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白子菜总黄酮对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用



全 文 :— 29 —现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
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白子菜总黄酮对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用
甘典辉,伍小燕 *,李 峰,伍业冬
( 广西中医药大学第一附属医院,广西 南宁 530023)
摘 要:目的 研究白子菜总黄酮对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制。方法 采用灌
胃无水乙醇建立大鼠胃黏膜损伤模型,将 60 只雄性Wistar 大鼠随机分成 6组,即空白组,模型组,雷尼替
丁组(50 mg·kg-1),白子菜总黄酮低,中,高剂量组(100,200,400 mg·kg-1),每天空腹灌胃给药 1次,
连续灌胃给药 7 d,空白组和模型组给予等剂量的生理盐水,末次给药 1 h 后,除空白组外均灌胃无水乙醇
(10 mL·kg-1)建立急性胃黏膜损伤模型,测定各组胃黏膜损伤指数及胃黏膜损伤抑制率,检测血清及胃
黏膜组织丙二醛 (MDA),一氧化氮(NO)含量和超氧化物歧化酶 (SOD) 活性,并检测胃黏膜组织还原性
谷胱甘肽(GSH)的含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果 白子菜总黄酮能抑制无水乙
醇引起的大鼠胃黏膜损伤;与模型组比较,白子菜总黄酮各剂量组能降低血清和组织MDA含量,升高血
清和组织NO含量,提高血清和组织 SOD活性,并能提高胃黏膜组织GSH含量和 GSH-PX 活性,结果
有显著性差异(P<0.01 或P<0.05)。结论 白子菜总黄酮对无水乙醇引起的胃黏膜损伤有显著的保护作用,
其机制可能与减少氧自由基生成,促进氧自由基清除及抗脂质过氧化反应有关。
关键词:白子菜总黄酮;无水乙醇;胃黏膜损伤;抗氧自由基
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2014)03-029-04
Protective Effects of Total Flavonoids of Gynura divaricata on Ethanol-induced Gastric
Mucosal Injury in Rats
GAN Dian-hui, WU Xiao-yan*, LI Feng, WU Ye-dong
(The First Affi liated Hospital of Guangxi University of Chinese Medical, Nanning, 530023,China )
Abstract: Objective To investigate the protective effects of total fl avonoids of Gynura divaricata(TFG) on
ethanol-induced gastric mucosal injury in rats. Methods The models of gastric mucosal injury were established
using absolute ethanol. 60 healthy adult male Wistar rats were randomly divided into six groups, 10 rats in each
group, blank control group, model group, ranitidine group(50 mg·kg-1), TFG low-dose, middle-dose and high-dose
收稿日期:2013-11-14
作者简介:甘典辉(1973-),男,学士,主管中药师,从事药理学和药物
制剂工作,Tel :0771-5848750,E-mail :tackylw@126.com
* 通讯作者: 伍小燕(1962-),女,学士,主任中药师,从事中药药理学研
究,Tel:0771-5848631,E-mail :1654762142@qq.com
DOI:10.13728/j.1673-6427.2014.03.014
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group(100, 200, 400 mg·kg-1), respectively. Those groups were given relevant medicine once a day for 7 days,
but blank group and the model group were given normal saline, after the last medication 1 h, the groups of gastric
mucosal injury were ig by giving absolute ethanol(10 mL·kg-1)except blank control group. The gastric mucosal
injury index and inhibitory rate were measured. The concentrations of malonyldialdehyde (MDA) and nitric oxide
(NO) and GSH, and the activity of superoxide dismutase (SOD) and GSH-PX in the serum and the homogenate
of the gastric mucosal tissue were detected. Results TFG could significantly inhibit ethanol-induced gastric
mucosal injury in rats, compared to model group, in the serum and the homogenate of the gastric mucosal tissue,
the contents of MDA were decreased, the contents of NO and GSH, and the activities of SOD and GSH-PX were
increased, which presented statistical signifi cant differences(P<0.01 or P<0.05). Conclusions TFG has protective
effect on ethanol-induced gastric mucosal injury in rats, the mechanism may be related to attenuating free radical
and inhibiting the effect on lipid peroxidation.
Key words: total fl avonoids of Gynura divaricata(TFG); ethanol; gastric mucosal injury; antioxidation
白子菜是菊科植物白子菜Gynura divaricata ( L. )
DC. 的全草,味辛、淡,性平,别名厚面皮、神仙草、
枪刀药、白背三七等,功能清热解毒、活血化瘀、续
筋接骨、凉血止血、祛风消肿、止痛,主治肺热咳
嗽、痈疮肿毒,跌打损伤、风湿骨痛、烧烫伤、崩漏、
外伤出血等症,广泛用于治疗胃病、糖尿病、高血压
病、高血脂及癌症等 [1,2],据现代研究表明 [3,4],白子
菜对 HepG2 细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用,
白子菜水提物对自发性高血压大鼠具有很好的降压
作用。而白子菜对无水乙醇致大鼠胃黏膜损伤方面的
研究未见报道,因此本文探讨了白子菜总黄酮对无水
乙醇致胃黏膜损伤模型大鼠的影响,为阐明其治疗胃
病的机制提供实验依据。
1  材料和方法
1.1 药品和试剂
参照文献 [5] 采用最佳提取工艺提取白子菜总
黄酮,即:乙醇浓度为 60%,料液比 1:40,温度为
60℃,超声时间 15 min,超声功率 500 W,超声提取
2次。加蒸馏水配制成白子菜总黄酮低中高剂量,分
别为 100,200,400 mg·kg-1,4℃保存备用。无水乙醇,
批号为 20121012,由天津市光复精细化工研究所提
供;盐酸雷尼替丁胶囊,批号为 120302,由广东恒
健制药有限公司提供;MDA和 SOD 检测试剂盒批号
均为 20120312,NO 检测试剂盒批号为 20120422,
GSH 和 GSH-PX 检测试剂盒批号均为 20120210,均
购自南京建成生物工程研究所。
1.2 动物
健 康 雄 性 Wistar 大 鼠, 清 洁 级, 购 自
广西医科大学实验动物中心。动物生产许可
证 SCXK( 桂 )2009-0002, 动 物 使 用 许 可 证
SYXK( 桂 )2009-0004。
1.3 动物模型制备及分组给药 [6]
将 60 只雄性Wistar 大鼠随机分成 6组,每组 10
只,即空白组,模型组,雷尼替丁组(50 mg·kg-1)
阳性对照组,白子菜总黄酮低,中,高剂量组分别为:
100,200,400 mg·kg-1,每天空腹灌胃给药 1次,连续
灌胃给药 7 d,空白组和模型组给予等剂量的生理盐
水,末次给药前 24 h 禁食不禁水,末次给药 1 h 后,
除空白组外均灌胃无水乙醇(10 mL·kg-1)建立急
性胃黏膜损伤模型,1 h 后处死大鼠。
1.4 胃黏膜损伤指数及胃黏膜损伤抑制率计算
处死大鼠取胃黏膜组织,用肉眼和放大镜观察
胃黏膜的损伤情况,参照 Guth 评分标准,计算胃黏
膜损伤指数,点状损伤或损伤小于 1 mm 为 1 分,线
状损伤长度 1~ 2 mm 为 2 分,线状损伤长度 2~ 3
mm 为 3 分,线状损伤长度 3 ~ 4 mm 为 4 分,以此
类推,其中损伤宽度大于 2 mm 分值加倍,所有得分
之和为胃黏膜损伤指数,胃黏膜损伤抑制率 =(模
型组损伤指数-给药组损伤指数)/ 模型组损伤指数
×100%。
1.5 胃黏膜损伤大鼠生化指标检测
大鼠灌胃无水乙醇 1 h 后,摘眼球取血,分离血
清,断头处死大鼠,解剖取胃,沿胃大弯剪开,生
理盐水冲洗,剪取溃疡组织处,制备胃组织匀浆液,
采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶
法测定 SOD 活性,硝酸还原酶法测定 NO 含量,比
色法检测 GSH 和 GSH-PX 的活性,实验操作严格按
照试剂盒说明书进行。
1.6 统计学处理
应用 SPSS 19.0 软件进行统计学处理,数据以
x±s 表示,两组间比较采用 t 检验,多组均数比较采
用方差分析,计数资料采用秩和检验,P < 0.05 为
有统计意义。
2 结果
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2.1 胃黏膜损伤指数及胃黏膜损伤抑制率的比较
空白对照组胃黏膜完整光滑,色泽较红润,未见
溃疡糜烂及出血点,模型组胃黏膜充血明显,表面红
肿,有点状及条状出血,局部有小片糜烂及溃疡形
成,雷尼替丁阳性组与 TFG 低剂量组状况相似,胃
黏膜可见轻度充血,见少量点状损伤,白子菜总黄酮
中高剂量组胃黏膜表面色泽较红润光滑,未见溃疡糜
烂及明显出血点。与空白对照组比较,模型组的损
伤指数显著提高(P<0.01),各给药组与模型组比较,
都能显著降低大鼠胃黏膜损伤指数,差异有统计学意
义(P<0.01 或P<0.05),白子菜总黄酮对大鼠胃黏膜
损伤抑制率呈剂量剂量依赖性,其中白子菜总黄酮高
剂量组抑制率为 72.49%,结果见表 1。
表 1 TFG对大鼠胃黏膜损伤指数及胃黏膜损伤抑制率的影响
(x±s,n=10)
Tab.1 Effects of TFG on ulcer index and inhibition rate in ethanol-induced
gastric mucosal injury in rats(x±s,n=10)
组别 剂量 /mg·kg-1 损伤指数 / 分 损伤抑制率 /%
空白 — —
模型 80.60±9.65 2) —
阳性 50 38.36±3.58 4) 52.41
TFGL 100 50.54±5.63 3) 37.30
TFGM 200 30.16±3.04 4) 62.58
TFGH 400 22.17±2.87 4) 72.49
注:与空白组比较,1)P<0.05,2)P<0.01;与模型组比较,3)P<0.05,4)
P<0.01,(表 2~4 同)。
2.2 对胃黏膜损伤大鼠血清MDA 含量和 SOD 活性
的影响及对胃黏膜组织MDA, GSH 含量和 SOD, GSH-
PX 活性的影响
与空白组比较,模型组大鼠血清及胃黏膜组织
MDA含量升高,SOD 活性降低,胃黏膜组织 GSH含
量降低,GSH-PX 活性降低;与模型组比较,各剂量
组均能降低血清及胃黏膜组织MDA含量,提高 SOD
活性,提高胃黏膜组织 GSH-PX 活性和 GSH 含量,
结果有显著性差异,结果见表 2,3。
表 2 TFG对胃黏膜损伤大鼠血清MDA含量和 SOD活性的影响
(x±s,n=10)
Tab. 2 Effects of TFG on the levels of MDA and activity of SOD in serum
of rats with gastric mucosal injury induced by ethanol(x±s,n=10)
组别 剂量 /mg·kg-1 MDA(nmol/mL) SOD(U/mL)
空白 4.17±0.39 268.37±23.54
模型 9.82±0.89 2) 129.16±16.37 2)
阳性 50 5.03±0.41 4) 226.85±18.23 4)
TFGL 100 7.36±0.79 3) 168.32±20.16 3)
TFGM 200 6.13±0.83 4) 199.47±25.89 4)
TFGH 400 4.88±0.38 4) 232.67±29.31 4)
表 3 TFG对胃黏膜损伤大鼠组织MDA, GSH含量和 SOD, GSH-PX 活性
的影响(x±s,n=10)
Tab.3 Effects of TFG on the levels of MDA, GSH and activity of SOD and
GSH-PX in gastric mucous membrane of rats with gastric mucosal injury
induced by ethanol(x±s,n=10)
组别 剂量 /mg·kg-1
MDA(nmol/
mgprot) GSH(mg/gprot) SOD(U/mgprot)
GSH-Px
(U/mgprot)
空白 2.20±0.19 3.57±0.32 65.27±6.34 46.98±7.16
模型 4.61±0.34 2) 1.89±0.10 2) 32.16±3.94 2) 22.53±3.08 2)
阳性 50 2.86±0.20 4) 3.09±0.28 4) 55.73±6.75 4) 39.61±4.59 4)
TFGL 100 4.05±0.41 3) 2.08±0.15 3) 36.97±5.21 25.39±2.94
TFGM 200 3.69±0.22 3) 2.64±0.13 3) 45.28±6.04 3) 30.72±3.67 3)
TFGH 400 2.72±0.17 4) 3.26±0.37 4) 59.87±6.79 4) 40.85±5.01 4)
2.3 对胃黏膜损伤大鼠血清及胃黏膜组织 NO 含量
的影响
与空白组比较,胃黏膜损伤大鼠血清及胃黏膜组
织 NO含量显著降低,与模型组比较,白子菜总黄酮
各剂量组能提高血清及胃黏膜组织 NO含量,并呈剂
量依赖性关系。结果见表 4。
表 4 TFG对胃黏膜损伤大鼠血清及胃黏膜组织NO含量的影响
(x±s,n=10)
Tab.4 Effects of TFG on the levels of NO in serum and gastric mucous
membrane of rats with gastric mucosal injury induced by ethanol
(x±s,n=10)
组别 剂 量 /mg·kg-1 血清 NO(μmol/L) 组织 NO(μmol/g prot)
空白 33.25±3.67 6.85±0.82
模型 15.37±2.04 2) 2.57±0.16 2)
阳性 50 23.75±2.37 4) 5.56±0.53 4)
TFGL 100 18.41±2.91 3) 3.22±0.21 3)
TFGM 200 22.67±3.08 4) 4.82±0.37 4)
TFGH 400 30.25±2.83 4) 6.24±0.46 4)
3 讨论
酒精在人们生活中随处可见,研究显示乙醇对消
化道有损伤作用,饮酒人群的消化道疾病发生率明显
高于非饮酒人群,乙醇可以引起胃粘膜下血管内皮损
伤,使血管扩张,小血管破裂、粘膜下出血等改变,
进一步破坏粘膜屏障。乙醇可以使中性粒细胞浸润于
胃粘膜,并释放MPO、氧自由基、活性氧化代谢产
物如超氧化阴离子 (O2-)、蛋白酶并粘附于血管内皮
造成大血管闭塞等方式导致粘膜损伤,因此本课题采
用无水乙醇建立大鼠胃粘膜损伤模型。
氧自由基是一类具有高度化学反应活性的含氧
基团,SOD 是动物机体内的抗氧化物酶,其作用是
清除自由基,防止自由基对细胞结构的损伤。体内
SOD的活性,可以反映自由基的清除速度 , 其水平的
高低是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。还原
性谷胱甘肽(GSH)是一种低分子清除剂,是 GSH-
PX 的底物,它可清除 O2-,H2O2,LOOH。是 GSH-
PX 和 GST 两种酶类的底物,为这二种酶分解氢过氧
— 32 — 现代中药研究与实践2014年第28卷第3期Chin Med J Res Prac,2014 Jun.Vol.28 No.3
化物所必需,能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其
它辅因子受氧化损伤,因此 GSH 的量的多少是衡量
机体抗氧化能力大小的重要因素。NO作为神经调节
剂和血管舒张剂,可以通过抑制质子泵活性、逆转乙
醇对胃粘膜乙醇脱氢酶活性的抑制、增加胃粘膜经
自由基清除能力来保护胃粘膜,另外可介导胃黏膜
产生前列腺素从而抑制胃酸分泌,扩张胃黏膜血管,
增加肉芽组织中微循环血流量,促进胃粘膜修复 [7]。
本实验研究了白子菜中主要活性成分总黄酮对
无水乙醇致大鼠胃粘膜损伤的研究,探讨其初步作用
机制,结果表明,白子菜总黄酮能显著降低大鼠胃黏
膜损伤指数,提高黏膜损伤抑制率,能抑制乙醇引起
的大鼠胃黏膜损伤;能降低血清和组织MDA含量,
升高血清和组织 NO 和 GSH 含量,提高血清和组织
SOD 和 GSH-PX 活性,表明其机制可能与其抗氧自
由基生成,促进氧自由基清除和抑制脂质过氧化作用
有关。
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九味通窍汤的体外抗脑胶质瘤作用及化学成分分析
吴梦莹,臧元帅,樊宏伟 *
(南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院),江苏 南京 210006)
摘 要:目的 研究九味通窍汤对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制作用,并分析其化学成分。 方法 采
用MTT法检测九味通窍汤醇提取物对人神经胶质瘤U251 细胞体外增殖活性的抑制,HPLC-MS 法检测其
指纹图谱,并利用现有的对照品对主要成分进行结构确证。 结果 九味通窍汤醇提取物对U251 细胞的增
殖具有明显抑制作用,MTT法的剂量反应曲线为Y= 0.123X + 0.034 5,24h 的半数抑制浓度 IC50 为 3.78g
生药 /L,安全浓度 IC10 为 0.53g 生药 /L。九味通窍汤的指纹图谱有 28 个色谱峰,含有槲皮素、毛蕊异黄酮、
毛蕊异黄酮葡萄糖苷(毛蕊异黄酮 -7-O-β-D葡萄糖苷)、芒柄花素、芒柄花苷(芒柄花素 -7-O-β-D
葡萄糖苷)。 结论 九味通窍汤醇提取物在体外实验中具有抗脑胶质瘤作用,应用HPLC-MS 法可快速、
简便、准确地测定九味通窍汤的指纹图谱,与君药的指纹图谱具有良好的相关性,并利用对照品确定了主
要成分的结构,为今后研究九味通窍汤的药效成分奠定了基础。
关键词:九味通窍汤 ; 抗脑胶质瘤作用 ; 化学成分
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2014)03-032-05
收稿日期:2014-3-23
基金项目:江苏省中医药局科技项目(LZ11117)
作者简介:吴梦莹(1989-),女,硕士,Tel:18262636889,研究方向:临床药理,
E-mail:284132510@qq.com
* 通信作者:樊宏伟(1968-),女,博士,主任药师,研究方向:临床药理,
Tel:025-2887031,E-mail:fanhongwei178@sina.com