全 文 ：收稿日期:2013-12-03; 修订日期:2014-05-06
基金项目:国家自然科学基金(No． 21271089) ;
黑龙江省卫生厅科研项目(2013 － 223)
作者简介:宋琳琳(1982-) ，女(汉族) ，黑龙江佳木斯人，佳木斯大学药学
院讲师，硕士研究生，主要从事天然药物研究与开发工作．
* 通讯作者简介:沙靖全(1975-) ，男(汉族) ，山东威海人，佳木斯大学药
学院副教授，博士研究生，主要从事无机药物化学与配位药物化学研究工
作．
余甘子提取物对大鼠佐剂性关节炎的干预作用
宋琳琳，沙靖全* ，赵 宏，刘凤华
(佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)
摘要:目的 探讨余甘子提取物的醇溶超声提取的最佳条件，及其对大鼠佐剂性关节炎的干预作用。方法 以余甘子为原
料选择最佳提取条件通过醇溶超声方法提取余甘子总黄酮，并测定其含量;建立大鼠佐剂性关节炎模型并于给药 21d后
以大鼠血清中 TNF － α、IL － 6 含量和 PGE2 含量、血液常规检测及血液沉降率、类风湿因子等生理生化指标的变化，对余
甘子总黄酮干预关节炎疾病的药效学进行研究。结果 经提取后得余甘子总黄酮 5． 56g，通过计算得总黄酮含量为 59．
07%，与模型组相比，余甘子黄酮高剂量组中 TNF － α的含量显著降低，余甘子黄酮高、低剂量组血清中 IL － 6 和 PGE2 含
量显著降低。结论 余甘子总黄酮对大鼠佐剂性关节炎有一定的干预作用。
关键词:余甘子; 黄酮; 佐剂性关节炎 弗氏完全佐剂
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 11． 006
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2014)11-2580-02
Intervention effects of Phyllanthi Fructus extract on adjuvant arthritis rats
SONG Lin-lin，SHA Jing-quan* ，ZHAO Hong，LIU Feng-hua
(School of Pharmacological Sciences，Jiamusi University，Heilongjiang 154007，China)
Abstract:Objective To explore the best condition of gliadin of ultrasonic extraction of the Phyllanthi Fructus extract and its in-
tervention effect of adjuvant arthritis of rats． Methods With the Phyllanthi Fructus as raw material to choose the best extraction
conditions by gliadin ultrasound method． and determination of its content． After treated the model rats for 21 days collected the
blood of all rats to measure the level of TNF － α，IL － 6 and the blood sedimentation rate，rheumatoid factor，The Phyllanthi Fruc-
tus flavone of flavone intervention rheumatoid arthritis disease were studied． Ｒesults After ultrasonic extraction of the Phyllanthi
Fructus was more than the basic flavonoids 5． 56g，through the regression equation to flavonoids content is 59． 07% ． Compared with
the model group，the Phyllanthi Fructus flavone content of TNF － α in high dose group decreased significantly，the residual and the
Phyllanthi Fructus flavone high and low dose group of serum IL － 6 and PGE2 levels in the inflammatory tissue decreased signifi-
cantly． Conclusion Phyllanthi Fructus flavone has a certain intervention effect of adjuvant arthritis of rats．
Key words:Phyllanthi Fructus; Flavone; Adjuvant arthritis; Freund＇s complete adjuvant
余甘子又名山油柑、油甘子、余甘果等，为大戟科叶下珠属植
物余甘子 Phyllanthus emblica L．的干燥成熟果实［1］。在民间，余
甘子常用于治疗胆道疾病、支气管炎、糖尿病［2］等。余甘子是一
种具有较高食用和药用价值的野生植物资源，风味独特，营养丰
富，保健功能强，含有多种对人体有益的活性物质，具有补益、抗
肿瘤、抗衰老等保健作用，为联合国卫生组织指定在全世界推广
种植的三种保健植物之一。目前研究证明，余甘子主要含有酚
类、黄酮类成分，具有抗 HBV、抗癌、抗病毒、降脂、抗氧化、保肝
等多种功效［3］，目前，国内外对余甘子主要成分和生物活性研究
越来越受到人们的关注，但其抗类风湿性关节炎的相关研究屡见
报道［4］。
近些年来，人们对关节炎的发病基质以及治疗策略和方法已
有很深入的研究，对于不同非甾体抗炎药［5］、生物制剂以及激素
等已有了更全面的了解［6］。植物药在国内关节炎治疗中的应用
比较广泛，无论内服或外治均收到很好的疗效，特别在缓解患者
疼痛、提高其生存质量方面有其独特的作用。但是由于尚缺乏大
样本的随机对照研究，有些植物药是否有抗炎药样作用难以科学
地评价。因此，用疗效佳、副反应低的中药单成分以及中成药治
疗该病具有重要意义。
1 材料与仪器
1． 1 药材 余甘子药材，购自佳木斯金天药店，经佳木斯大学药
学院鉴定为正品。
1． 2 仪器 FA2004 电子分析天平(上海恒平科学仪器有限公
司);756MC紫外可见光分光光度计(上海第三分析仪器厂) ;ＲE
－ 52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ;DZF － 150 型数显小
型恒温真空干燥箱(郑州长城科工贸有限公司);SHZ －Ⅲ循环水
真空泵(郑州长城科教仪器有限公司) ;KQ － 520 DE 医用数控超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);全自动血沉仪(北京迈
维康公司)。
1． 3 试剂 化学试剂均为分析纯;乙醇(哈尔滨新达化工厂) ;水
为蒸馏水;芦丁标准品(中国药品生物制品检定所) ;无水乙醇
(天津市凯通化学试剂有限公司);亚硝酸钠(天津市瑞金特化学
品有限公司) ;硝酸铝(天津市科密欧化学试剂有限公司) ;醋酸
钾(天津市化学试剂二厂);乙醚(天津市化学试剂二厂) ;甲醇
(哈尔滨新达化工厂) ;Freund＇s完全佐剂(sigma公司) ;大鼠细胞
因子 TNF － α、IL － 6 定量酶联检测试剂盒(上海酶联生物科技有
限公司)。
1． 4 动物 SD大鼠 40 只(佳木斯大学动物实验中心提供)，体质
·0852·
时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 11
量(150 ± 20)g，雌雄各半。
2 方法
2． 1 余甘子总黄酮的制备
2． 1． 1 样品的制备 准确称取 200． 00g余甘子粉末，用 70%乙醇
3 000 ml在室温下超声提取 30 min，抽滤后在旋转蒸发仪上浓
缩，水浴干燥至浸膏状，即得余甘子提取液。
2． 1． 2 标准曲线的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁标准试剂
10mg，用无水乙醇在超声波清洗器中使其完全溶解，并完全转入
50 ml容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，得浓度为 0． 2mg /L 芦丁
标准溶液。分别吸取芦丁标准溶液 0，1，2，3，4，5 ml于 6 只 25ml
容量瓶中，加入 5%(W/V)亚硝酸钠 1 ml，摇匀，放置 6 min 后加
入 10%(W/V)硝酸铝 1． 0 ml，摇匀，6min后再加入 10%(W/V)氢
氧化钠 10ml，混匀，用蒸馏水定容至刻度，静置 15 min 后于
500nm处测定其吸光度值，得回归方程:Y = 2． 8734X + 0． 0219，Ｒ2
= 0． 9998。
2． 2 大鼠佐剂性关节炎模型的建立 取体质量(150 ± 20)g 的
SD大鼠 40 只，正常饲养 1 周后，随机分成 4 组即阴性对照组、模
型组和余甘子总黄酮高、低剂量组，每组各 10 只。正常组作对
照，余甘子总黄酮组按计量灌胃给药，正常组与模型组灌胃生理
盐水，末次给药 1h后余甘子总黄酮组与模型组大鼠右后足趾 sc
注射弗氏完全佐剂 0． 1ml 致炎，正常组大鼠右后足趾 sc 注射生
理盐水。在致炎 21d后进行血清学评价。
2． 3 余甘子总黄酮治疗大鼠佐剂性关节炎 在致炎 21d 后对大
鼠心脏采血进行继发病的检测，其中包括炎症组织中 PGE2 含
量、血清中细胞因子含量以及血液常规、血液沉降率和类风湿因
子的检测等生理生化变化。
2． 4 大鼠局部炎症组织 PGE2 含量和血清中细胞因子 TNF － α、
IL － 6 含量的检测
2． 4． 1 局部炎症组织 PGE2 含量的检测 末次给药 1h 脱臼处死
大鼠后，将致炎足自踝关节以上 1cm 处剪下，称重，用手术剪刀
剪碎皮肤浸泡于 2ml生理盐水浸泡 48h，以 1500 r·min －1离心 10
min后，吸取上清液 0． 3ml加入 0． 5mol /L的 KOH －甲醇溶液，于
50℃水浴箱中水浴异构化 20min，加甲醇稀释至 20 ml后，置于波
长 278 nm处进行测定吸光度。以每克炎症组织相当的吸光度值
表示 PGE2 的含量。
2． 4． 2 血清中 TNF － α、IL － 6 含量的检测 大鼠血清中细胞因
子 TNF － α、IL － 6 含量的检测方法，采用 ELISA 双抗体夹心法，
操作步骤按试剂盒说明书进行测定。
2． 4． 3 大鼠红细胞沉降率和类风湿因子的检测 末次给药 1h
后，在手术台上将大鼠用乙醚麻醉，然后对大鼠进行心脏采血，使
用枸橼酸钠作抗凝血剂，采血约 2ml左右。在全自动血沉仪上对
大鼠血液进行红细胞沉降率的检测。同样心脏采血方式，收集大
鼠血液置于含有分离胶和促凝剂的真空采血器中，以 1500 r·
min －1离心 10 min后，收集血清，采用酶联免疫吸附法对类风湿
因子进行检测。
2． 5 统计学处理 数据以 珋x ± s 表示，数据结果采用 SPSS 11． 5
统计软件进行分析，组间比较采用 t检验。
3 结果
3． 1 供试药总黄酮的含量 余甘子经过超声提取得到咖啡色晶
体状余甘子总黄酮 5． 56g，通过芦丁标准品回归方程计算得总黄
酮含量为 59． 07%，将总黄酮定容于 200ml容量瓶中，配制成每生
药浓度 g /ml供试药，其黄酮含量为 12． 88mg /ml，余甘子高、低剂
量组分别 1ml和 2ml的供试品，供灌胃给药。
3． 2 大鼠的一般观察 大鼠造模后第 1 天出现右后足原发性肿
胀，造模后第 7 天左右非致炎足出现继发性肿胀，第 17 天后继发
性肿胀趋于稳定。造模后大鼠受累关节明显畸形，双后足不能负
重，并且在后期出现尾根部结节，为典型多发性关节炎表现，确定
造模成功。
造模过程中大鼠出现不同程度的体质量减轻，食欲下降，皮
毛无光泽，活动量减少。在灌胃给药后大鼠全身症状有明显改
善，体质量增加，食欲增强，皮毛平滑光泽，尾根部结节明显减少，
继发性关节肿胀明显减轻。
3． 3 大鼠血清中细胞因子 TNF － α、IL － 6 含量和局部炎症组织
PGE2 含量的检测 结果如表 1 所示，与模型组相比，余甘子黄酮
高剂量组中 TNF － α 的含量显著降低，有统计学意义(P ＜ 0．
05);与模型组相比，余甘子黄酮高、低剂量组血清中 IL － 6 含量
显著降低，有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;与模型组相比，余甘子黄酮
高、低剂量组中大鼠炎症组织中的 PGE2 含量均显著降低
(P ＜ 0． 01)。
表 1 余甘子黄酮对大鼠血清中 TNF － α、IL － 6 含量和
局部炎症组织 PGE2 含量的影响(珋x ± s)
组别
TNF － α
/pg·ml －1
IL － 6
/pg·ml －1
PGE2
吸光度
正常对照组 18． 49 ± 4． 62 37． 10 ± 4． 95 0． 25 ± 0． 04
模型组 25． 65 ± 7． 49## 51． 15 ± 6． 62## 0． 38 ± 0． 046##
低剂量组 24． 15 ± 6． 64 44． 35 ± 2． 35＊＊ 0． 30 ± 0． 03＊＊
高剂量组 18． 40 ± 2． 47* 39． 85 ± 1． 05＊＊ 0． 30 ± 0． 09＊＊
与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01;与正常对照组比较，
##P ＜ 0． 01
3． 4 大鼠红细胞沉降率和类风湿因子的检测 结果如表 2 所示，
与模型组做比较，余甘子黄酮高剂量组的血沉速率明显降低，有
显著差异性(P ＜ 0． 05)。大鼠佐剂性关节炎会使血液沉降速率
升高，相对于正常的大鼠有极显著差异性(P ＜ 0． 01)，实验结果
表明，余甘子能有效缓解大鼠的局部炎症反应，对大鼠血液沉降
速率有抑制升高的作用，通过淋巴循环进入血液中，可以对类风
湿关节炎疾病有效的治疗。
余甘子黄酮对大鼠血清中类风湿因子的影响结果如表 2 所
示，对于类风湿因子的检测可以定性检查出动物是否患有类风湿
关节炎疾病。正常组 10 只大鼠均没有检测出细胞因子，而模型
组的各大鼠均有类风湿因子检测出，余甘子黄酮低、高剂量组有
8 和 5 只大鼠检测出含有类风湿因子。实验结果表明，大鼠足趾
皮下注射弗式完全佐剂 21d后，会检测出大鼠血清中含有类风湿
因子，说明该大鼠已经患有类风湿性疾病，余甘子黄酮溶液可以
减低类风湿因子的含量，达到治疗类风湿关节炎疾病的功能。
表 2 余甘子黄酮对大鼠血液沉降率
和血清中类风湿因子的影响(珋x ± s)
组别 血沉 ESＲ /mm·h －1 类风湿因子 ＲF
正常对照组 4． 37 ± 1． 90 0 /10
模型组 6． 85 ± 2． 09## 10 /10
低剂量组 6． 48 ± 2． 17 8 /10
高剂量组 5． 21 ± 3． 15* 5 /10
与模型组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01;与正常对照组比较，
##P ＜ 0． 01
4 讨论
类风湿性关节炎的发病机制虽未完全明确，但近年来许多学
者认为细胞因子在关节破坏中起主要作用，其可能通过介导细胞
·1852·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 11 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 11 期
与细胞之间的相互作用引起组织酶的释放而导致关节损伤。本
实验应用弗式完全佐剂制造佐剂性关节炎大鼠模型，细胞因子在
类风湿性关节炎发病的免疫调节中起到中主要的作用，从而抑制
了细胞因子的促炎效应，这可能是该药治疗类风湿性关节炎的机
制之一。TNF － α、IL － 6 均是类风湿性关节炎的致炎细胞因子。
PGE2 能够引起血管扩张，血管壁通透性升高，引起发热、致痛，以
及趋化作用。本实验结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠
血清中的细胞因子 TNF － α、IL － 6 含量显著升高(P ＜ 0． 01) ，说
明类风湿性关节炎发病过程中确实存在 TNF － α、IL － 6 过度分
泌的现象;与正常对照组比较，模型组大鼠血清中的 PGE2 含量
显著升高(P ＜ 0． 01);与模型组比较，余甘子黄酮高剂量组能使
模型组大鼠血清中 TNF － α 水平下降，而余甘子黄酮高、低剂量
组能使模型组大鼠血清中 IL － 6 分泌水平发生不同程度的下降，
同时也使得模型组大鼠血清中的 PGE2 的水平下调(P ＜ 0． 01) ，
这一结果表明余甘子总黄酮能下调 TNF － α、IL － 6 及 PGE2 水
平。与模型组做比较，余甘子黄酮高剂量组的血沉速率明显降
低，有显著差异性(P ＜ 0． 05)。大鼠佐剂性关节炎会使血液沉降
速率升高，相对于正常的大鼠有极显著差异性(P ＜ 0． 01)，实验
结果表明，余甘子对大鼠血液沉降速率有抑制升高的作用，可以
对类风湿关节炎疾病有效的治疗。
本实验结果表明，余甘子总黄酮干预类风湿关节炎大鼠的机
制可能是由免疫耐受的主动抑制机制降低大鼠抗原产生的特异
性免疫反应，并通过细胞因子调控网路调节降低 TNF － α、IL － 6
水平以及 PGE2 水平，抑制细胞因子的促炎效应加剧来实现的，
该结果将为今后开发和研究余甘子在临床上治疗类风湿性关节
炎提供理论依据。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:124．
［2］ 侯开卫．余甘子化学成分及其在民族民间传统医药中的应用［J］．
中国民族民间医药杂志，2002，11(6) :345．
［3］ Joe B，Wilder ＲL． Animal modals of rheumatoid arthritis［J］． Mol Med
Today，1999，5(8) :367．
［4］ 刘德鼎，林博川，邢 福，等．非甾体抗炎药治疗类风湿关节炎及对
心血管的不良反应［J］．药学实践杂志，2007，25(5) :283．
［5］ 栗占国，张奉春，鲍春德．类风湿关节炎，第 1 版［M］．北京:人民卫
生出版社，2009:29．
［6］ 高鹰等．余甘子的抗炎作用与毒性实验研究［J］． 云南中医中药杂
志，1999，17(2) :47．
收稿日期:2013-08-17; 修订日期:2014-05-20
基金项目:国家自然科学基金(No． 30873279) ;
国家重点基础研究发展计划(“973”计划) (No． 2010CB530403)
作者简介:尹巧芝(1977-) ，女(汉族) ，山西运城人，成都中医药大学副教授，博士学位，主要从事中医药对女性生殖轴调控的研究工作．
* 通讯作者简介:陆 华(1964-) ，女(汉族) ，湖南新化人，成都中医药大学第二临床医学院 /第二附属医院研究员，博士学位，主要从事中医药对女性
生殖轴调控的研究工作．
补肾复方对去势大鼠体重及瘦素的影响研究
尹巧芝1，陆 华1* ，李利民2
(1．成都中医药大学，四川 成都 610072; 2．四川省中医药科学院，四川 成都 610041)
摘要:目的 补肾复方对去势大鼠体重及瘦素(LP)的影响。方法 将雌性育龄期大鼠随机分为正常组、假手术组、去势
组。去势组将去势成功大鼠随机分为模型组、倍美力组、补肾复方组。正常组、假手术组、模型组:每日生理盐水灌胃;倍
美力组:以 62． 5 μg /100g倍美力灌胃;补肾复方组:按成人用量的 15 倍灌胃。连续给药 12 周。观察一般情况，特别是体
重;计算 Lee＇s指数;酶免法检测血清 LP水平。结果 去势手术前，假手术组、正常组及去势组大鼠体重无明显差异(P ＞
0． 05)，去势手术 4 周后，与假手术组和正常组比较，去势组大鼠体重显著增加(P ＜ 0． 05) ;给药前，与假手术组、正常组比
较，模型组大鼠体重明显增加(P ＜ 0． 05) ，与模型组比较，补肾复方组大鼠体重无明显差异(P ＞ 0． 05)。给药 1 ～ 12 周，与
假手术组、正常组比较，模型组大鼠体重均明显增加(P ＜ 0． 05) ;与模型组比较，给药 5 周前，补肾复方组大鼠体重无明显
差异(P ＞ 0． 05);给药第 5 周后，补肾复方组大鼠体重明显减少(P ＜ 0． 05)。与假手术组、正常组比较，模型组大鼠 Lee＇s
指数及血清 LP水平明显增高(P ＜ 0． 05) ;与模型组比较，补肾复方组大鼠 Lee＇s 指数及血清 LP 水平明显降低(P ＜ 0．
05)。结论 补肾复方可延缓去势大鼠体重增长、降低血清 LP水平。
关键词:补肾复方; 去势大鼠; 体重; 血清 LP
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 11． 007
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2014)11-2582-03
Study of Influence of Bushen Compound on Body Weight and Leptin of Ovariectomized
Ｒats
YIN Qiao-zhi1，LU Hua1* ，LI Li-min2
(1． Chengdu University of TCM，Chengdu 610072，China;2． Sichuan Academy of Pharmaceutical Sciences，
Chengdu 610041，China)
·2852·
时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 11