全 文 ：＊贵阳中医学院 2004 年青年基金资助课题。
收稿日期:2004-11-19
白蔹醇提物免疫活性的初步研究＊
俞　琦 ,蔡　琨 , 田维毅
(贵阳中医学院基础部病原生物与免疫教研室 , 贵州贵阳　550002)
　　内容提要:目的:研究白蔹醇提物对小鼠免疫功能的影响 , 探讨白蔹抗感染的免疫活性机制。方法:用白蔹醇提物
5g/ kg , 10g/ kg , 20g/ kg对小鼠进行灌胃给药 7 天后 ,分别测定对照组和给药组小鼠外周血淋巴细胞 ANAE 阳性率 、脾淋巴
细胞增殖能力 、腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果:白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE阳性率 、脾淋巴细胞增殖能力 、
巨噬细胞吞噬功能均有促进作用(P<0.05 或P<0.01), 并随剂量增加而作用增强 , 量效呈正相关。结论:白蔹醇提物对
小鼠免疫功能有增强作用 ,推断与其可临床应用于抗感染治疗有关。
关键词:白蔹/醇提物;免疫活性;动物实验/鼠
中图分类号:R285.5　文献标识码:B　文章编号:1002-1108(2005)02-0020-02
　　中药白蔹(Ampelopsis japonica(Thunb)Makino)为葡萄
科蛇葡萄属植物 ,以其块根入药 , 具有清热 、解毒 、散结 、生
肌 、止痛等功效。临床报道白蔹用于治疗化脓性皮肤感
染 、细菌性痢疾等疾病 , 疗效显著[ 1-2] 。现代研究表明 , 白
蔹含有大黄素甲醚 、大黄酚 、大黄素 、富马酸 、没食子酸等
多种抗细菌和抗真菌成分 ,与其临床应用相一致[ 3] 。但对
于白蔹临床抗感染的免疫活性机制尚未见报道。为了观
察白蔹的免疫调节作用 ,我们就白蔹醇提物对小鼠外周血
淋巴细胞ANAE(0-醋酸萘酯酶)阳性率 、T 淋巴细胞增殖
能力及巨噬细胞吞噬功能的影响进行了初步研究 , 现报道
如下:
1　材料与方法
1.1　动物　昆明种小鼠 80 只 , 体重 20±2g , 雌雄不分 , 由
复旦大学医学院实验动物部提供。
1.2　仪器与试剂　CO2 培养箱(美国西蒙公司)、酶标仪
(美国);α—醋酸萘酯(上海试剂一厂生产):RPMI1640 培
养液 、小牛血清 、ConA、MTT(美国 sigma公司产品);六偶氮
副品红溶液:3%硫乙醇酸钠溶液;Hank s 液;0.1%中性红
溶液。
1.3　药物　白蔹醇提物系白蔹块根按常规方法用乙醇提
取而得 ,将药物按给药剂量用蒸馏水配成三种不同浓度:
1g/ ml、0.5g/ml 、0.25g/ml , 滤过除菌后置 4℃备用。
1.4　动物分组及给药方法　随机将动物分为:对照组(20
只)、给药组(60 只), 给药组再分为低剂量组 、中剂量组 、
高剂量组(各 20 只)。各给药组按每只小鼠每天 0.4ml药
液灌胃(三种浓度分别合生药 5e/ kg , 10g/kg , 20g/kg), 对照
组灌以等量生理盐水。连续给药 7 天后做免疫指标的检
测。
1.5　免疫细胞功能检测　对照组 、各给药组分别取 10 只
小鼠 ,取血做淋巴细胞 ANAE 阳性率的测定;取血后立即
处死 ,无菌操作下制备小鼠单个脾细胞悬液做T 细胞增殖
能力的测定;另取对照组 、给药组小鼠各 10 只 , 做腹腔巨
噬细胞的吞噬功能测定。
1.5.1　小鼠外周血淋巴细胞 ANAE 阳性率的测定　参照
文献方法[ 4] 。从小鼠眼球处取血 0.5ml , 用密度梯度离心
法分离淋巴细胞 , 以淋巴细胞液涂片 , 进行 ANAE 常规染
色 ,在油镜下计数 100-200个淋巴细胞 , 胞浆边缘及胞浆
内有一个至数个棕红色颗粒或斑块为 ANAE 阳性淋巴细
胞 ,计算出 ANAE阳性细胞百分率。
1.5.2　T淋巴细胞增殖能力的测定　参照文献方法[ 5] 。
以 ConA 刺激 ,用 MTT法测定 T 淋巴细胞的增殖能力。将
小鼠单个脾细胞悬液浓度调整为 5×106/ml , 检测各组小
鼠 T淋巴细胞的增殖能力(OD值)。
1.5.3　中性红比色法检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能
　参照文献方法[ 5] 。在给药结束前 4天 , 分别给小鼠腹腔
注射 3%硫乙醇酸钠溶液 3ml。处死后于腹腔注射 10%牛
血清培养液 5ml , 收集腹腔细胞悬液 ,离心洗涤 2 次后调整
细胞浓度为2×106/m1。检测各组小鼠腹腔巨噬细胞的吞
噬功能(OD 值)。
2　结果
·20·
第 27 卷　第 2期
2005年 4 月　 　　　　　　　　　　　
贵阳中医学院学报
JGCTCM
　　　　　　　　　　　No.2　Vo.27
April　2005 　　　　　
DOI :10.16588/j.cnki.issn1002-1108.2005.02.011
白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE阳性率 、脾
脏T 淋巴细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能的影响 , 见表
1。
　表 1　　白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE阳性率 、T细胞增殖及巨噬细胞吞噬功能的影响 (X±s)
分组 剂量(g/ kg)
淋巴细胞 ANAE阳性率
(%)(n)
T淋巴细胞增殖能力
(OD值)(n)
巨噬细胞吞噬强度
(OD值)(n)
对照组 57.80±5.55　(10) 0.2234±0.0340　(10) 0.3126±0.0229　(9)
低剂量组 5 61.62±3.84＊　(10) 0.2650±0.0274＊＊＊(10) 0.3319±0.0247＊　(10)
中剂量组 10 66.32±1.21＊＊＊　(10) 0.2772±0.0413＊＊＊　(9) 0.3518±0318＊＊　(8)
高剂量组 20 71.73±2.19＊＊＊■(10) 0.3122±0.0346＊＊＊■(9) 0.3901±0.034＊＊＊■(10)
　　＊与对照组比较 P>0.05;＊＊与对照组比较 P<0.05;＊＊＊与对照组比较 P<0.01;　■与低剂量组比较 P<0.01。
2.1　外周血淋巴细胞 ANAE 阳性率的测定结果表明 , 白
蔹醇提物剂量为 10g/kg , 20g/kg 时 , 小鼠淋巴细胞 ANAE
阳性率明显高于对照组(P<0.01)。
2.2　T 淋巴细胞增殖能力的结果表明 , 白蔹醇提物 3 个
剂量组均可增强小鼠 T 淋巴细胞的增殖能力(P<0.01),
高剂量组(20g/kg)作用最强。
2.3　腹腔巨噬细胞吞噬功能的结果表明 , 白蔹醇提物剂
量为 10g/kg , 20g/ kg 时 ,小鼠巨噬细胞吞噬功能明显增强
(P<0.05或 P<0.01),高剂量组(20g/kg)作用最明显。
3　讨论
白蔹具有清热 、解毒 、散结 、生肌 、止痛等功效 ,临床用
于治疗化脓性皮肤感染 、细菌性痢疾等病[ 1, 2] 。 现代研究
表明 ,白蔹含有大黄素甲醚 、大黄酚 、大黄素 、富马酸 、没食
子酸等多种具有抗细菌和抗真菌作用的药理成分 , 与其临
床应用相一致[ 3] 。我们通过动物实验 ,观察了三种不同剂
量的白蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE 阳性率 、T
细胞增殖能力及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果显示 , 白
蔹醇提物对小鼠外周血淋巴细胞 ANAE阳性率 、T 细胞增
殖能力 、巨噬细胞吞噬功能均有促进作用 , 并随剂量增加
而作用增强 ,量效呈正相关。
在抗感染免疫中 ,巨噬细胞发挥着吞噬 、杀菌 、清除炎
症产物和修复组织等重要作用 , T 淋巴细胞不仅可直接杀
伤靶细胞 ,也可通过释放淋巴因子间接发挥抗感染免疫效
应。一般认为 , ANAE(a-醋酸萘酯酶)相对地为 T淋巴细
胞所特有 ,并与 T细胞发挥杀伤靶细胞的作用有关 , 其活
性的变化可反映 T细胞的功能状态 , 能很大程度上代表机
体的细胞免疫水平[ 6] 。本实验结果提示 ,白蔹醇提物可增
强小鼠 T淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能 , 这表明白蔹的抗
菌作用还与其免疫活性有关 ,其临床应用于抗感染治疗可
能具有直接抗菌和调节机体免疫功能双重机制。本实验
仅就白蔹的免疫活性做了初步探索 ,关于该药的免疫活性
成分及其免疫调节作用的分子机制还有待进一步研究。
参考文献
[ 1] 　胡国臣 ,等.中药现代临床应用手册[ M] .北京:学
苑出版社 , 1993:420.
[ 2] 　宁俊华.单味白蔹治疗急 、慢性菌痢疗效观[ J] .中
西医结合杂志 , 1986 , 6(8):500.
[ 3] 　邹济高 ,金蓉鸾 , 何宏贤.白蔹化学成分研究[ J] .中
药材.2000 , 23(2):91.
[ 4] 　付嘉 , 熊斌 , 等.白茅根对小鼠细胞免疫功能影响
[ J].黑龙江医药科学 , 2000 , 23(2):17.
[ 5] 　田维毅 ,马春玲 , 孙向彬.合欢皮醇提物的免疫活性
研究[ J] .贵阳中医学院学报 , 1999 , 21(增刊):364.
[ 6] 　黄威权 , 谢锦添 , 王玉萍 , 等.人淋巴细胞 ANAE 阳
性率和反应模型的观察[ J] .解剖学杂志 , 1985 , 8
(1):1.
·21·　　第 2 期　　　　　　　　　　　　俞　琦等.白蔹醇提物免疫活性的初步研究