全 文 ：DOI:CNKI:46-1049/ R.20110106.1121.011
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[收稿日期] 2010-12-21　　[ 修回日期] 2010-12-28　　网络出版时间:2011-01-06 11:21:57
[基金项目] 海南省自然科学基金(309029)
[作者简介] 谭银丰(1983-),男 ,湖南衡阳人 ,硕士 ,助教 , Tel:0898-66895337 , Email:s econdm es senger@163.com。
[通讯作者] 张俊清(1964-),女 ,教授 ,研究员 , Email:ju nqzhang2004@hotmail.com。
大叶冬青降血脂作用及多糖含量测定研究
谭银丰 ,李海龙 ,王　群 ,张俊清＊
(海南医学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室 ,海南 海口　571101)
　　[摘要] 目的:研究大叶冬青提取物对实验性高血脂小鼠血脂含量的影响 ,同时测定大叶冬青多糖含量 。
方法:苯酚-硫酸法测定多糖含量;测定喂食大叶冬青提取物后高血脂小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯
(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)浓度。结果:大叶冬青多糖含量为 1.19%(n=3 , RSD=8.52%)。
1.2 g/kg大叶冬青提取物能显著降低高血脂小鼠血清中 TC浓度(P<0.05),1.2 、0.6 、0.3 g/kg 3个剂量的
大叶冬青提取物均能显著降低高血脂小鼠血清中 TG浓度(P<0.05 ～ 0.01)。结论:大叶冬青提取物具有
一定的降血脂作用。
[关键词] 大叶冬青;降血脂;多糖
[中图分类号] R972.5　[文献标识码] A　[文章编号] 1007-1237(2011)01-0024-03
Polysaccharide concentration of Ilex latifolia extract and its lipid-decreasing effects
TAN Yin-feng , LI Hai-lo ng , WANG Qun , ZHANG Jun-qing
(Hainan Med ical Col lege , Hainan Prov incial K ey Laboratory o f R &D o f Tropical Herbs , Haikou
571101 ,China)
[Foundation Project] :Natural Science Foundation of Hainan Province(309029)
[ Author] :T AN Yin-f eng (1983-), Male , Hengyang Hunan , Assistant Lecturer ,M.M., Tel:Tel:
0898-66895337 , Email:secondmessenger@163.com.
[ Correspondence to ] :Z H ANG Jun-qing (1964-), Female , Pro fessor , Researcher , Email:jun-
qzhang2004 @hotmail.com.
Received:2010-12-21　　Rev ised:2010-12-28 J HMC , 2011;17(1):24-26
View from special ist:It is creative , and of certain scientific and educational value.
[ ABSTRACT] Object ive:To determine the poly saccharide concentration of Ilex lat ifo lia ex t ract and i ts
lipid-decreasing effects in hyperlipidemia mice model.Methods:The poly saccharide concentration o f Ilex
latifolia ex t ract w ere dete rmined w ith phenol-sulfuric acid procedure.Its lipid-decreasing effects w ere de-
tected by comparison o f serum concentrations of total cholesterol , t riglyceride and high density lipopro tein
cholesterin in hyperlipidemia mice model before and af ter they w ere fed w ith Ilex latifolia ex t ract.Results:
The content of poly saccharide in Ilex latifolia leaves w as 1.19%(n=3 , RSD=8.52%).Ilex lat ifo lia ex-
t ract at the do sage of 1.2g/kg signifcant ly decreased the concentration of total cho lestero l(P<0.05), and
ext ratcts at 3 othe r dosages all decreased trig lyce ride level in the mice model(P <0.05-0.01).Conclusions:
Ilex la tifo lia ext racts show s lipid-decreasing ef fects in mice model.
[ KEY WORDS] Ilex latifolia;Lipid-decreasing;Poly saccharide
24
　海南医学院学报　2011 ,17(1)
Journa l o f Hainan Medica l Univ ersity
DOI :10.13210/j .cnk i.jhmu.2011.01.010
　　苦丁茶在我国饮用历史悠久 ,相传具有清热解
毒 、降血脂 、降血压作用 ,经考证 , 大叶冬青(Ile x
lat i f olia Thunb.)和苦丁茶冬青(I lex K udingcha
C.J .Tseng)同为冬青科冬青属植物 ,是苦丁茶的正
品来源[ 1] 。已有文献对苦丁茶冬青多糖成分进行研
究[ 2] ,本文针对大叶冬青的多糖含量进行研究 。同
时进一步研究大叶冬青提取物的降血脂作用 。
1　实验动物 、仪器与试剂
昆明种小鼠 60只 ,体重(20±2)g ,动物合格证
号(HNACSDC20100590),由湖南省东创实验动物
科技服务部提供 。V-650紫外-可见分光光度计(日
本 JASCO 公司), Alpha 1-2 冷冻干燥机(德国
Chirist公司),电热套 。苯酚 、硫酸(分析纯),葡萄
糖对照品(中检所 110833-200503),大叶冬青叶采
于海南省万宁市兴隆华侨农场 ,由中国医学科学院
药用植物研究所兴隆分所陈伟平教授鉴定为冬青科
冬青属植物大叶冬青的叶 。总胆固醇(TC)、甘油三
酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(北
京北化康泰临床试剂有限公司)。
2　实验方法与结果
2.1　大叶冬青多糖含量测定
2.1.1　溶液的配制　(1)苯酚溶液的配制。精密称
取苯酚 5.0 g 置于 100 mL 棕色容量瓶 ,用蒸馏水定
容至刻度 ,得质量浓度为 5%的苯酚溶液 。(2)葡萄
糖标准溶液的配制。精密称取无水葡萄糖 0.1 g ,蒸
馏水定容于 100 mL 容量瓶中 ,得1 mg/mL葡萄糖
储备溶液。分别吸取 1 mg/mL 葡萄糖溶液 2.5 、
3.0 、3.5 、4.0 、4.5 、5.0mL置 50mL容量瓶中 ,定容至
刻度 ,得浓度分别为 0.05、0.06 、0.07 、0.08 、0.09 、0.10
mg/mL的系列葡萄糖标准溶液。
2.1.2　多糖的提取　将采集的大叶冬青叶晾干 ,粉
碎 ,精密称取粉末 5.0 g 置烧瓶中 ,加 100 mL 蒸馏
水 ,沸水浴回流提取 1 h ,离心取上清液 ,提取 3次 ,
将提取液浓缩至约 25 mL ,加 3倍体积无水乙醇沉
淀过夜 ,离心 ,弃去上层乙醇 ,所得为粗多糖沉淀 ,沉
淀加水溶解 ,加入等体积 sevag 试剂(氯仿∶正丁醇
=4∶1),震荡 5min ,离心 ,分取水层清液 ,弃去中间
变性蛋白质层 ,同法加入 sevag 试剂去蛋白 3次后 ,
取水层加入 3倍体积乙醇 ,静置6 h ,离心取沉淀 ,用
丙酮洗涤 2次 ,挥干丙酮后加水溶解 ,定容待测 。
2.1.3　多糖测定方法　采用苯酚-硫酸法 ,取样品及
标准溶液各 1 mL 放入具塞试管中 ,另以蒸馏水为空
白 ,先后加入1.6mL 5%的苯酚溶液 ,7mL 硫酸 ,摇匀 ,
室温放置30min显色 ,上 V650分光光度计在最大吸收
波长下测定吸光度 ,以空白管调零 ,通过标准曲线计算
测试样品多糖浓度。取葡萄糖对照品溶液和大叶冬青
多糖样品溶液 ,按上述苯酚-硫酸法显色 ,在 400 ～
600 nm范围内扫描 ,确定最大吸收波长。结果见图 1 ,
确定最大吸收波长为 482 nm 。
a b c
a大叶冬青多糖;b葡萄糖标准溶液;c空白样品
图 1　波长扫描
2.1.4 　标准曲线的制备 　取 0.05 、0.06 、0.07 、
0.08、0.09 、0.10 mg/mL葡萄糖标准溶液 ,按“2.2.3多
糖测定方法”项操作 ,分别测定吸光度。以葡萄糖浓
度(mg/mL)为横坐标 ,吸光度值为纵坐标作标准曲
线 ,结果见图 2 , 求得标准曲线的回归方程:Y =
7.576 31X +0.065 894 3 r=0.999 6 。
2.1.5　精密度试验　精密吸取大叶冬青叶多糖溶
液获得的多糖溶液(稀释 625倍)1.0 mL 按“2.1.3
多糖测定方法”项操作 ,同时平行测定 10组 ,所得吸
光度 RSD=0.03%,表明精密度良好 。
2.1.6　显色稳定性试验　精密吸取大叶冬青叶多
糖溶液 1.0 mL 按“2.1.3多糖测定方法”项操作 ,样
品显色后 ,每隔 5 min 测定 1次吸光度 ,共测定 17
次。RSD=0.10%,表明本法对大叶冬青叶多糖显
色至少在 1.5 h之内稳定。
2.1.7　回收率试验　取已测知多糖浓度的大叶冬
青多糖溶液 ,分别加入 2.5 、5.0 、7.5 、10.0 、12.5 、
15.0 、17.5 、20.0μg 葡萄糖 ,按“2.1.3 多糖测定方
25谭银丰等.大叶冬青降血脂作用及多糖含量测定研究　
图 2　葡萄糖标准曲线
法”项操作 ,测定吸光度 ,求平均回收率。求得平均
回收率为 101.38%, RSD=4.57%(n=9)。
2.1.8　含量测定　称取 3份大叶冬青多糖样品 ,每
份约 5.0 g ,按“2.1.2多糖的提取”和“2.1.3多糖测定
方法”项操作 ,并作随行标准曲线测定 ,结果见表 1 ,计
算得多糖平均含量为1.19%,RSD=8.52%(n=3)。
2.2　大叶冬青提取物降血脂作用研究
2.2.1　大叶冬青提取物的制备　取大叶冬青粉末
约 400 g 置圆底烧瓶中 ,加入 20倍量水 ,电子控温
电热套加热 ,控制温度在(100±5)℃下提取 40min ,
提取 3次 ,离心 ,合并上清液 。上清液浓缩至约 1/4
体积 ,加入 95%乙醇使醇含量达 75%, 4 ℃下放置
6 h ,4 000 r/min离心取沉淀 ,用水复溶 ,同法再加乙
醇沉淀一次。加水溶解沉淀 ,加入等体积 sevag 试
剂(氯仿∶正丁醇=4∶1),震荡5m in ,静置 ,分取水
层清液 ,弃去中间变性蛋白质层 ,同法加
入 sevag 试剂去蛋白 3次后 ,取水层加入乙醇使醇
含量达到 75%,静置 6 h ,离心取沉淀 ,用丙酮洗涤 ,
挥干丙酮后冷冻干燥得大叶冬青提取物 ,经苯酚-硫
酸法测得多糖含量为 27.0%。
表 1　大叶冬青多糖的含量测定
编号 样品质量(g)
多糖质量
(以葡萄糖计/ g)
多糖百分
含量(%)
平均百分
含量(%)
RSD
(%)
1 5.004 6 0.062 1 1.24
2 5.002 4 0.062 5 1.25 1.19 8.52
3 5.017 8 0.053 7 1.07
2.2.2　降血脂实验研究　取 18 ～ 22 g 雄性昆明种
小鼠 60只 ,随机分成正常组 、高血脂模型组及大叶
冬青提取物高 、中 、低剂量组(剂量分别为 1.2 、0.6 、
0.3 g/kg)、4.0 mg/kg 辛伐他汀组共 6 组(10 只/
组),除正常组常规饲料喂养外 ,其他组均喂食高脂
饲料(2%胆固醇 、15%猪油 、0.4%胆盐 、82.6%基础
饲料),同时灌胃给予相应药物 ,正常组和高血脂模
型组灌胃等体积自来水 。给药 18 d后 ,各组小鼠禁
食不禁水12 h ,摘眼球取血 , 3 000 r/min 离心 10
min ,取血清 ,用试剂盒按紫外分光光度法测定血清
TC 、TG 、HDL-C含量。结果见表 2。大叶冬青提取
物高剂量组 TC 浓度明显低于高血脂模型组(P <
0.05),3个剂量大叶冬青提取物组 TG 浓度均明显
低于模型组(P<0.05 ～ 0.01)。
表 2　各组小鼠 TC、TG、HDL-C浓度的比较 mmol/ L( x±s)
组别 n TC(mmo l/ L) TG(mmo l/ L) HDL-C(mmo l/ L)
正常组 10 2.33±1.39＊＊ 1.26±0.33＊ 1.39±0.41＊＊
高血脂模型组 10 4.32±1.24 1.71±0.43 0.58±0.39
大叶冬青提取物高剂量组 10 2.98±0.83＊ 0.90±0.44＊＊ 0.49±0.19
大叶冬青提取物中剂量组 10 4.02±1.66 1.08±0.64＊ 0.97±0.80
大叶冬青提取物低剂量组 10 4.43±1.68 0.76±0.30＊＊ 1.11±0.53
辛伐他汀组 10 2.50±1.29＊ 0.81±0.37＊＊ 1.39±0.60＊
　注:与高血脂模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01。
3　结论
通过对比加水 10 倍 、20 倍 、30倍提取大叶冬
青 ,沉淀多糖时乙醇浓度 67%、75%、80%,确定加
水 20倍 ,醇沉浓度 75%时多糖提取效果最好。
降血脂实验表明 ,1.2 g/kg 大叶冬青提取物能
显著降低高血脂小鼠血清中 TC 浓度 , 3个剂量的
大叶冬青提取物均能显著降低高血脂小鼠血清中
TG浓度 ,说明大叶冬青水提醇沉提取物有一定的
降血脂活性 ,经测定提取物中多糖含量为27.0%,其
他成分未知 ,有必要对该提取物进行进一步的分离
纯化鉴定 ,探讨其降血脂作用的物质基础。
参考文献
1　吴赵云 ,包雪声 , 顺庆生 ,等.苦丁茶的本草及植物来源考
证[ J] .上海中医药杂志 , 2001 , 11(1):43-44.
2　吴晓鹏 ,王一飞 , 刘秋英 ,等.苦丁茶多糖的提取分离及部
分理化性质研究[ J] .食品工业与发酵工业 , 2007 , 33(6):
141-144.
(责任编辑　邝敏)
26 　海南医学院学报 Vol.17 No.1 Jan.2011