全 文 ：摘 要：对苯酚- 硫酸法测定破布叶叶多糖含量的影响因素进行了考察和优化. 实验发现，
测定波长为485 nm、苯酚用量1.4 mL、反应温度40 ℃、反应时间15 min时，在10.0～70.0 g/mL范
围内吸光度与多糖含量呈良好的线性关系，相关系数 r为0.9998.平均回收率99.2%，相对标准偏
差(RSD) 1.16%（n = 6）.
关键词：破布叶；多糖；苯酚-硫酸法
中图分类号：R 927.2 文献标识码：A 文章编号：1674-4942（2010）04-0400-03
苯酚-硫酸法测定破布叶叶的多糖
毕和平，周 贤，陈光英，辜燕飞
（海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158）
Abstract：The factors affecting the determination of polysaccharide content in Paniculateicrocos eryngii with phe⁃
nol-sulfuric acid method were optimized. Results showed that under the conditions of detection wavelength 485 nm, phe⁃
nol content 1.4 mL, reactiontemperature 40 ℃ and reaction time 15 min, there is good linearity range from 10.00 to
70.00μg/mL (r=0.9996). The average recovery is 99.2% and the RSD is 1.16%.
Key words: Microcos paniculata L；polysaccharide；phenol-sulfuric acid method
BI Heping，ZHOU Xian，CHEN Guangying，GU Yanfei
（College of Chemistry and Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou 571158，China）
收稿日期:2010-09-25
基金项目:海南省自然科学基金项目（20804）；海南省重点实验室天然药物化学实验室资助项目；海南师范大学有机化
学重点学科资助项目
Study on Phenol-Sulfuric Acid Method for Determination of
Polysaccharide Content in Leave of Microcos paniculata L.
破布叶属植物全世界约有60种，分布于非洲、
印度、马来西亚等地，在我国有2种，为破布叶和海
南破布叶[1-2].破布叶（Microcos paniculata L.）又名薢
宝叶；布渣叶等，主要分布于我国广东、海南、广西、
云南等地.破布叶的叶用于清热解毒,消食积.主治
感冒、消化不良、腹胀、黄疸、蜈蚣咬伤、腹胀、黄疸、
小儿盗汗、作茶饮去食积等[2].破布叶的药用最早见
于何克谏（清）所著的《生草药性备要》,称其味酸，
性平，无毒，解一切蛊胀，清黄气，消热毒.作茶饮，
去食积等[3-4].多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮
糖通过糖苷键连接在一起的聚合物，具有多种药理
活性 [5-8]. 多糖含量的测定方法主要有蒽酮硫酸法
和苯酚-硫酸法.本文采用苯酚-硫酸比色法测定
多糖含量，从方法学上考察了检测波长、显色温度、
显色时间、显色剂用量、线性范围、精密度和测定稳
定性的影响.
1.1 仪器、试剂与材料
仪器：UV2600紫外可见分光光度计（上海天美
科学仪器有限公司）；FZ-102型微型植物试样粉碎
机（天津泰斯特仪器有限公司）；旋转蒸发仪(上海
亚荣生化仪器厂)；SHZ-C型循环水式多用真空泵
（河南省巩义市英峪予华仪器厂）；FA1604型光电
天平（上海精科天平厂）；索式提取器（自制）.
试剂：葡萄糖、苯酚、浓硫酸等均为国产分析纯
试剂，所用水为蒸馏水.
材料：破布叶于2009年3月采集于海南省尖峰
岭国家森林保护区，经海南师范大学生命科学学院
钟琼心高级实验师鉴定为Microcos paniculata L.的
叶.自然晾干，粉碎备用.
1 实验部分
第23卷第4期 海南师范大学学报（自然科学版） Vol.23No.4
2010年12月 Journal of Hainan Normal University（Natural Science） Dec.2010
1.2 标准溶液配制及标准曲线测定
参照文献 [9-10]的方法并作改进. 精密称取
105 ℃干燥至恒重的D-无水葡萄糖0.1000 g，置于
100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，
得1 mg/mL的葡萄糖标准溶液.精密吸取葡萄糖标
准液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分别置于 50
mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得不同浓度的
标准葡萄糖溶液.
精密称取重蒸苯酚 12.5 g，加适量水溶解后，
转移至 250 mL容量瓶中定容至刻度，摇匀后置于
棕色试剂瓶，得5%苯酚溶液，备用.
取不同浓度葡萄糖标准溶液和蒸馏水各 2.0
mL，分别置于20 mL具塞试管中，分别加1. 4 mL苯
酚和浓硫酸 7 mL，于沸水中加热 15 min，立即放入
冷水中，水浴 30 min保持 40 ℃，用紫外-可见光分
光光度计于485 nm波长下进行测定.
1.3 破布叶的叶中粗多糖的提取与测定
称取粉碎到20目的破布叶的叶2 g，加入约10
倍的蒸馏水，80℃水浴回流提1 h.提取的含多糖溶
液适当浓缩后转入 250 mL三角瓶中，加适量蒸馏
水后在沸水浴上溶解，冷却后转入 250 mL容量瓶
中定容至刻度并摇匀，即得样品溶液，备用.分别精
确吸取样品溶液 2.0 mL，余下部分按 1.2节标准曲
线测定部分进行操作,并随行空白对照.
2.1 测量波长选择
精确量取葡萄糖标准液(40 μg/mL)和样品溶液
各 2.0 mL，余下部分按 1.2节标准曲线测定方法操
作.显色后，在紫外-可见分光光度计上于400~600
nm波长范围内扫描.结果见图1.可见标准溶液和
样品溶液在 485 nm处均有最大吸收，选择 485 nm
为测定波长.
2.2 显色温度选择
分别吸取标准葡萄糖溶液和样品溶液各
2.0 mL于试管中，依次加入苯酚液 1.0 mL、浓硫酸
7.0 mL，摇匀，分别在 40、60、80和 100 ℃下加热 15
min，取出立即放入冷水中，水浴30 min，然后取出，
按照1.2项下方法用紫外-可见光分光光度进行测
定.试验证明，测量温度为40℃为最佳显色温度.
2.3 显色时间选择
分别吸取标准品溶液和供试样品溶液 2.0 mL
于试管中，依次加入苯酚液1.0 mL、浓硫酸7.0 mL，
摇匀，分别加热 0、5、10、15、20、25和 30 min，余下
部分按1.2节标准曲线测定方法操作,测定吸光度.
由试验结果可知，加热 15 min后的标准液和供试
样品溶液的吸光度趋于平缓，选择15 min为最佳显
色时间.
2.4 苯酚用量选择
分别吸取标准品溶液和供试样品溶液 2.0 mL
于试管中，分别加入苯酚液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、
1.2、1.4、1.6、1.8 和 2.0 mL，再加入浓硫酸 7.0 mL，
摇匀，余下部分按1.2节标准曲线测定方法操作,测
定吸光度.由试验结果可知，在1.4 mL苯酚用量下，
标准品溶液和供试样品溶液的吸光度都达到最高，
所以选择1.4 mL为苯酚最佳用量.
2.5 标准曲线的制备
按 1.2项进行操作，以葡萄糖质量浓度为横坐
标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-葡萄糖质量浓
度的关系曲线，其标准曲线方程为 y = 0.0136x－
0.01408，相关系数 r为0.9998.结果表明，葡萄糖在
10～70 μg/mL 范围内，其浓度与吸光度线性关系
良好，见图2.
2.6 精密度实验
吸取6份葡萄糖标准溶液和样品溶液2.0 mL，
分别置具塞试管中，按照标准曲线制备方法，平行
测定吸光度，相对标准偏差 RSD分别为 0.55%
（n = 6）和0.61%（n = 6），精密度良好。
2.7 加样回收率实验
精密吸取供试样品溶液 1.0 mL 6份，各加入
20.0、30.0、40.0、50.0、60.0和 70.0 μg/mL的标准葡
萄糖液1.0 mL，按照标准曲线制备方法进行测定吸
光度，计算回收率 [7].测定和计算结果见表 1.平均
回收率为99.16%，相对标准偏差RSD为1.16%（n =
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0380 420 460 500 540 580
吸
光
度
波长（nm）
图1 波长扫描曲线图
Fig.1 Wavelength scanning curve
2 结果与讨论
第4期 毕和平等：苯酚-硫酸法测定破布叶叶的多糖 401
6）.
2.8 稳定性实验
精密量取标准品溶液和供试样品溶液各 2
mL，按照标准曲线制备方法每隔一定时间测定吸
光度. 由试验可知，测定显色溶液在 120 min 内稳
定性良好.
在苯酚-硫酸法中，测定破布叶叶多糖含量的
最佳测定波长为485 nm，显色的温度为40℃，显色
时间为 15 min，苯酚的加入量为 1.4 mL，显色液在
120 min内稳定性好.多糖含量在 10～70 μg/mL之
间与吸光度成良好的线性关系，在最佳提取条件
下，测得破布叶叶中的多糖质量分数为 0.76 %.此
测定方法简单灵敏，显色稳定，结果可靠.
参考文献:
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[3]
[4]
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[6]
[7]
[8]
[9]
[10]
[11]
1.0
0.4
0.2
0.6
0.8
0.0 100 20 30 40 50 60 70 80
浓度C（μg/mL）
A
图2 标准曲线图
Fig.2 Standard curve
试样中量/μg 加标量/μg 吸光度 测得量/μg 回收率/%
7.58
7.58
7.58
7.58
7.58
7.58
20
30
40
50
60
70
0.3388
0.4077
0.4702
0.5424
0.6154
0.6734
27.60
40.58
45.65
57.11
67.69
43.53
100.12
100.03
97.67
99.06
100.19
97.88
表1 加样回收率试验
Tab.1 Results of spike recovery test
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3 结论
责任编辑：黄 澜
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402 海南师范大学学报（自然科学版） 2010年