全 文 ：第27卷 第5期 浙 江 林 业 科 技 Vol. 27 No.5
2 0 0 7年 9月 JOUR. OF ZHEJIANG FOR. SCI. & TECH. Sep., 2 0 0 7

文章编号：1001-3776（2007）05-0054-03

TDZ在天师栗愈伤组织诱导中的应用

张前勇，蔡慧敏，周毅峰*
（湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北 恩施 445000）

摘要：在离体条件下，利用含有 TDZ和 2,4-D的培养基通过暗培养和光照培养进行了天师栗愈伤组织诱导条件的研
究，结果表明：①在含有 TDZ和 2,4-D培养基上，取用天师栗的幼嫩叶片比叶柄诱导愈伤组织的褐变率低 12.1%，
②利用天师栗幼嫩叶片进行诱导愈伤组织的适宜培养基为MS＋2,4-D 0.5 ~ 1.5 mg/L＋TDZ 0.05 ~ 1.0 mg/L。
关键词：TDZ；天师栗；愈伤组织
中国分类号：S792.17 文献标识码：C

天师栗（Aesculus wilsonii）为七叶树科七叶树属植物[1]，分布于我国云南、贵州、四川、广东、湖南、
江西、河南、湖北等地[2]。果实或种子可入药，称为“婆罗子”，其性味甘温，有宽中理气、止痛、杀虫之
效，可治疗蛔虫、腹痛、心绞痛、胸腔胀痛、痢疾等症。从娑罗子中分离出来的一种重要组分七叶皂苷，具
有抗炎作用、消肿胀作用、促皮质甾酮作用、抗渗出作用[2]、促进脑功能恢复、肺心病、治疗 Hunt’s综合症、
抗肿瘤作用等[3~6]。
目前，国内对天师栗的繁殖仅限于种子繁殖，但该种子属顽拗型种子，不耐失水和低温，自然风干 10 d就
会因失水丧失发芽力[2]；结实大小年现象明显；淀粉含量高达 38%，容易霉烂、遭鼠害等。为了克服天师栗种
子来源不足，解决种苗供不应求的问题，笔者利用 TDZ〔Thidiazuron，Schering公司 1976年合成的新型植物生
长调节剂，化学名为 N-苯基-N’-1,2,3-噻二唑（N-phenyl-N’-1,2,3-thiadiazol-5-ylurea），中文简称噻重氮苯基脲[7]〕，
进行天师栗愈伤组织形成条件的研究，为天师栗的快速繁殖研究准备条件。
1 材料与方法
1.1 试验材料
采自湖北民族学院苗圃的天师栗幼嫩叶片及叶柄。
1.2 培养基配方
1.2.1 基础培养基 MS培养基。
1.2.2 激素配方 培养基的激素配方：通过调整 2,4-D 和 TDZ 两个因素的浓度，由此组合构成一项有 12 个处
理的实验（如表 1）。
表 1 不同质量浓度生长调节剂组合的培养基配方
mg·L－1
培养基编号 TDZ 2,4-D 培养基编号 TDZ 2,4-D 培养基编号 TDZ 2,4-D
A 0.1 1.00 E 0.1 0.05 I 0.1 0.50
B 0.5 1.00 F 0.5 0.05 J 0.5 0.50
C 1.5 1.00 G 1.5 0.05 K 1.5 0.50
D 1.0 1.00 H 1.0 0.05 L 1.0 0.50

收稿日期：2007-06-21；修回日期：2007-08-19
基金项目：湖北省教育厅项目（2003J002）
作者简介：张前勇（1958－），男，湖北来凤人，教授，从事林木资源研究；*通讯作者。

5期 张前勇，等：TDZ在天师栗愈伤组织诱导中的应用 55

1.3 愈伤组织的诱导
将采集的天师栗嫩叶用自来水冲洗 2 h后，用 75%乙醇浸泡 15 s，0.1% HgCl2中浸泡 3 min；叶柄在 75%的
乙醇中浸泡 30 s，0.1% HgCl2中浸泡 10 min。无菌水冲洗 5 ~ 6次，用无菌滤纸吸干表面水分。剪去叶片边缘部
分，剪成 5 mm×10 mm的小方块，并在叶片的中脉横切 3刀，然后将叶背朝下置于诱导培养基上。将叶柄切成
1 cm的小段，分平铺和竖插两种方式接入培养基中。每种培养基中接 4片叶，2枚叶柄。每种培养基平行做 5
瓶。在 25℃的黑暗条件下培养，促使愈伤组织发生和增殖。
1.4 愈伤组织生长情况的测定
暗培养 14 d后，对各种配方中所形成的愈伤组织进行转接。转接前，对愈伤组织进行称重。继续暗培养 10d
后，再次对愈伤组织称重，计算出各培养基中愈伤组织的生长量。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织的形成及生长情况
叶片接种于诱导培养基，暗培养 7 d后，整个叶片逐渐膨大，叶片的边缘及切口处出现褶皱。10d后，在叶
脉和切口处开始产生愈伤组织。至 14 d时，叶片全部形成愈伤组织。对其进行愈伤组织生长量测定实验（表 2），
发现在不同浓度 TDZ和 2,4-D的培养基中，愈伤组织生长状况表现出差异。其中 F和 G号培养基形成愈伤组织
生长情况良好且褐化现象较少，F 号内形成的愈伤组织大多为绿色，较适合诱导分化，G 号内形成的愈伤组织
大多为白色，且组织生长紧密；K和 L号培养基生长良好，但褐化严重；B号培养基褐化最严重，培养 25 d时，
褐化率达到 90%以上。
表 2 不同培养基对愈伤组织生长量的影响（培养 21d时）
培养基编号 接种个数 愈伤组织个数 褐化个数 诱导率/% 褐化率/% 生长率/g·g－1
A 30 29 1 96.6 3.3 1.847 1
B 30 25 5 83.3 16.7 1.760 4
C 30 30 0 100.0 0.0 1.833 6
D 30 28 0 93.3 0.0 1.045 2
E 30 26 0 86.6 0.0 1.330 8
F 30 30 0 100.0 0.0 1.800 8
G 30 30 0 100.0 0.0 2.010 5
H 30 28 2 93.3 6.7 1.478 4
I 30 30 0 100.0 0.0 1.683 3
J 30 26 0 86.6 0.0 1.556 3
K 30 27 3 90.0 10.0 1.978 2
L 30 29 1 96.6 3.3 1.855 8
2.2 取材部位
在培养过程中发现，叶柄和叶片分别在暗培养 5 d和 7 d后，
开始膨胀，在 7 d和 10 d后，开始产生明显可见愈伤组织。较叶
片而言，叶柄形成愈伤组织快且大，但较易褐化，褐化率比叶片
高出 12.1%（表 3）。
3 讨论
在天师栗愈伤组织的诱导中，相对于叶柄而言，叶片形成的愈伤组织较不易褐化，且切口处受到外源激素
的刺激，能够迅速形成愈伤组织。在外植体接种时，采用平铺方式接入培养基可缓解天师栗褐化情况严重的现
象。
愈伤组织的诱导是天师栗组织培养的第一步，这方面的前人研究报道，诱导率普遍偏低。本试验在前人的
试验基础上，筛选出了提高天师栗愈伤组织诱导频率的 TDZ 和 2,4-D 浓度组合，TDZ 的适宜浓度为 0.5 ~ 1.5
mg/L，2,4-D的适宜浓度是 0.05 ~ 1.0 mg/L。
表 3 不同取材部位对褐化的影响（培养 21d 时）
接种部位 接种个数 褐化个数 褐化率/%
叶柄 120 26 21.7
叶片 240 23 9.6

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参考文献：
[1] 颜昌敬. 植物组织培养手册[M]. 上海：上海科技出版社，1999.
[2] 费学谦，丁明，周志春，等. 七叶树属种和种群的遗传多样性及遗传分化研究[J]. 江西农业大学学报，2005（2）：166－171.
[3] 郭志义，尹浩军. β-七叶皂苷钠治疗格巴综合征 21例[J]. 医药导报，2001，20（2）：104.
[4] 范勇. 治疗肺心病急性发作 34例观察[J]. 医药导报，1996，15（2）：.
[5] 董淑婷，冯建书. β-七叶皂甙钠抗涌出消肿胀 32例[J]. 医药导报，1999，18（4）：265.
[6] 岳红梅，岳增为. β-七叶皂苷钠辅助治疗 Hunt’s综合征 6例[J]. 西北药学杂志，2000，15（1）：20.
[7] 秦静远. TDZ在植物组织培养中的应用[J]. 杨凌职业技术学院学报，2005，4（2）：19－22.

Application of TDZ on Callus Induction of Aesculus wilsonii

ZHANG Qian-yong，CAI Hui-min，ZHOU Yi-feng
（Hubei Institute for Nationalities Biological Science and Technology Institute, Enshi 445000, China）

Abstract: Study on induction condition of Aesculus wilsonii callus was carried out in vitro with dark and light culture
by use of the medium containing TDZ and 2,4-D. The results indicated that the rate of brown stain of callus from young
blade was lower by 12.1% than that from leaf stalk. The better medium for callus induction with blade was MS＋
2,4-D0.5~1.5mg/L＋TDZ 0.05 ~ 1.0mg/L.
Key words: TDZ; Aesculus wilsoni; callus

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信息

《浙江省实施〈中华人民共和国种子法〉办法》9月 1日起实施

《浙江省实施〈中华人民共和国种子法〉办法》（以下简称《实施办法》）已由省人民政府第 98次常务会
议审议通过，并予以公布，自 2007年 9月 1日起施行。
《实施办法》是浙江省第一部全面系统的《中华人民共和国种子法》（以下简称《种子法》）地方配套法
规，是全省贯彻实施《种子法》的重要体现，也是依法治林的重要内容。《实施办法》的颁布实施，对规范浙
江省的种子生产、经营、使用行为，保护品种选育者和种子生产者、经营者、使用者的合法权益，提高林木种
子质量，维护社会主义市场经济秩序，促进林业种苗产业健康发展具有重大意义。
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