全 文 ：文章编号:1008-9926(2005)01-0030-03　　中图分类号:R965.2　　文献标识码:A
雪莲花醇提物的抗脂质过氧化作用①
张振明② ,许爱霞 ,雷晓燕③ ,高　湘 ,葛　斌
(甘肃省人民医院　②药剂科　③小儿科　甘肃　兰州　730000)
摘　要:目的　研究雪莲花醇提物的抗脂质过氧化作用。方法　用 D-半乳糖造衰老小鼠模型 ,同时 ig相当于雪莲花 0.42、0.
84 、1.68、3.36g·kg-1·d-1醇提物 , 观察其对衰老模型小鼠抗氧化系统的影响。结果　0.42、0.84、1.68、3.36g·kg-1·d-1雪莲花
醇提物能使衰老模型小鼠血清 、肝 、肾组织中MDA 明显下降;SOD及GSH-PX 活力明显提高;脑组织中 LF 明显下降。结论　雪
莲花醇提物有显著清除氧自由基 ,活性氧及抗脂质过氧化作用。
关键词:雪莲花醇提物;氧自由基;活性氧;脂质过氧化
The Effect of ESLHM on Antilipoperoxidation①
ZHANG Zhen-Ming② ,XU Ai-Xia , LEI Xiao-Yan③ ,GAO Xiang ,GE Bin
(Department of Pharmaceutics of People s Hospital of ②　Gansu Province ③　Department of Pediatrics ,Lanzhou　730000 ,
Gansu　China)
ABSTRACT:Aim To study the antilipoperoxidative effect of the extract from Saussurea Laniceps Hand Mass through al-
cohol(ESLHM).Methods The senile mice model was induced by D-galatose.The effects of ESLHM on antioxidation
systems of mice were investigated after the mice were administered with ESLHM at the doses of 0.42 ,0.84 ,1.68 and 3.
36g·kg-1·d-1 by ig for 7weeks respectively.ResultsMalondialdehyde(MDA)notably dropped , activities of superoxide
dismutase(SOD)and glutathione peroxidase (GSH-PX)notably ascended in serum , liver and kidneys ,Lipofuscin(LF)
notably descended in brain of mice with senile model administered ESLHM.Conclusion ESLHM possess the notable effect
of eliminating oxygen free radicals , active oxygen and antilipoperoxidation.
KEYWORDS:ESLHM;Oxygen free radicals;Active oxygen;Antilipoperoxidation
　　雪莲花(Saussurea Laniceps Hand Mass ,SLHM)
系菊科植物绵头雪莲花的带花全株 ,有除寒壮阳 ,调
经止血的传统功效。近年国内有研究资料表明 ,雪
莲花水提物有抗辐射损伤作用 ,其机制可能与清除
羟自由基及防止染色体畸变有关[ 1] 。本实验将对雪
莲花醇提物(The extract from Saussurea Laniceps Hand
Mass through alcohol ,ESLHM)的抗脂质过氧化作用进
行探讨 ,旨在为开发中药类抗脂质过氧化剂及防治
与自由基有关的多种疾病提供理论依据 。
1　材料和方法
1.1　试剂及动物　丙二醛测试盒 ,超氧化物岐化酶
测试盒 ,谷胱甘肽过氧化物酶测试盒(均为南京建成
生物工程研究所产品),其他试剂均为进口或国产分
析纯。昆明种清洁级小鼠 , ♀, 5 ～ 8周龄 ,体重(22
±4)g(兰州生物制品研究所 ,动物合格证号:2004-
051)。
1.2　雪莲花醇提物的制备　用回流提取法 ,将药材
适度粉碎 ,用 80%乙醇浸泡 24h ,水浴加热回流 ,放
冷 ,滤过 ,第 1次回流 1h ,第 2 、3次各约 0.5h ,回收
乙醇 ,浓缩成浸膏状 ,用蒸馏水配成所需悬浮液 ,贮
存备用 。
1.3　动物分组及给药[ 2] 　实验用昆明种小鼠 ,随机
分为7组 ,即对照组 、模型组 、阳性对照组及试药组。
采用 ig 给药 ,试药 1 、2 、3 、4组分别 ig 相当于雪莲花
0.42 、0.84 、1.68 、3.36g·kg-1·d-1醇提物。阳性对照
组 ig 维生素E 200mg·kg-1·d-1。模型组和对照组 ig
相当量的对照液(只含防腐剂-泥泊金)。给药同
时 ,模型组 、阳性对照组和试药组小鼠每天颈背部 sc
5%D-半乳糖 0.5ml ,对照组 sc等量注射用水 ,造模
及给药 7周后进行各项指标测定。
1.4　小鼠血清 肝 肾组织中过氧化脂质降解产物
·30· 　解放军药学学报　第 21卷第 1期　　雪莲花醇提物的抗脂质过氧化作用　　　　　　　　　　　　　　张振明　　
①② 作者简介:张振明(1954-),男 ,甘肃定西人 ,副主任医师。研究方向:基础药理及事临床药理研究工作。 Tel:(0931)8281809　　通讯作者:葛　斌(1965-),男 ,辽宁大连人 ,副主任药师。研究方向:基础药理及事临床药理研究工作。Tel:(0931)8281809
基金项目:甘肃省自然科学基金计划项目 ,No.3ZS041-A25-073
MDA的测定　用 TBA比色法[ 3] ,肝 、肾组织用 Tris
缓冲液(pH7.4 , 0.01mol·L-1 Tris-HCl , 0.000 1mol·
L-1EDTA-2Na , 0.01mol·L-1蔗糖 , 0.8%NaCl)配成
10%组织匀浆 ,取肝或肾匀浆 0.1ml ,按测试盒操作
法加入试剂 ,反应终体积为 4.2ml。反应管振荡混
匀 ,水浴中煮沸 40min , 3 500g/min 离心 10min ,上清
液于 532nm处测吸收度(A)值。
1.5　小鼠血清 肝 肾组织中 SOD 活力的测定　用
亚硝酸盐法[ 4] ,肝 、肾组织用 Tris缓冲液配成 1%组
织匀浆 ,取肝或肾匀浆50μl ,按测试盒操作法加入试
剂 ,反应体积为 1.8ml。反应管振荡混匀 , 37℃恒温
水浴中温育 40min ,加入显色剂 10min 后 , 于 550nm
处测A值 。
1.6　小鼠血清 肝 肾组织中 GSH-PX活力的测定　
用DTNB法[ 5] ,取 1%肝或肾匀浆及 1mmol·L-1GSH
各0.2ml(对照管不含GSH),37℃水浴中预温 5min ,
按测试盒操作法加入试剂 ,37℃水浴中反应 5min ,3
500g/min离心 10min ,取上清液加入显色剂 ,室温静
置15min ,于 412nm 处测 A值。
1.7　小鼠脑组织中脂褐质(LF)的测定 　用 Sohal
法[ 6] ,取小鼠大脑 100mg ,加入 2∶1氯仿-甲醇提取
液2ml ,充分匀浆 ,滤纸滤过 ,滤渣用提取液洗涤 ,加
提取液至 5ml ,测定荧光强度(发射波长 435nm ,激发
波长 365nm)。
1.8　组间实验数据用成组资料 t检验分析。
2　结果
2.1　ESLHM对 D-gal致衰老模型小鼠血清中MDA ,
SOD及脑组织中 LF 的影响　D-gal致衰老模型小鼠
血清中 MDA及脑组织中 LF 明显升高 ,血清中 SOD
明显下降。同时 ig 相当于雪莲花 0.42 、0.84 、1.68 、
3.36g·kg-1·d-1醇提物 ,能显著对抗血清中 MDA及
脑组织中 LF升高 ,显著对抗血清中 SOD下降 ,结果
见表1 。
表 1　ESLHM 对 D-gal致衰老模型小鼠血清中MDA SOD及
脑组织中 LF 的影响( x±s , n=10)
Tab 1　Effects of ESLHM onMDA and SOD in serum , LF in brain of
mice with senile model caused by D-gal( x±s , n=10)
组别 SLHM(g·kg -1·d-1)
脑/脂褐质
荧光值
血/MDA
(μmol·g -1)蛋白
血/ SOD
(mmol·g -1)蛋白
对照组 … 17.4±1.1 4.20±1.20 95.6±14.0
模型组 … 18.7±2.5f 6.42±1.49g 84.9±10.5f
VE组 0.20 16.3±1.7b 4.11±1.23c 98.7±11.7b
药Ⅰ组 0.42 14.8±2.2c 4.00±0.58c 100.9±11.9b
药Ⅱ组 0.84 13.5±1.8c 3.61±1.17c 108.6±9.8c
药Ⅲ组 1.68 12.5±2.3c 3.56±0.90c 110.7±8.2c
药Ⅳ组 3.36 11.8±2.2c 3.44±0.78c 112.6±895c
　　注:试药组与模型组比较 , bP <0.05;cP <0.01;模型组与对照
组比较 , fP <0.05 , gP <0.01
2.2　ESLHM 对 D-gal致衰老模型小鼠肝 肾组织中
MDA ,SOD及GSH-PX活力的影响　D-gal致衰老模
型小鼠肝 、肾组织中MDA明显升高 ,SOD及 GSH-PX
活力均明显下降 。同时 ig 相当于雪莲花 0.42 、0.
84 、1.68 、3.36g·kg-1·d-1醇提物 ,能显著对抗肝 、肾
组织中MDA升高 ,显著抑制 SOD及GSH-PX活力下
降 ,结果见表 2。
3　讨论
小鼠长期注射 D-半乳糖是人造衰老小鼠模型
的经典方法 ,衰老模型小鼠可出现代谢功能紊乱 ,自
表 2　ESLHM对 D-gal致衰老小鼠肝 肾组织中MDA SODG及GSH-PX活力的影响( x±s , n=10)
Tab 2　Effects of ESLHM onMDA , activities of SOD and GSH-PX in liver and kidneys of mice with senile model caused by D-gal( x ±s , n=10)
组别
肝
MDA
(μmol·g-1)蛋白
SOD
(mmol·g -1)蛋白
GSH
(mmol·g-1)蛋白
肾
MDA
(μmol·g-1)蛋白
SOD
(mmol·g-1)蛋白
GSH
(mmol·g -1)蛋白
对照组 6.38±0.68 53.7±1.9 66.5±5.9 8.70±1.08 61.8±3.0 91.2±4.5
模型组 7.47±0.61f 48.5±4.5g 58.1±5.3f 9.85±1.64g 52.2±7.0f 83.2±8.4g
VE组 5.27±0.94c 53.3±3.3b 69.5±7.8c 8.35±0.94b 58.9±2.6b 92.6±12.8b
药Ⅰ组 4.97±0.94c 54.4±3.8b 69.0±4.3c 8.23±1.01c 59.2±4.3b 92.0±6.4b
药Ⅱ组 4.56±0.77c 58.4±2.6c 72.1±5.1c 7.21±0.95c 67.2±5.0c 97.7±10.4c
药Ⅲ组 4.33±1.06c 60.4±3.0c 74.6±4.2c 6.78±1.65c 69.5±2.9c 100.5±10.6c
药Ⅳ组 4.10±0.01c 61.1±2.6c 75.4±5.59 6.4±1.63c 70.3±2.4c 101.2±10.4c
　　注:试药组与模型组比较 , bP <0.05;cP <0.01;模型组与对照组比较 , fP <0.05;gP <0.01
由基过剩 。
自由基过剩可诱发炎症 ,免疫失调 ,恶性肿瘤等
多种疾病 ,也是促进机体衰老的重要因素[ 7] 。脂质
过氧化是氧自由基损伤组织的重要方式 ,其损伤途
径为:氧自由基+细胞膜脂质※脂质过氧化反应※
过氧化脂质※丙二醛+细胞成分※脂褐质。可见 ,
·31·　解放军药学学报　2005年 2月　第 21卷　第 1期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 21　 No 1　Feb2005　　　　　
脂质过氧化与氧自由基及衰老密切相关[ 8] 。研究和
开发抗氧化剂和自由基清除剂对延缓衰老和防治疾
病有重大意义。
在生命过程中 ,生物体不断产生氧自由基 ,即超
氧阴离子自由基(O-2 )和羟自由基(·OH)及有机自由
基(R· , RO· , ROO·),它们有很强的生物活性。适量
自由基对细胞的分裂 ,生长 ,消炎 ,解毒等起积极作
用 ,但过剩会损伤细胞膜 ,使 DNA 断裂 、蛋白质变
性 、酶失活 ,最后导致细胞解体和死亡。还有一些含
氧产物如单线态氧(1O2),过氧化氢(H2O2)等 ,它们
虽不属自由基 ,但含有活性氧 ,化学性质较基态氧活
泼 ,可在自由基反应中产生 ,同时还可直接或间接触
发自由基反应。它们和自由基一样 ,当产生过剩时
会损伤机体 。机体自身存在抗氧化系统 ,包括 GSH-
PX ,SOD等抗氧化酶 。GSH-PX对活性氧和组织产生
的H2O2有较强的清除能力 ,对保护细胞结构和功能
完整 ,延缓细胞衰老起着重要作用 。SOD对机体的
氧化与抗氧化平衡起着重要作用 ,此酶能清除 O-2 ,
保护细胞免受损伤。抗氧化剂可直接清除过剩自由
基 ,或通过增强体内抗氧化系统起抗氧化作用[ 9] 。
本实验结果表明 ,D-半乳糖致衰老模型小鼠 ig
相当于雪莲花 0.42 、0.84 、1.68 、3.36g·kg-1·d-1醇提
物 ,能使血清 、肝 、肾组织中 MDA 及脑组织中 LF 显
著下降;能使血清 、肝 、肾组织中 SOD及 GSH-PX活
力显著提高;提示雪莲花醇提物能显著清除·OH 和
抗脂质过氧化;能显著清除 O-2 ,H2O2 及活性氧。可
见 ,雪莲花醇提物有显著清除氧自由基 ,活性氧及抗
脂质过氧化作用 ,可能对上述与自由基有关的疾病
有防治作用。
参考文献:
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physiology[M] .Beijing:Sciece Pree ,1998.433～ 451
(收稿日期:2004-08-06;修回日期:2004-10-25)
(本文编辑　梁爱君)
文章编号:1008-9926(2005)01-0032-03　　中图分类号:R943;R917　　文献标识码:A
穿心莲提取工艺的研究及热稳定性考察
聂凌云① ,罗兴平②
(①中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所　北京　100071;②甘肃省药品检验所　甘肃　兰州　730000)
摘　要:目的　考察不同浓度乙醇渗漉提取穿心莲内酯类成分的动态变化及温度对穿心莲内酯类成分的影响。方法　采用
HPLC 对穿心莲渗漉提取过程中 , 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的变化过程进行监测 , 并考察加热温度对内酯类成分的影响。
结果　穿心莲的渗漉提取以 70%乙醇最佳 , 浓缩温度应低于 60℃。其提取物于 85℃加热 48h 穿心莲内酯含量下降明显 ,脱水
穿心莲内酯含量略有增加 ,两者之和则呈下降趋势。结论　乙醇浓度对穿心莲内酯类成分的提取有影响 , 低温浓缩及减少加
热时间可减少内酯类成分的变化 ,长时间加热对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的影响不一致。
关键词:穿心莲;提取工艺;HPLC
Study on the Extractive Process of Kalmegh and its Heat Stability
NIE Ling-Yun① ,LUO Xing-Ping②
(①Institute For Drug and Instrument Control of PLA , Beijing　100071　China)
(②Gansu Institute of Drug Control ,Lanzhou　730000 ,Gansu　China)
·32· 　解放军药学学报　第 21卷第 1期　　穿心莲提取工艺的研究及热稳定性考察　　　　　　　　　　　　聂凌云　　
① 作者简介:聂凌云(1968-),女 ,河北石家庄人 ,医学硕士 ,副主任药师。研究方向:药物分析。 Tel:01066949095