全 文 ：地锦草总黄酮抗氧化作用的研究
李宝山　巴根那　张昕原　孙福祥　乌日娜　王志民　赵宗孝
内蒙古蒙医学院中心实验室 ,通辽　 028041
提要　地锦草总黄酮呈剂量依赖性的抗 O-2· 和· OH-的氧化作用。 在 V B2- Me t- NBT体系中对 O-2 的 SC50= 0. 58μg /
ml, IC50= 0. 35μg /ml;在 Vit· C- Cu2+ - Cy to· C体系中对· OH-的 SC50= 2. 4μg /ml, IC50= 2. 1μg /ml;在 Vit· C- Fe2+ - DR
体系中对 MDA的 SC50= 151. 8μg /ml。 地锦草的消肿 、清热 ,伤口愈合等药效作用的发挥 ,可能与其清除和抑制自由基有关。
关键词　地锦草总黄酮 ;　氧自由基 ;　羟自由基 ;　丙二醛 ;　消除和抑制作用
The Antioxidate Eff ect of Total Flavonoids f rom Herba Euphorbiae Humifusae
Li Bao shan, Bagenna , Zhang Xinyuan, et al
The Center Laboratory of Inner Mongolia College of Tradi tional Mongolian M edicine, Tong liao 028041
Abstract　 The to tal flav onids iso la ted from Herba Euphorbiae Humifusae ( TFEH) had antio xida tion on O-2· and· OH-
in dose- dependent manner. In the system o f V B2- Met- NB T TFEH had antio xida tion to O-2· ( SC50= 0. 58μg /ml, IC50= 0.
35μg /ml); in th e sy stem o f V it. C- Cu2+ - Cy t. C system TFEH had antiox idation to· O H-( SC50= 2. 4μg /ml, IC50= 2. 1μg /ml)
and in th e sy stem of V it. C- Fe2+ - DR sy stem TFEH had also antiox idation to malondia ldehyde ( M DA) ( SC50 151. 8μg /ml) .
The pharmaco lo gica l actions of Herba Euph orbiae Humifusae such a s reducing fev er , detumescen and w ound healing migh t be
due to its to tal flav onoid ing redients.
Key words　 Total Flav onids o f Herba Euph orbiae Humifusae ( T FEH) ;　 Oxygen fr ee r edical;　 Hydroxyl radical;　
Malondialdehyde; Antiox idation
　　地锦草属于大戟科植物 ( Eupho rbia humifusa willd. )。蒙古名
为玛拉干札拉 -乌布斯 ,主要功能是清脑、清肺热 、燥黄水等。蒙医
用于治疗鼻衄、吐血、月经淋漓、外伤、出血等症 [1]。 《本草纲目》将
其列入草部 ,李时珍曰: “赤茎布地 ,故曰地锦 ,专治血病故俗称为
血竭 ,血见愁。” [2]现代药理学研究证实地锦草主要含有槲皮素及
槲皮素甙、山柰素及山柰素甙等黄酮类化合物 [3]。
作者前期工作证实地锦草水提液具有清除自由基作用 [4 ]。 为
了进一步探讨地锦草抗氧化成分 ,我们提取和分离了地锦草黄酮
( T FEH) ,并进行了清除自由基实验。
1　材料和方法
1. 1　地锦草购于哲盟医药公司 ,蒙药系王额尔德尼教授鉴定。 细
胞色素 C( Cy to· C) ,硫代巴比妥酸 ( TBA ) ,四乙基丙烷 ( TEP)购
于 Boehringer Mannbeim公司。维生素 C( V it· C)、 EDTA、甲硫氨
酸 ( M et)、四硝基唑蓝 ( NBT )、核黄素 ( VB2 )、硫酸亚铁、硫脲均为
国产生化试剂。
1. 2　 TFEH的提取: 地锦草粗粉 ( 20目 ) 5. 00g ,加 75%乙醇
30ml,浸泡 12h,回流提取 1. 5h,提取 3次 ,合并提取液 ,回收乙醇 ,
加水溶解并定容至 50ml。取此液 10ml,用石油醚脱色 3次 ,然后用
正丁醇萃取 3次。减压回收正丁醇 ,即可获得地锦草总黄酮。用甲
醇溶解 TFEH,在日立 557型分光光度计上做波长扫描。槲皮素做
标准对照 ,见图 1。
1. 3　 O-2· 和· OH-自由基生成体系 [4 ]: 利用 V B2- Met- N BT体
系生成 O-2 、 Vit· C- Cu2+ Cy to· C体系生成· O H-,静态法测定清
除率 ( S% ) ,动态法测定抑制率 ( O% ) [5]。
1. 4　丙二醛 ( M DA )生成体系 [6]:根据 Fenton reaction原理 ,采用
Fe2+ / H2O2体系产生· OH-自由基诱导脱氧核糖 ( DR)氧化产生
MDA,用 TBA显色 , TEP做标准 ,加入 T FEH后测定 MDA的生
成量。
2　结果
2. 1　 TFEH的紫外吸收光谱: 黄酮类化合物是泛指两个芳环通过
三碳链相互联结而成的一系列化合物。 天然黄酮类化合物多为上
述母体的衍生物。 紫外光谱扫描 ,多数黄酮类化合物有两个吸收
带 ,即Ⅰ 带在 300～ 400nm范围内 ,Ⅱ带在 240～ 285nm内 ,本文标
准品芦丁、槲皮素均和文献记载一致。 T FEH的Ⅰ 带是 356nm,Ⅱ
带是 266nm,与标准品比较基本相同。 Ⅰ 带吸收峰偏低 ,通过进一
步纯化可以得到解决。
　　 图 1　 T FEH的光谱扫描 　
表 1　 T FEH对 O-2· 、· OH-、 MDA的清除和抑制作用
VB2- Me t- NBT体系*
C(μg /ml) I% S%
Vit . C- Cu2+ - Cy to . C体系* *
C(μg /ml) I% S%
Vit. C- Fe2+ - DR体系* *
C(μg /ml ) S%
0 - - - - 0 - - - - 0 - -
0. 2 32. 6 23. 8 0. 5 28. 1 32. 8 15. 0 10
0. 4 58. 1 43. 5 1. 0 36. 1 34. 4 75. 0 30. 8
0. 6 74. 4 69. 4 1. 9 50. 2 45. 3 150. 0 50. 0
0. 8 86. 1 72. 1 2. 9 56. 8 51. 6 225. 0 71. 7
1. 0 91. 0 74. 8 3. 6 68. 2 64. 1 300. 0 89. 2
　　　　 SC50= 0. 58μg /ml,* * SC50= 2. 4μg /m l,* * * SC50= 151. 8μg /ml; IC50=
0. 35μg /ml, IC50= 2. 1μg /m l
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时珍国医国药 1998年第 9卷第 4期 LIS HIZHEN M EDICINE AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 1998 VO L. 9 N O. 4　
祁州漏芦化学成分研究
刘明生　李　铣
沈阳药科大学天然药物研究室　 110015
提要　从祁州漏芦 Rhaponticum uniflo rum ( L. ) DC.根中分离得到 7个结晶型化合物 ,利用理化性质 ,谱学分析 ,并通过
与标准品对照的方法 ,分别鉴定为:齐墩果酸 ( oleanolic acid,晶 5)、棕榈酸 ( palmitic acid,晶 6)、β- 谷甾醇 (β- sitoste rol,晶 7)、
胡萝卜甙 ( daucoster ol,晶 8)、蔗糖 ( sucro se,晶 9)、草酸钙 ( calcium oxalate,晶 10)和氯化铵 ( ammonium chlo ride,晶 11)。其中晶
5是首次由该属植物中分得 ,晶 7至晶 11为首次由该种植物中得到。
关键词　祁州漏芦 ;　化学成分
　　作者前报 [1]报道了从祁州漏芦 Rhaponticum uniflo rum ( L. )
DC.根中分得 4个噻吩类成分。本报摘要报道从该药材中 ,利用溶
剂分级分离法、大孔树脂法及硅胶层析法所分得的 7个结晶 ,经理
化常数测定、谱学分析及标准品对照 ,分别将其鉴定为: 齐墩果酸
( oleanolic acid )、 棕榈 酸 ( pa lmitic acid )、 β - 谷 甾 醇 ( β -
sito stero l)、胡萝卜甙 ( dauco stero l)、蔗糖 ( sucro se )、草酸钙 ( ca lci-
um oxala te)和氯化铵 ( ammonium chloride)。
齐墩果酸 ( oleano lic acid,晶 5): 白色针晶 (乙醇 )。 mp300℃以
上。 L- B反应 (+ )。 IR( KBr) cm- 1: 3450( O H) , 3250、 2950、 2850、
1695( c= 0) , 1470、 1380、 1310、 1300、 1270(齐墩果烷特征吸收 )。经
与标准品齐墩果酸对照: mmp不下降 , CO- TLC单一斑点 , IR光
谱一致 ,故鉴定该化合物是齐墩果酸。
棕榈酸 ( Palmitic acid,晶 6): 白色粒晶 (乙酸酯 )。 mp63～
67℃。溴酚蓝显色 (+ )。 IR( KBr) cm- 1: 3300- 2500( O H) , 1702( c
= 0) , 1472、 1462、 1310、 1290、 940、 720。 经与标准品棕榈酸对照:
mmp不下降 , CO- TLC为单一斑点 , IR光谱一致 ,故鉴定该化合
物是棕榈酸。
β - 谷甾醇 (β - sitoster ol,晶 7): 白色针晶 (氯仿 )。 mp134～
5℃。 L- B反应 (+ )。 UV( MeOH) nm: 208( 2. 16)。 IR( KBr ) cm- 1:
3400( O H) , 1650( c= 0) , 1465、 1380、 1040。 经与标准品 β- 谷甾醇
对照: mmp不下降 , CO- TLC为单一斑点 , IR光谱一致 ,故鉴定
晶 7是 β -谷甾醇。
胡萝卜甙 ( dauco stero l,晶 8): 白色粒晶 (乙醇 )。 mp300℃以
上。 L- B反应 (+ )。 UV( MeOH) nm: 205( 1. 28)。 IR( KBr ) cm- 1:
3400( O H) , 2950、 2850、 1630、 1460、 1380、 1070、 1020。 经与标准品
胡萝卜甙对照: mmp不下降 , CO- TLC单一斑点 , IR光谱一致 ,
故鉴定晶 8为胡萝卜甙。
蔗糖 ( sucro se ,晶 9): 白色粒晶 (乙醇 )。 mp180～ 3℃ , MoLish
反应 (+ )。 IR( KBr ) cm- 1: 3570、 3390、 3270、 ( O H) , 1235、 1135、
1124、 1112。经与标准品蔗糖对照: mmp不下降 , CO- TLC单一斑
点 , IR光谱一致 ,故鉴定晶 9为蔗糖。
草酸钙 ( ca lcium oxala te,晶 10): 白色方晶 (甲醇脱色 )。
mp300℃以上。 灼烧不碳化。 IR( KBr ) cm- 1: 1632( c= 0) , 1400,
1110。经与草酸钙的理化性质及 IR光谱。对照一致。故鉴定晶 10
是草酸钙。
氯化铵 ( am monium ch lo ride,晶 11): 白色针晶 (甲醇 -氯仿 )。
mp195～ 200℃。无气味 ,味咸 ,吸湿。多种显色剂均为阴性 ,Ⅰ 2蒸
汽熏时斑点处变白 ,灼烧不碳化 ,故推是无机物。 IR( KBr) cm- 1:
1575, 1402。经与氯化铵的理化常数及标准 IR谱对一致 [2] ,故鉴定
晶 11是氯化铵。
参考文献
1　刘明生 ,王素贤 ,李　铣 ,等 .祁州漏芦抗氧化活性成分研究 (Ⅰ ) .中国
药物化学杂志 , 1996, 6( 2)∶ 121
2　 Sad tler Lab. IN C Inorganies IR Grating Spect ra U SA, 1975∶ Y20K
( 1998- 01- 12收稿 )
2. 2　 T FEH清除和抑制 O-2 、· OH-、 M DA生成作用: 表 1显示 ,
TFEH对 O-2 的 IC50= 0. 35μg /ml, SC50= 0. 58μg /ml;对· OH-的
IC50= 2. 1μg /ml, SC50= 2. 4μg /ml;对 MDA的 SC50= 151. 8μg /ml,
表明 TFEH具有很强的清除和抑制自由基的作用。生物体内自由
基产生和清除失衡必然造成自由基堆积 ,超生理量的自由基均可
诱导生物膜的损伤 ,导致代谢紊乱 ,产生疾病。 因此寻找有效的自
由基清除剂就成为目前医药界研究的热点。已知许多中、蒙药含有
黄酮类化合物 ,而黄酮类化合物具有抗氧化作用 ,因此研究中、蒙
药中抗氧化成分具有现实意义。 O-2 、· O H-在生物体内产生途径
多 ,对细胞损伤严重。寻找抗 O-2 、· O H-的中、蒙药是抗氧化研究重
点。综合上述 , TFEH对 O-2· 的作用大于· O H-,对 M DA的生成也
有一定作用。地锦草的消肿、清热、止血、伤口愈合等药理作用的发
挥 ,很可能与其清除 O-2 、· OH-有关 ,有待进一步研究。
参考文献
1　中国医学百科全书编辑委员会 .中国医学百科全书 .蒙医学 .上海:上海
科技出版社 , 1992∶ 120
2　中国医学科学院药用植物资源研究开发所 .中国医学科学院药物研究
所 .中药志 (Ⅳ ) .北京:人民卫生出版社 , 1988∶ 325
3　阴　健主编 .中药现代研究与临床应用 ( 3 ) .北京:中医古籍出版社 ,
1987∶ 88
4　李宝山 ,乌日娜 ,张昕原 ,等 . 5种蒙药材清除自由基作用比较 .时珍国药
研究 . 1997, 8( 4)∶ 308
5　鲁纯素 .异喹啉、生物碱类化合物对羟自由基的清除作用 .北京医科大
学学报 , 1988, 20( 6)∶ 45
6　 Ahmad A, et al. Suscept ibili ty of Frrous Iron /Hyd rog en Peroxide-
Mediated Oxidation: Demoms tration of pos sible Fenton Reaction.
CLIN CHEH. 1995, 41∶ 2220～ 2250 ( 1997- 12- 09收稿 )
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L ISHIZHEN MEDICIN E AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 1998 V OL. 9 NO. 4 时珍国医国药 1998年第 9卷第 4期