全 文 ：第 27卷　第 5期 西北农业大学学报 Vol. 27 No. 5
1999年 10月 Acta Univ. Ag ric. Bo reali-occidenta lis Oct. 1999
[文章编号 ]1000-2782( 1999) 05-0075-04
地锦草体外抑菌有效部位的筛选试验
宋晓平 ,王晶钰 ,李引乾 ,张为民 ,陈福星* ,高建军*
(西北农业大学动物科学与动物医学学院 ,陕西杨陵 712100)
　　 [摘　要 ]　采用水煎、水醇和五部位提取法从地锦草中提得组成成分不同的 7种提取
物 ,以肠道致病性大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1 ,金黄色葡萄球菌为目的菌株进行体外抑
菌试验。 结果表明 ,水煎提取物对大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1 ,金黄色葡萄球菌的最小
抑菌质量浓度分别为 10, 10, 12. 5 g /L;水醇提取物对上述试验菌的最小抑菌质量浓度依次
为 5, 7. 5, 10 g / L;五部位法所得 5种提取物的抑菌浓度均大于 15 g /L.
[关键词 ]　地锦草 ;体外抑菌 ;有效部位
[中图分类号 ]　 S853. 74　　　 [文献标识码 ]　 A
地锦草 ( Euphorbia humifusa Wild)属大戟科大戟属植物 ,有铺地锦、血见愁、草血竭、
花被单、奶汁草等 40多个别名 ,生于田间路旁和庭院 ,全国各地均有分布。地锦草属清热
解毒类中药 ,具有清热解毒、活血止血、利湿通乳之功效 ,常用于治疗泻痢、痈肿疔疮、出
血、湿热黄疸和乳汁不通等病证 [1, 2 ] ,其成分主要有黄酮、有机酸、甾醇、萜和单宁类化合
物 [3 ]。关于地锦草的抑菌有效部位尚未见报道。本试验旨在通过对地锦草体外抑菌有效部
位的筛选 ,为地锦草制剂的进一步研制及其在兽医临床上的应用提供试验依据。
1　试验材料
地锦草　 1997年 9月采集于陕西省周至县境内 ,去根 ,晒干 ,粉碎后备用。
试验菌株　大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1 ,金黄色葡萄球菌 ,由西北农业大学流
行病教研组提供。
2　试验方法
2. 1　地锦草提取物的制备
2. 1. 1　水煎提取物和水醇提取物的制备　地锦草 100 g ,加水适量煎提 2次 (分别 60
min, 40 min) ,合并 2次煎提液。其中 1 /2浓缩成浸膏 ,即为水煎提取物 ( A) ;其余 1 /2浓
缩至小体积 ,加 2倍量无水乙醇 , 4℃冰箱内静置 24 h ,滤除沉淀 ,回收乙醇 ,浓缩成浸膏 ,
即为水醇提取物 ( B)。
2. 1. 2　五部位提取物的制备　地锦草粉 ( 40目 ) 200 g ,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、
正丁醇和水进行水浴回流提取 ,每种溶剂提取 3次 ,每次 3 h,分别合并分次提取液 ,减压
[收稿日期 ]　 1998-09-21
[基金项目 ]　西北农业大学中兽医药研究所资助项目
[作者简介 ]　宋晓平 ( 1963- ) ,男 , ,副教授 ,在读博士 ; * 本校九八届本科毕业生
回收溶剂 ,即得 5种不同溶剂提取物 ,依次为提取物 C, D, E, F, G.
2. 2　地锦草提取物的体外抑菌试验
2. 2. 1　菌液制备　将大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌分别接种于普通灭菌肉汤或血清肉
汤中 , 37℃恒温培养 18～ 24 h,用生理盐水稀释 ,调其含菌量在 1. 0× 105 CFU /mL.
2. 2. 2　纸片法和挖洞法抑菌试验　上述 7种地锦草提取物 A～ G各 0. 50 g ,分别用原提
取溶剂配成质量浓度为 500 g /L的供试药液 ,将 120℃干热灭菌 2 h的圆形滤纸片 (直径
6 mm)置供试液中浸泡 2 h ,取出挥干溶剂。于备好的普通琼脂平板表面平涂一层试验菌
液 ,用无菌小镊子将药纸片轻置其上 ,并进行同浓度的挖洞法抑菌试验 ,每洞滴加 0. 1 mL
供试药液 , 37℃恒温培养 24 h,观察结果 ,如此重复 1次 ,取其平均值。
2. 2. 3　地锦草提取物最低抑菌浓度测定　①平皿倾注法抑菌试验。地锦草提取物 A～ G
分别用原溶剂溶解 ,加至营养琼脂培养基中配成 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 g /L的不同质量
浓度 (按原生药量计算 ) , 1. 1 kg /cm2蒸汽压灭菌 20 min后倒板 ,分别接种大肠杆菌 O78
∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1 ,金黄色葡萄球菌菌液 0. 1 m L,用 L型灭菌玻璃棒涂均匀 , 37℃恒温
培养 24 h,观察结果 ,如此重复 1次 ,取其平均值。②试管法抑菌试验。提取物 A～ G,分别
用原提取溶剂溶解 ,依次配成 125, 125, 500, 500, 500, 250, 500 g /L的 7种不同质量浓度
的试验药液 ,采用试管法测定抑菌力 ,方法参见表 1.
表 1　试管法最低抑菌浓度 ( M IC)的测定方法 m L
试样 管　号
1 2 3 4 5 6 7
肉汤 4. 8 4. 6 4. 4 4. 2 4. 0 5. 0 5. 0
药液 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0 - -
菌液 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 0. 1 -
　　判断时 ,凡稀释管中无细菌生长者 ,其最高稀释倍数即为药液对细菌的抑菌效价 ,如
药液颜色深 ,肉眼不易判定有无细菌生长者 ,则取一铂珥环接种于营养琼脂平板 , 37℃培
养 18～ 24 h后观察 ,若无细菌生长 ,则该稀释度即为药物的抑菌效价。
3　结　果
3. 1　纸片法和挖洞法抑菌试验
　　纸片法和挖洞法抑菌试验结果表明:地锦草提取物 A, B, G对 O78∶ K80 ,沙门氏菌
C79-1 ,金黄色葡萄球菌有一定的抑菌作用 ,提取物 C, D, E, F抑菌圈直径小于 10 mm ,抑菌
效果不明显 (表 2)。
表 2　提取物 A～ G纸片法 (挖洞法 )抑菌圈直径 mm
菌　株 A B C D E F G
大肠杆菌 11( 12) 11( 13) 6( 8) 6( 8) 8( 10) 8( 10) 12( 13)
沙门氏菌 12( 12) 13( 14) 7( 8) 6( 7) 8( 9) 7( 8) 10( 12)
葡萄球菌 10( 15) 12( 15) 6( 9) 6( 8) 8( 10) 8( 9) 10( 10)
　　注:括号内数字为挖洞法试验结果。
3. 2　地锦草提取物最低抑菌浓度测定
地锦草提取物平皿倾注法和试管法抑菌试验结果表明 ,水煎提取物 A和水醇提取物
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B具有明显的抑菌作用 ,对大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1和金黄色葡萄球菌的抑菌质
量浓度小于 12. 5 g /L,而五部位提取物 C, D, E, F, G抑菌质量浓度大于 15 g /L,抑菌效
果不明显 (表 3,表 4)。
表 3　地锦草各提取物平皿倾注法最小抑菌质量浓度 g /L
菌　株 A B C D E F G
大肠杆菌 10 5 > 50 > 50 > 50 > 15 > 40
沙门氏菌 10 10 > 50 > 50 > 50 15 40
葡萄球菌 20 20 > 50 > 50 > 50 15 > 40
表 4　地锦草各提取物试管法最小抑菌质量浓度 g /L
菌　株 A B C D E F G
大肠杆菌 10 5 > 50 > 50 50 25 > 50
沙门氏菌 10 7. 5 > 50 > 50 40 > 25 50
葡萄球菌 12. 5 10 > 50 > 50 50 > 25 > 50
4　讨　论
1)中草药的抑菌药敏等级目前尚无统一标准 ,参照抗生素的相应药敏标准可分为高
敏、中敏、轻敏或耐药 4级 [4 ] ,即抑菌环直径大于 20 mm为高敏 , 10～ 20 mm为中敏 ,小于
10 mm为耐药。 本试验结果表明 ,地锦草提取物 A, B, G,无论对革兰氏阴性的大肠杆菌
O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1 ,还是革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌 ,抑菌效果都达到了中敏 ,这
与中医药认为地锦草具有清热解毒功能 ,以及地锦草治疗菌痢、肠炎和腹泻等肠道疾病的
治愈率达 94% ～ 97%的临床报道 [5, 6 ]基本吻合。
2)本试验中水煎提取物 A对大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙门氏菌 C79-1和金黄色葡萄球菌的
体外最低抑菌质量浓度分别为 10, 10, 12. 5 g /L;水醇提取物 B对上述试验菌的最低抑菌
质量浓度分别为 5, 7. 5, 10 g /L,说明地锦草水煎液经乙醇沉淀鞣质、蛋白质和多糖等成
分后的抑菌效果与水煎提取物比较 ,抑菌效果略有增强 ,这对进一步制备地锦草片剂和针
剂具有理论指导意义。
3)中草药有效部位的筛选 ,多根据化合物结构“相似相溶”的原理 ,采用极性由弱渐强
的不同溶剂系统提取 ,极性不同的成分则分散在不同的溶剂中 ,通过活性试验筛选出有效
部位 ,可为进一步成分分离或制剂研制提供依据。本试验以致病性大肠杆菌 O78∶ K80 ,沙
门氏菌 C79-1和金黄色葡萄球菌作为目的菌株 ,用于筛选地锦草有效抑菌部位 ,结果表明 ,
水煎提取物 A和水醇提取物 B的抑菌作用明显优于五部位提取物 C, D, E, F, G,这可能
是中草药化学成分间组合效应的又一例证。中草药化学成分复杂 ,功能多样 ,从原植物中
所提取的单一成分有时不及原植物中各种成分的组合 ,如孙静芸对麻黄的成分进行研究
后指出 ,用麻黄比单用麻黄碱的止咳平喘效果更好 ,副作用更低 [7 ] ,关于地锦草各部位提
取物间的组合效应正在进一步研究中。
致谢: 试验过程中 ,曾得到岳治权教授及王虹老师的热心指导和帮助 ,特此谢忱。
77第 5期 宋晓平等:地锦草体外抑菌有效部位的筛选试验
[参考文献 ]
[1 ]　全国中草药汇编编写组 .全国中草药汇编 [M ] .北京:人民卫生出版社 , 1975. 346～ 347.
[2 ]　江苏新医学院 .中药大辞典 [M ] .上海:上海人民出版社 , 1977. 1656, 827～ 829.
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[6 ]　邹春良 .地锦草与芍药汤加减治疗急性菌痢的功效对比 [ J].江西中医药 , 1992, 23( 2): 60.
[7 ]　郭士宁 ,张克家 .中兽医方剂的组合效应 [ J] .中兽医杂志 , 1996( 18): 43～ 44.
Selection of bacteriostasis positions of
Euphorbia hum if usa wild in vitro
SONG Xiao-ping, WANG Jing-yu, LI Yin-qian
ZHANG Wei-min, CHEN Fu-xing,GAO Jian- jun
(College of Anima l S cience and Veter inary Med icine, Northwestern
A gricultural Universi ty ,Yang lin g , Shaanx i 712100,Ch ina )
Abstract: Sev en kinds of ex tract w ere obtained from Euphorbia humifusa Wild by
w ater decoction, wa ter ethanol and fiv e po si tio n methods, and w ere conducted
bacteriostasis test wi th intestine pathogenic Colon bacillus O78 ∶ K80 , Salmonella
Pul lorum C79-1 , s taphylococcus aureus fo r targ et bacteria in v itro. The resul ts indicated
that the minimum concentration o f bacteriostasis o f wa ter decoction ex t ract for Co lon
bacillus O78∶ K80 , Salmonella Pullorum C79-1 staphylococcus aureus w as 10, 10, 12. 5 g /L
crude drug , respectiv ely. The minimum concentra tion of bacteriosta sis o f w ater ethano l
ex t ract on abiv e-nebtuibed test bacteria w as 5, 7. 5, 10 g /L crude drug , successively. The
concentra tion of bacterio stasis of fiv e kinds of ex tract which obtained by fiv e position
method w as higher than 15 g /L crude drug.
Key Words: Euphorbia hum ifusa wild; bacterio stasis in vit ro; ef fective posi tio n
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