全 文 ：　　　　广东微量元素科学
　2010年 　 　 　 　 　 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE 　 　 　 　 第 17卷第 2期　
文章编号:1006 446X(2010)02 0038 05
电位滴定法测定定心藤中总有机酸的含量
曾　立1, 2　罗　辉 3　周效思 1　尹文清 2
(1.湖南邵阳医学高等专科学校 , 湖南　邵阳　422000;
2.广西师范大学药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室 ,
广西　桂林　541004;3.湖南沅江市政通实验学校 , 湖南　益阳　413100)
摘　要:为研究定心藤中总有机酸的最佳提取工艺 , 建立其测定方法 , 采用正交实验法考察了乙
醇含量 、 固液比 、 提取时间及提取次数 4个因素对该工艺的影响 , 利用电位滴定法对其进行了测
定。结果表明 , 定心藤中总有机酸提取的最佳提取工艺为:乙醇含量 75%, 固液比 1∶10, 提取
时间 2.5h, 提取次数 3次;电位滴定法对其测定简单可行 , 精密度高 , 重现性好 , 为定心藤进一
步研究和资源开发利用提供一定的科学依据。
关键词:定心藤;有机酸;正交实验;电位滴定
中图分类号:R284.1∶R972.2　　文献标识码:A
定心藤(Mappianthusiodoies)为茶茱萸科(Icacinaceae)定心藤属(MappianthusHand. Mazz.)
植物 , 木质藤本 , 核果椭圆形 , 果肉薄而甜。定心藤的根或老藤有祛风活络 , 除湿消肿和消炎的
功效 , 并可治毒蛇咬伤及黄疸 , 为瑶医常用药材 “十八钻 ” 之一 [ 1 2] 。有文献报道 [ 3] , 有机酸
类成分是具有抗肿瘤 、抑菌 、 抗血栓 、抗艾滋病毒等广泛的生物活性 , 具有很大的研究和开发潜
力 。因此 , 本工作对定心藤中总有机酸进行提取和测定的研究 , 为进一步开发和利用定心藤资源
提供试验依据。
1　材料与方法
1.1　仪　器
B 220型恒温水浴锅 (上海亚荣生化仪器厂);雷磁 PHS 25型数显 pH计(上海盛磁仪器
有限公司);E 201 C型 pH复合电极(上海盛磁仪器有限公司);RE 52A型旋转蒸发器 (上
海亚荣生化仪器厂);JA1003N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司);HJ 1型磁力加热搅
拌器(郑州长城科工贸有限公司);电热恒温干燥箱(上海跃进医疗器材厂)。
1.2　试　剂
定心藤购于桂林市药材市场 , 经桂林三金药业集团钟小清工程师鉴定为茶茱萸科定心藤属植
物定心藤。药材粉碎后 , 60℃下干燥至恒质量 , 备用 。
乙醇 、 氢氧化钠 、氯化钾 、混合磷酸盐 、 邻苯二甲酸氢钾均为国产分析纯;没食子酸标准品
(中国药品生物制品检定所 , 批号:149 91 7);蒸馏水 。
收稿日期:2009 12 04
基金项目:湖南省科技厅资助项目(2008FJ3091)
作者简介:曾立(1978—), 男 , 硕士 , 助教 , 研究方向为天然产物的提取与分离。尹文清(1968—), 女 , 博士 , 现为广西
师范大学药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室教授 , 主要从事天然产物研究与开发工作。
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DOI :10.16755/j.cnki.issn.1006-446x.2010.02.010
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1.3　标准溶液的制备
精密称取没食子酸标准品 0.010 9 g, 用无水乙醇溶解 , 定容于 100mL容量瓶中 , 备用。
1.4　标准溶液滴定曲线的制备
用移液管准确吸取 20mL没食子酸标准品溶液于烧杯中 , 将烧杯放在滴定台上 , 插入 pH复
合电极 , 开动磁力搅拌器 , 按照 《中国药典 》 2005年版附录 Ⅶ A电位滴定法 [ 4] , 用 0.010 0
图 1　没食子酸标准液的滴定曲线
ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液滴定 。滴定时记录滴定过程
中用去的 NaOH体积及其相对应的电位变化
值 , 同时进行空白校正。以电位变化量(ΔE)
和体积变化量(ΔV)的比值为纵坐标 , 电位变
化前后所用去的 NaOH溶液的体积平均值
(V)为横坐标 , 曲线的极大值对应 NaOH体积
就是滴定终点 , 消耗的 NaOH体积为 3.80
mL, 与理论值相吻合 , 由公式(V碱 =2 C酸 ·
V酸 /C碱)计算消耗碱量为 3.79 mL, 曲线显示
滴定终点非常明显。
1.5　待测样品总有机酸的提取和测定
精密称取 10 g干燥至恒质量的定心藤粉末 , 按 “1.6” 项下的因素水平 , 于 80 ℃进行回流
提取。提取液过滤后定容到 250 mL的容量瓶中 , 分别精密吸取上述样品溶液各 20 mL, 按
“ 1.4” 项下操作 , 利用电位滴定法测定并计算定心藤中总有机酸的含量。根据下面公式计算定
心藤总有机酸的含量:
总有机酸含量 =CK(V-V0)/(m×20/250)×100%
式中:V为滴定样品消耗 NaOH标溶液体积;V0为空白消耗 NaOH的体积;C为 NaOH溶液含
量;K为换算成主要酸的系数(即 1mmolNaOH相当于主要酸的系数 , K=0.059);m为样品质
量 。
1.6　正交试验设计
目前 , 有机酸的提取方法主要有 3种 [ 5] , 即蒸馏水直接提取法 , 乙醇 旋转蒸发提取法 ,
乙氰 、 甲醇提取法。由于乙氰 、甲醇成本高且有毒性 , 因此较少使用 。为系统考察乙醇提取法的
工艺参数 , 参照文献 [ 6]报道 , 选用乙醇体积分数 、 固液比 、提取时间 、 提取次数作为考察因
素 , 以样品中总有机酸含量为考察指标 , 选用 L9(34)正交表设计 , 因素 、水平见表 1。
表 1　定心藤中有机酸提取工艺的因素水平表 单位:μg/g　　
序　号 因　素A溶剂体积分数 /% B固液比 C提取时间 /h D提取次数
1 55 1∶10 1.5 1
2 75 1∶15 2.0 2
3 95 1∶20 2.5 3
2　结果与讨论
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2.1　正交试验结果
见表 2、表 3。
表 2　定心藤中有机酸提取的正交试验结果 单位:μg/g　　
试验号 A B C D w(酸)/%
1 1 1 1 1 0.140
2 1 2 2 2 0.241
3 1 3 3 3 0.279
4 2 1 2 3 0.257
5 2 2 3 1 0.198
6 2 3 1 2 0.249
7 3 1 3 2 0.232
8 3 2 1 3 0.202
9 3 3 2 1 0.167
K1 0.220 0.210 0.197 0.168
K2 0.235 0.214 0.222 0.241
K3 0.200 0.232 0.236 0.246
R 0.035 0.022 0.039 0.078
表 3　定心藤中有机酸提取的方差分析
方差来源 自由度 平方和 S 均方 V F比 显著性 最佳水平
A 2 0.001 59 0.000 80 2.24 A2
B(误差) 2 0.000 71 0.000 36 B1
C 2 0.000 94 0.000 47 1.32 C3
D 2 0.011 26 0.005 63 15.86 ＊ D3
　　注:F0.10(2, 2)=9.00, F0.05(2, 2)=19.00。
由表 2实验结果分析可知 , 对定心藤中总有机酸提取的影响由大到小为 D, A, C, B, 即提
取次数 , 醇体积分数 , 提取时间 , 固液比 。另外从表 3方差分析可知 , B因素影响力最低 , 故列
为误差项处理 , D因素为显著因素 , 所以从节约成本的角度来考虑 , 最佳提取工艺条件为 A2B1
C3D3。即:固液比 1∶10, 75%的乙醇 , 每次 2.5h, 提取 3次 。
2.2　最佳提取工艺条件的验证
称取 10 g干燥定心藤粉末置于 250 mL烧瓶中 , 加入 100 mL75%乙醇水浴回流提取 3次 ,
每次 2.5 h, 合并过滤液 , 定容于 250mL容量瓶中 , 用电位滴定法测定 , 滴定曲线的极大值对应
NaOH体积就是滴定终点 , 消耗的 NaOH平均体积为 3.72 mL, 代入相关数据计算 , 得定心藤中
总有机酸的平均含量为 0.275%。
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2.3　方法学考察
2.3.1　精密度实验　称取 20 g干燥定心藤粉末 , 加入 200mL75%乙醇在 80 ℃水浴条件下进行
回流提取 3次 , 每次 2.5 h, 合并过滤液 , 定容于 500 mL容量瓶中 , 再用移液管准确吸取 20mL
供试品溶液按电位滴定法用 0.010 0mol/LNaOH溶液滴定。平行滴定 6次 , 记录每次滴定结果。
实验结果 RSD为 0.34%(n=6), 显示精密度良好 。
2.3.2　重现性实验　按 “2.2” 项下的方法制备供试品溶液 , 平行制备 6份 。滴定结果 RSD=
0.71%(n=6), 实验重现性好。
2.3.3　稳定性实验　取 “2.2” 项下制备的供试品溶液 , 分别于 0、 2、 4、 6、 8、 12、 24 h测
定 , 结果 24 h内稳定性较好 , RSD为 0.605%。
2.3.4　加样回收实验　精密称取定心藤粉末约 10 g, 平行 9份 , 按 “2.2” 项下的方法制备供试
品溶液 , 准确吸取 30mL样品溶液于 50mL的容量瓶中 , 分别加入 “1.3” 项下制备的没食子酸
对照品溶液(0.109 mg/mL)2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18 mL, 并定容至刻度 , 倒入烧杯
中 , 按电位滴定法进行滴定 , 确定滴定终点。结果见表 4。
表 4　定心藤中有机酸测定的加样回收实验结果
样品质量 /g 有机酸质量 /mg 没食子酸加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
9.951 27.43 0.218 27.65 100.9
10.003 27.47 0.436 27.91 100.9
9.912 27.41 0.654 28.06 99.4
10.031 27.48 0.872 28.35 99.8
10.015 27.46 1.090 28.55 100.0 100.2 1.35
9.992 27.43 1.308 28.74 100.2
10.005 27.47 1.568 29.02 99.1
10.003 27.47 1.792 29.30 102.3
10.005 27.47 2.016 29.55 103.1
3　讨　论
(1)酸碱滴定法常用于中药中总有机酸含量的测定 , 但是由于中药的水提液或醇提液常常
具有较深的颜色 , 指示剂的选择受到了限制 , 同时滴定终点指示不明显。本研究采用电位滴定法
是利用电位的变化来确定滴定终点 , 结果考察表明 , 电位滴定法测定定心藤中总有机酸 , 方法的
重现性 、精密度及稳定性都比较好 , 可操作性强。
(2)定心藤是瑶医常用药材 , 而有机酸类成分是其含有成分之一 , 目前尚无对其含量的报
道 。而近年来 , 随着天然产物化学和药理学研究不断深入及分析手段突飞猛进的发展 , 中药有机
酸类成分的研究引起了国内外很多学者的极大兴趣 。本实验对其有机酸定量的研究 , 可以对其质
量标准的建立提供方法上的参考 , 从而控制药材质量 、 保证临床疗效 , 为进一步开发定心藤资源
提供科学依据。
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参考文献:
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[ 5] 董圆圆 , 董彩霞 , 沈其荣 , 等.植物组织中有机酸的提取方法比较 [ J] .南京农业大学学报 , 2005, 28
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[ 6] 林丹 , 赵国玲 , 刘佳佳.金银花不同提取方法的绿原酸比较 [ J] .天然产物研究与开发 , 2003, 15 (2):
124 126.
DeterminationofTotalOrganicAcidsinMappianthus
iodoiesbyPotentialTitration
ZENGLi1, 2 , LOUHui3 , ZHOUXiaosi1 , YINWenqing2
(1.ShaoyangMedicalCollege, Shaoyang422000, China;
2.KeyLaboratoryfortheChemistryandMolecularEngineeringofMedicinalResources,
MinistryofEducationofChina, GuangxiNormalUniversity, GuangxiGuilin541004, China;
3.TheExperimentalSchoolofZhengtonginYuanjiang, Yiyang413100, China)
Abstract:TostudytheoptimumextractingprocessoftotalorganicacidsfromMappianthusiodoiesand
establishadeterminationmethodfortotalorganicacid, theefectsofconcentrationofethanol, ratioof
solidtoliquid, frequencyofextractionandtimeofextractionwereinvestigatedbyorthogonaldesignand
wasdeterminedwithpotentialtitration.Theresultsshowthatthebestextractionconditionsaretouse
φ=75% ethanolasextractorwiththeradioof1 ∶10 atthetemperatureof80 ℃ for2.5 h, and
extracting3 times.Thedeterminationmethodissimple, reproducibleandsuitable.Itconcludesthese
resultsprovidedcertainscientificbasisforfurthereficacyofresearchanddevelopmentofMappianthus
iodoies.
Keywords:potentialtitration;Mappianthusiodoies;organicacid;orthogonalexperiment
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