全 文 ：中国药物与临床 2013 年 9 月第 13 卷第 9 期 Chinese Remedies & Clinics，September 2013,Vol.13,No.9
地锦草为大戟科植物地锦的干燥全草，主要含槲皮素苷
及素、山奈素苷及素、地锦草素等黄酮类化合物 ［1］，具有清热
解毒、凉血止血等功效，主要用于治疗各种皮肤病、瘙痒、痢
疾、肠炎、咯血、吐血、便血、崩漏、外伤出血、湿热黄疸、乳汁
不通、痈肿疔疮及跌打肿痛等疾病。 为了进一步研究地锦草
有效成分，探索其总黄酮提取最适条件，以总黄酮含量为考
察指标，采用正交试验设计方法对地锦草总黄酮提取纯化工
艺进行了优化。
1 仪器与试剂
地锦草药材（河南新乡）；芦丁对照品（中国药品生物制
品检定所， 批号：100080-200707）；Tu-1901 型双光束紫外分
光光度计 （上海元析仪器有限公司）；DZF-6020 真空干燥箱
（西安太康生物仪器科技有限公司）；FA1004 电子分析天平
（上海光学仪器厂）；乙醇、Al（NO3）3、NaOH 与 NaNO2 均为分
析纯试剂。
2 方法与结果
2．1 地锦草总黄酮含量测定方法学建立
2．1．1 对照品溶液制备： 精密称取在 120 ℃减压干燥至恒
重的芦丁对照品 ［2］10．0 mg， 加甲醇溶解，转入 50 ml 容量瓶
并稀释至刻度，摇匀，即为对照品液（0．2 mg/ml）。
2．1．2 样品溶液制备：称取地锦草生药 5 g，加 50％乙醇 50
ml， 水浴回流 2 h，过滤并收集滤液；再向残渣中加入 50％乙
醇 50 ml，相同条件下水浴回流 1 h，过滤，合并 2 次滤液并定
容至 80 ml，备用。
2．1．3 最大吸收波长及稳定性考察：精密量取芦丁对照品液
和样品液各 5．0 ml，分别置 25 ml 容量瓶中，加 5％ NaNO2液
1．0 ml、10％ Al（NO3）3试液 1．0 ml，4．3％ NaOH 试液 10 ml，加
水至刻度，摇匀放置，以相应试剂作空白，以紫外分光光度计
进行全波长扫描，最大吸收波长为 500 nm。
2．1．4 标准曲线的制备：精密吸取上述对照品溶液液 0、1．0、
2．0、3．0、4．0、5．0、6．0 ml， 分别置 25 ml 容量瓶中 ， 加 5％
NaNO2试液 1．0 ml、10％ Al（NO3）3试液 1．0 ml 及 4．3％ NaOH
试液 10 ml，加水至刻度，摇匀放置，以相应试剂作空白。 在上
述吸光度条件下，以浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，
进行线性回归。回归方程为 Y＝9．725 9X-0．033 4，R2＝0．999 9。
结果表明对照品溶液在 0．10～0．60 mg 范围内线性关系良好。
2．1．5 显色稳定的考察：取上述浓度的芦丁对照品 5 ml 放入
25 ml容量瓶中，依次加入 5％ NaNO2试液 1．0 ml、10％ Al（NO3）3
试液 1．0 ml 及 4．3％ NaOH 试液 10 ml 显色， 加蒸馏水至刻
度。分别在 15、30、60、90、120、180 min 时测其吸光度，结果表
明，显色在 2 h 内稳定性好。
2．1．6 方法重现性考察：配置 6 份相同浓度的芦丁对照品溶
液， 分别取 3 ml 放入 25 ml 容量瓶中， 依次加入 5％ NaNO2
试液 1．0 ml、10％ Al （NO3）3试液 1．0 ml 及 4．3％ NaOH 试液
10 ml，显色 15 min，分别用蒸馏水稀释至刻度，测吸光度值，
得地锦草总黄酮含量为 0．344，相对标准偏差（RSD）为 0．4%。
结果表明此方法测地锦草总黄酮含量有较好的重现性。
2．1．7 回收率实验：取一定量的样品放入 25 ml 的容量瓶中，
加水溶解并定容， 分别取 2 ml 放入 9 个 25 ml 的容量瓶，标
号 1、2、3、4、5、6、7、8、9。 取芦丁纯品 1 mg 放入 100 ml 的容
量瓶中，定容，分别取纯品溶液 1．0、1．0、1．0、2．0、2．0、2．0、3．0、
3．0、3．0 ml 放入 1、2、3、4、5、6、7、8、9 号容量瓶中，按“标准曲
线制备”项下加显色剂显色，测吸光度并按以下公式计算回
收率， 回收率＝（加入纯品后的测定量-加入前的测定量）/纯
品加入量×100％，低浓度组回收率为 98．6％，RSD 为 1．3％；中
浓度组为 99．5％，RSD 为 1．1％； 高浓度组为 99．3％，RSD 为
1．5％。
2．2 地锦草总黄酮的提取方法工艺考察
2．2．1 提取工艺研究：称取地锦草生药，按正交试验设计方
案用数倍量不同浓度乙醇煎煮数次，每次数小时，过滤，合并
滤液，以有效成分总黄酮含量为指标，进行含量测定［3］。
2．2．2 正交实验设计：选用乙醇浓度、提取时间、提取溶剂加
倍量及提取次 4 因素，每个因素选择 3 个水平，以确定最佳
工艺条件［4，5］。 用 L9（34）正交表进行实验设计，结果见表 1，2。
从表 1，2 可以看出：RD＞RC＞RB＞RA，即影响总黄酮提取工
艺因素大小顺序为 D＞C＞B＞A，主要影响因素为提取次数，其
次是溶剂加倍量，乙醇的浓度和提取时间影响最小。 由分析
结果可知以总黄酮为考察指标，最佳提取工艺为 A2、B2、C1、
·药物研究·
地锦草总黄酮提取纯化工艺的优化
卢宏丽 卢宏霞
DOI：10.11655/zgywylc2013.09.013
作者单位：030013 太原，山西省肿瘤医院药学部（卢宏丽），消化
二科（卢宏霞）
通信作者：卢宏霞
表 1 乙醇提取工艺的正交实验设计
水平
乙醇浓度
（A）（％）
提取时间
（B）（h）
溶剂加倍量
（C）
提取次数
（D）
1 60 1.0 6 1
2 75 1.5 8 2
3 90 2.0 10 3
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中国药物与临床 2013 年 9 月第 13 卷第 9 期 Chinese Remedies & Clinics，September 2013,Vol.13,No.9
盐酸西替利嗪是羟嗪在人体内的活性代谢产物，可选择
性拮抗 H1 受体，抗过敏作用强，无中枢镇静作用，作用时间
长，每天只需服用 1 次，临床常用于治疗季节性鼻炎、眼结膜
炎、长期性过敏性鼻炎、瘙痒以及过敏引起的荨麻疹，疗效肯
定［1］。目前大多采用高效液相色谱法（HPLC）测定人血浆中的
盐酸西替利嗪浓度［2，3］，有报道采用气相色谱（GS）、液相色谱-
串联质谱（LC-MS/MS）测定 ［4，5］，大多评价普通片剂、胶囊、口
腔速崩片等的生物等效性 ［6-8］，目前还未见盐酸西替利嗪滴剂
在健康人体的生物等效性研究的报道。 本试验旨在建立一种
简单、 灵敏和快速的 HPLC 法测定 20 名中国健康试验者口
服盐酸西替利嗪滴剂或片剂后血浆中西替利嗪的浓度，计算
药动学参数和相对生物利用度， 评价 2 种制剂的生物等效
性。
1 仪器与试药
HP1100 系列 HPLC（美国安捷伦科技公司）；AE200 电子
分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；TGL-16G 台式
离心机（上海安亭科学仪器厂）；HY-4 多用调速振荡器（江苏
金坛市医用仪器厂）；GL-88B 旋涡混合器 （江苏海门麒麟医
用仪器厂）。
试验制剂：盐酸西替利嗪滴剂（成都民意制药有限责任
公司，规格：10 ml∶100 mg，批号：20111013）；参比制剂：盐酸
西替利嗪片剂（鲁南贝特制药有限公司，规格：10 mg，批号：
20110915）； 盐酸西替利嗪对照品由成都民意制药有限责任
公司提供，含量：99．7％；盐酸普萘洛尔对照品由中国药品生
物制品检定所提供，含量 99．8％；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠、
乙酸乙酯等为分析纯；水为双重蒸馏水；空白血浆由中南大
学湘雅二医院血液科提供。
盐酸西替利嗪滴剂在健康人体的生物等效性
刘湘豫 李健和 易利丹 胡 焰 赵子影 彭六保
D3，即用 6 倍量的 75％乙醇回流提取 1．5 h，共提取 3 次。
2.3 验证实验
以上述正交实验结果确定的提取工艺为依据，分别按照
此最佳提取工艺， 根据处方比例称取中药材， 用 6 倍量的
75％乙醇回流提取 1．5 h，共提取 3 次。平行 3 次实验，结果见
表 3。
3 讨 论
实验结果表明，乙醇提取工艺对地锦草总黄酮含量的主
要影响因素为提取次数，其次是溶剂加倍量。 为考察提取次
数对提取率的影响。取适量药材，按最佳提取工艺重复提取 3
次，以总黄酮为参考指标，提取次数越多，提取率就越高，但
第 3 次后的总黄酮的吸光度几乎为零，提取率很小，增加提
取次数意义不大，因此确定 3 次为最佳提取次数。 上述提取
分离方法简单可行，为地锦草进一步研究应用打下了基础。
参 考 文 献
［1］ 柳润辉，孔令义． 地锦草脂溶性成分研究 ．天然产物研究与开
发，2005，17（4）：437．
［2］ 朱英，孙腹娣，毛桦．地锦草总黄酮的超声提取工艺研究 ．中国
中医药科技，2006，13（6）：413．
［3］ 王淑萍，乌垠，孟祥颖，等． 地锦草总黄酮最佳提取分离工艺的
研究． 分子科学学报，2007，23（3）：181．
［4］ 李肖玲，崔岚，祝德秋．正交试验法优选地锦草的提取工艺 .中
国中医药信息杂志，2005，12（4）：54-55．
［5］ 杜海红． 地锦草分散片的研制及其稳定性考察.太原：山西医科
大学， 2007．
（收稿日期：2013-04-26）
表 2 总黄酮正交试验结果
实验号 A B C D 总黄酮含量（％）
1 1 1 1 1 2．671
2 1 2 2 2 2．889
3 1 3 3 3 3．035
4 1 1 2 3 3．222
5 2 2 3 1 2．539
6 2 3 1 2 3．017
7 2 1 3 2 2．610
8 3 2 1 3 3．420
9 3 3 2 1 2．639
K1 2．865 2．835 3．035 2．617 G＝2．604 3
K2 2．923 2．952 2．919 3．110
K3 2．888 2．894 2．726 3．227
R 0．006 0．012 0．310 0．610
优水平 A2 B2 C1 D3
表 3 验证实验结果
批次 总黄酮（mg） 平均（mg） RSD（％）
1 3．12
2 3．34 3．22 1．35
3 3．22
DOI：10.11655/zgywylc2013.09.014
作者单位：425000 湖南省永州市第三人民医院药剂科 （刘湘
豫）；中南大学湘雅二医院药学部（李健和、易利丹、彭六保）；中南大
学药学院（胡焰、赵子影）
通信作者：李健和，Email：lijianhexy＠126．com
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