草Geranium carolinianum L.的干燥地上部
分,收载于2015年版《中国药典》(一部),前者习称“长嘴老鹳
草”,后两者习称“短嘴老鹳草”。老鹳草多为野生,夏、秋二季
果实近成熟时采割,捆成把,晒干,备用[1]。其性平,味辛、苦,
归肝、肾、脾经;有祛风湿、通经络、止泻痢的作用[2]。现有研究
表明,老鹳草的化学成分以鞣质、黄酮类最为丰富[3-4],是其重
要的药效成分。但老鹳草成分复杂,在 2015年版《中国药典》
(一部)中并未明确其主要成分,更未对其主要成分建立含量
测定的方法。没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京和短叶
苏木酚作为野老鹳草或老鹳草的重要活性成分[5-7],目前尚未
见同时测定其含量的报道。因此,本试验采用高效液相色谱
法(HPLC)同时测定野老鹤草中上述 5种活性成分的含量,旨
在为其质量控制提供参考。
1 材料
1.1 仪器
LC-2010A HT型 HPLC仪,包括LC-2010型紫外检测器、
LC-2010 型四元低压梯度泵、LC-2010 型自动进样器、
LC-Solution型色谱工作站(日本 Shimadzu公司);UV-1801型
紫外-可见分光光度计(日本Shimadzu公司);AUW 220D型十
万分之一电子天平(日本 Shimadzu公司)。
1.2 试剂
没食子酸对照品(批号:120206-201304,纯度:99.88%)、
原儿茶酸对照品(批号:110809-201205,纯度:99.9%)、儿茶素
对照品(批号:123211-201309,纯度:99.0%)均购自中国食品
药品检定研究院;柯里拉京对照品(编号:S1,纯度:98.3%)、短
叶苏木酚对照品(编号:S2,纯度:98.0%)均由广东食品药品职
业学院实验中心自制;乙腈、甲醇为色谱纯,磷酸为优级纯,石
油醚(沸程60℃~90 ℃)为分析纯,水为自制超纯水。
1.3 药材
野老鹳草购自广州南北行中药饮片有限公司(批号:
140307K115),经广东省中药研究所蔡岳文教授鉴定为牻牛儿苗
科植物野老鹳草Geranium carolinianum L.的干燥地上部分。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:WondaSil C18 WR(150 mm× 4.6 mm,5 μm);流动
相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脱(洗脱程序见表1);流
速:1.0 ml/min;检测波长:280 nm;柱温:40℃;进样量:20 μl。
表1 梯度洗脱程序
Tab 1 Gradient elution program
时间,min
0~30
30~48
48~80
80~120
120~125
125~130
A,%
5→11
11→12
12→20
20
20→5
5
B,%
95→89
89→88
88→80
80
80→95
95
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液 精密称取没食子酸对照品10.01 mg、
原儿茶酸对照品10.05 mg、儿茶素对照品 9.89 mg、柯里拉京对
照品10.01 mg、短叶苏木酚对照品10.05 mg,分别置于10 ml量
瓶中,加甲醇定容,摇匀,制成单一对照品贮备液,备用。精密
量取上述单一对照品贮备液各 1 ml,置于同一 50 ml量瓶中,
加甲醇定容,摇匀,制成每 1 ml含没食子酸 0.020 02 mg、原儿
茶酸 0.020 10 mg、儿茶素 0.019 78 mg、柯里拉京 0.020 02 mg、
短叶苏木酚 0.020 10 mg的混合对照品溶液,置于 5℃冰箱中
冷藏,备用。
2.2.2 供试品溶液 精密称取样品粉末2 g,置于150 ml圆底
烧瓶中,加石油醚(沸程 60℃~80 ℃)20 ml,脱脂 1 h,弃去石
油醚,残渣加 60 ml 80%乙醇,回流提取 3次,每次 1 h。滤过,
合并滤液,减压浓缩成浸膏,用甲醇溶解并定容至 25 ml量
瓶中,精密量取 1 ml,置于 10 ml量瓶中,用甲醇定容,摇匀,
即得。
2.3 系统适用性试验
精密量取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液各适量,
按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录色谱,详见图 1。由图 1
可知,各成分均能达到基线分离,分离度>1.5,理论板数以没
食子酸峰计为 4 876,保留时间为 10.11 min;且其他成分对测
定无干扰。
2.4 线性关系考察
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液 1、5、10、15、20 ml,
分别置于 20 ml量瓶中,加甲醇定容,制成质量浓度分别为 1、
5、10、15、20 μg/ml的系列混合对照品溶液,精密量取各20 μl,
按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以各成分质量
浓度(x,μg/ml)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回
归,得回归方程和线性范围,详见表 2。
表2 回归方程和线性范围
Tab 2 Regression equations and linear ranges
待测成分
没食子酸
原儿茶酸
儿茶素
柯里拉京
短叶苏木酚
回归方程
y=53 774 315.5x+7 237.0
y=32 394 327.1x+10 851.2
y=23 648 521.4x+8 756.8
y=22 789 566.6x+4 753.7
y=35 612 358.6x+10 254.1
线性范围,μg/ml
0.02~20.02
0.01~20.10
0.02~19.78
0.02~20.02
0.02~20.10
r
0.999 9
0.999 7
0.999 6
0.999 9
0.999 5
2.5 检测限与定量限考察
取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,等倍逐步稀释,按
“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6次,记录峰面积。当信噪
比为3∶1时,得检测限(LOD);当信噪比为10∶1时,得定量限
400
300
200
100
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t,min
A
300
200
100
0
U,m
V
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t,min
B
1
2 3 4 5
54
3
2
1
图1 高效液相色谱图
A.混合对照品;B.供试品;1.没食子酸;2.原儿茶酸;3.儿茶素;4.柯里拉
京;5.短叶苏木酚
Fig 1 HPLC chromatogram
A.mixed reference substance;B.test sample;1.gallic acid;2.protocatechu-
ic acid;3.catechuic acid;4.corilagin;5.brevifolincarboxylic acid
U,m
V
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(LOQ),结果见表3。
表3 检测限与定量限考察结果
Tab 3 Determination results of detection limit and quantita-
tion limit
待测成分
没食子酸
原儿茶酸
儿茶素
柯里拉京
短叶苏木酚
LOD,μg/ml
0.075
0.102
0.085
0.095
0.131
LOQ,μg/ml
0.250
0.241
0.284
0.252
0.330
2.6 精密度试验
精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量,按“2.1”项下
色谱条件连续进样测定6次,记录峰面积。结果,没食子酸、原
儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚峰面积的RSD分别为
0.16%、0.14%、0.66%、0.23%、0.85%(n=6),表明仪器精密度
良好。
2.7 稳定性试验
精密量取“2.2.2”项下供试品溶液适量,分别于室温下放
置0、3、6、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面
积。结果,没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木
酚峰面积的RSD分别为1.34%、1.03%、1.23%、1.57%、1.34%
(n=5),表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。
2.8 重复性试验
精密称取样品适量,共 6份,按“2.2.2”项下方法制备供试
品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。结
果,没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚峰面
积的 RSD分别为 1.55%、2.17%、2.01%、2.13%、1.65%(n=
6),表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密称取样品粉末适量,共 6份,分别精密加入没食子酸
对照品0.250 0 mg、原儿茶酸对照品0.100 0 mg、儿茶素对照品
0.150 0 mg、柯里拉京对照品 0.500 0 mg、短叶苏木酚对照品
0.100 0 mg,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下
色谱条件进样测定,记录峰面积并计算加样回收率,结果见4。
2.10 样品含量测定
精密称取样品粉末(批号:140307K115)适量,按“2.2.2”项
下方法制备供试品溶液,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,记
录峰面积并计算各成分含量,结果见表5。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
参考相关文献[2-3,8-14],对供试品溶液的待测成分没食子酸、
原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、短叶苏木酚进行全波长扫描,结
果各成分在 280 nm波长处均有较大吸收,且该波长处各待测
成分均无干扰。因此,本试验选择280 nm作为检测波长。
3.2 流动相的选择
预试验时比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸溶液、
乙腈-0.1%磷酸溶液等不同流动相系统,结果以甲醇-水和甲
醇-0.1%磷酸溶液为流动相时均有峰重叠现象,以乙腈-水为流
动相时有峰拖尾现象,而以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相时峰
形较好。因此,本试验选择乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相。
3.3 洗脱程序的选择
预试验曾采用等度洗脱和梯度洗脱两种方式来处理流动
相,结果等度洗脱的色谱峰保留时间长,且待测成分有峰重叠
现象;而梯度洗脱的色谱峰峰形较好。因此,本试验采用梯度
洗脱程序来处理流动相。
表4 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 4 Results of recovery test(n=6)
待测
成分
没食子酸
原儿茶酸
儿茶素
柯里拉京
短叶苏木酚
称样
量,g
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
样品含
量,mg
0.253 0
0.252 8
0.264 0
0.258 0
0.256 3
0.258 8
0.111 3
0.111 2
0.116 2
0.113 5
0.112 8
0.113 9
0.151 8
0.151 7
0.158 4
0.154 8
0.153 8
0.155 3
0.506 0
0.505 5
0.528 0
0.516 0
0.512 5
0.517 5
0.101 2
0.101 1
0.105 6
0.103 2
0.102 5
0.103 5
加入量,
mg
0.250 0
0.250 0
0.250 0
0.250 0
0.250 0
0.250 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.150 0
0.150 0
0.150 0
0.150 0
0.150 0
0.150 0
0.500 0
0.500 0
0.500 0
0.500 0
0.500 0
0.500 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
0.100 0
测得量,
mg
0.504 5
0.493 2
0.512 0
0.495 8
0.497 1
0.499 0
0.208 9
0.209 9
0.213 1
0.214 1
0.209 6
0.209 7
0.301 2
0.304 5
0.301 8
0.297 5
0.304 1
0.304 3
0.996 9
1.004 7
1.016 3
1.031 4
1.004 4
1.008 2
0.196 9
0.197 9
0.200 9
0.201 3
0.201 5
0.200 9
加样回收
率,%
100.6
96.2
99.2
95.1
96.3
96.1
97.6
98.7
96.9
100.6
96.8
95.8
99.6
101.9
95.6
95.1
100.2
99.3
98.2
99.8
97.7
103.1
98.4
98.1
95.7
96.8
95.3
98.1
99.0
97.4
平均加样
收率,%
97.2
97.7
98.6
99.2
97.1
RSD,
%
2.20
1.74
2.71
2.04
1.46
表5 样品含量测定结果(n=3)
Tab 5 Results of contents determination of samples(n=3)
待测成分
没食子酸
原儿茶酸
儿茶素
柯里拉京
短叶苏木酚
平均含量,%
0.26
0.15
0.11
0.41
0.10
RSD,%
1.26
0.89
1.23
2.32
1.56
综上所述,本方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于
同时测定野老鹳草中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、柯里拉京、
短叶苏木酚的含量。
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(收稿日期:2015-11-09 修回日期:2016-04-07)
(编辑:刘 柳)
Δ 基金项目:中央高校基本科研业务费资助项目(No.HUST:
2015LC049)
*药师,硕士。研究方向:药物制剂新剂型与新技术。电话:027-
83663643。E-mail:isliwei_tiao@163.com
#通信作者:副主任药师,博士。研究方向:药物制剂新剂型与新
技术。电话:027-87649309。E-mail:cy9262005@aliyun.com
HPLC法同时测定复方奥硝唑贴膜中奥硝唑和地塞米松磷酸钠
的含量Δ
李 为 1*,雷 凯 2,张程亮 2,贺雯茜 2,刘 东 2,陈 鹰 1 #(1.广州军区武汉总医院药剂科,武汉 430070;2.华中
科技大学同济医学院附属同济医院药学部,武汉 430030)
中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2016)21-2975-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.21.30
摘 要 目的:建立同时测定复方奥硝唑贴膜中奥硝唑和地塞米松磷酸钠含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为
Inertsil ODS-3,流动相为甲醇-20 mmol/L磷酸盐缓冲液(用冰乙酸调pH至7.40)(55∶45,V/V),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检
测波长为242 nm,进样量为10 μl。结果:奥硝唑、地塞米松磷酸钠检测质量浓度线性范围均为1~100 μg/ml(r=0.999 7、0.999 9);
精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率分别为 96.50%~99.80%、96.50%~99.60%,RSD分别为 1.02%、0.99%
(n=9)。结论:该方法专属性强、精密度和稳定性好、准确度高,可同时测定复方奥硝唑贴膜中奥硝唑和地塞米松磷酸钠的含量。
关键词 复方奥硝唑贴膜;奥硝唑;地塞米松磷酸钠;高效液相色谱法
Simultaneous Determination of Ornidazole and Dexamethasone Sodium Phosphate in Compound Ornidazole
Film by HPLC
LI Wei1,LEI Kai2,ZHANG Chengliang2,HE Wenxi2,LIU Dong2,CHEN Ying1(1.Dept. of Pharmacy,Wuhan Gen-
eral Hospital of Guangzhou Command,Wuhan 430070,China;2.Dept. of Pharmacy,Affiliated Tongji Hospital,
Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a method for the simultaneous determination of ornidazole and dexamethasone sodium
phosphate in Compound ornidazole film. METHODS:HPLC was performed on the column of Inertsil ODS-3 with mobile phase of
methanol-20 mmol/L phosphate buffer(pH was adjusted to 7.40 with glacial acetic acid)(55∶45,V/V)at a flow rate of 1.0 ml/
min,column temperature was 30 ℃,detection wavelength was 242 nm and volume injection was 10 μl. RESULTS:The linear
range were 1-100 μg/ml for both ornidazole(r=0.999 7)and dexamethasone sodium phosphate(r=0.999 9);RSDs of precision,
stability and reproducibility tests were lower than 2.0%;recoveries were 96.50%-99.80%(RSD=1.02%,n=9)and 96.50%-99.60%
(RSD=0.99%,n=9). CONCLUSIONS:The method is specific with good precision and stability and high accuracy,and can be
used for the simultaneous determination of ornidazole and dexamethasone sodium phosphate in Compound ornidazole film.
KEYWORDS Compound ornidazole film;Ornidazole;Dexamethasone sodium phosphate;HPLC
口腔微环境是一个潮湿且易受到细菌感染的环境,同时
伴随着唾液的连续分泌,传统治疗药物极易受到唾液的侵蚀,
导致局部浓度低、疗效差。而口腔贴膜剂是一类采用天然或
者合成的具有黏附性的高分子聚合物制备的透明或者半透明
的薄膜状固体制剂,用于口腔给药具有保护创面、提高局部有
效浓度、延长药物滞留时间的优势。奥硝唑作为新一代的硝
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