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小叶黄杨石油醚部位化学成分研究
戴支凯 1 ,梁　军 2 ,苏小建2 ,徐　庆 1＊ ,张惠勤 1
(1.桂林医学院 ,广西 桂林 541004;2.广西师范大学 ,广西 桂林 541004)
　　摘要　目的:研究小叶黄杨石油醚组分的化学成分。方法:通过硅胶柱色谱分离纯化化合物。采用 MTT法对
各组分进行抗肿瘤活性筛选。结果:从小叶黄杨石油醚组分中分离得到 8个化合物 , 分别鉴定为:羽扇豆醇(1)、甲
酸羽扇豆酯(2)、白桦脂醇(3)、β -谷甾醇(4)、豆甾醇(5)、邻苯二甲酸二异丁酯(6)、 3β, 30-dihydroxy-lup-20(29)ene
(7)、胡萝卜苷(8)。化合物 7剂量依赖性地抑制 KB细胞增殖。结论:除化合物 1和 6外 ,其余均为首次从该属植
物中分离得到。化合物 7具有一定的抗肿瘤作用。
关键词　小叶黄杨;化学成分
中图分类号:R284.1/R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)07-1062-03
StudyontheConstituentsofPetroleumEtherFractionofBuxusmicrophyla
DAIZhi-kai1 , LIANGJun2 , SUXiao-jian2 , XUQing1 , ZHANGHui-qin1
(1.GuilinmedicalCollege, Guilin541004, China;2.GuangxiNormalUniversity, Guilin541004, China)
Abstract　Objective:TostudythechemicalconstituentsfromthepetroleumetherfractionofBuxusmicrophyla.Methods:The
petroleumetherfractionofBuxusmicrophylawasisolatedandidentifiedbysilicagelcolumnchromatography.Andtheanticanceractiv-
ityofdifferentchemicalconstituentswasmeasuredbyMTTreductiontest.Results:Eightcompoundswereisolatedandidentifiedaslu-
peol(1), butulin(3), β-sitosterol(4), stigmasterol(5), dibutylphthalate(6), 3β, 30-dihydroxy-lup-20(29)ene(7), daucosterol
(8).Compound7 inhibitedKBcels′proliferationinadose-dependentmanner.Conclusion:Compounds2 ～ 5, 7, 8 areisolatedfrom
thisgenusforthefirsttime.Compound7hascertainlyanticancereffects.
Keywords　BuxusmicrophylaSieb.etZucc.;Chemicalconstituents
收稿日期:2008-12-05基金项目:广西自然科学基金(2006183)作者简介:戴支凯(1971-),男,副教授 ,主要从事中西药理学研究;Tel:0773-5895801, E-mail:dzhk110@ 126.com。＊通讯作者:徐庆 , Tel:0773-5895801, E-mail:xq5895801@163.com。
　　小叶黄杨(黄杨木 , BuxusmicrophylaSieb.et
Zucc.)又名千年矮 ,是黄杨科黄杨属的一种灌木 。
民间用来治疗疟疾 、梅毒 、风湿 、皮炎和狂犬病 〔1〕。
本研究通过对小叶黄杨石油醚部位化学成分的分
·1062· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 7期 2009年 7月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.07.043
离 ,鉴定了其中的 8个化合物 ,分别为:羽豆醇(1)、
甲酸羽扇豆酯(2)、白桦脂醇(3)、β-谷甾醇(4)、豆
甾醇 (5)、邻苯二甲酸二异丁酯 (6)、 3β, 30-di-
hydroxy-lup-20(29)ene(7)、胡萝卜苷(8),除化合物
1和 6外 ,其余均首次从该属植物中分离得到 。
1　仪器与材料
YRT230数显微熔点测定仪;Specac压片机(英
国);Avatar360 FT-IR红外光谱仪(美国 Nicolet公
司);柱色谱及薄层层析用硅胶为青岛海洋化工厂
产品;ADVANCEAV500 MHz超导核磁共振仪为瑞
士 Bruker公司产品 。小叶黄杨购自桂林花草苗木
公司 ,由广西植物所鉴定为黄杨科黄杨属植物小叶
黄杨 BuxusmicrophylaSieb.etZucc.;KB细胞和
Hela细胞购自中科院上海细胞库;RPMIMedium
1640(RPMI-1640,批号 1165062):Gibco;胎牛血清
(批号 080109):杭州四季青生物工程材料有限公
司;MTT(批号 BS0887):SinoAmericanBiotechnoloy
Co.;氟尿嘧啶(5Fu,批号 080201):上海旭东海普药
业有限公司;酶标仪(Sunrise):Austria。
2　方法
2.1　提取与分离　将小叶黄杨阴干后粉碎 ,取 13
kg,用 70%的乙醇浸没药材于超声液中超声提取 ,
每次 1 h,提取液浓缩后用石油醚分 3次萃取 ,浓缩
萃取液得浸膏 35 g。粗提物石油醚部分进行反复硅
胶柱层析 ,洗脱剂:石油醚 ,石油醚∶乙酸乙酯(100
∶1 ～ 1∶5),乙酸乙酯;分离得到化合物 1 ～ 8。
2.2　MTT检测化合物 1 ～ 8抗肿瘤活性 　将 5×
10
7 /L对数生长期细胞接种于 96孔板 ,每孔 180
μL。培养 24 h后 ,实验分为阴性对照组 (RPMI-
1640)、阳性药组(5Fu, 10-4mol/L)。 4个 5倍梯度
的试药组(100、20、4和 0.8 μg/mL、每组设 5个平
行孔 ,加药 。每孔 20μL。结束培养前 4h加入 5 g/
L的 MTT溶液 ,每孔 20 μL。结束培养(48 h)后 ,吸
弃上清 ,加入 DMSO,每孔 150 μL,待细胞内甲臜完
全溶解后 ,于酶标仪 490 nm处检测各孔的光密度值
(OD),计算细胞生长抑制率。连续重复试验 3次。
3　结构鉴定
化合物 1:白色晶体 , mp215 ～ 216℃, C30 H5O,
易溶于氯仿等有机溶剂 , Libermann-burchard反应为
阳性。 IR(KBr压片法 )cm-1:3 332.2, 3 066.6,
2 943.3, 2 871.4, 2 855.8, 1 638.3, 1 466.8,
1 453.3, 1 379.8, 1 043.0, 1 014.0, 800.5。1H-NMR
(500 MHz, CDCl3 )δ:4.70(1H, brs, H-29), 4.59
(1H, br.s, H-29), 3.21(1H, q, J=11.2, 4.7Hz, H-
3), 1.70(3H, s, H, H-30), 1.05(3H, s, H-26), 0.99
(3H, s, H-23), 0.97(3H, s, H-27), 0.78(3H, s, H-
24), 0.81(3H, s, H-28), 0.85(3H, s, H-25);13C-
NMR数据见表 1。以上数据与文献 〔2〕报道相符 ,故
鉴定为羽扇豆醇。
　表 1 　化合物的 13C-NMR数据
No. 1 2 3 4 5 7 8
1 38.7 38.4 38.7 37.3 37.2 38.9 38.9
2 27.5 23.9 27.4 31.6 31.7 27.5 29.9
3 79.0 81.2 79.0 71.8 71.8 78.8 77.3
4 38.9 37.8 38.9 42.3 42.3 38.8 40.9
5 55.3 55.4 55.3 140.7 140.8 55.4 141.0
6 18.3 18.2 18.3 121.7 121.7 18.4 121.6
7 34.3 34.2 34.3 31.9 31.9 33.4 33.9
8 40.9 40.9 41.0 31.9 31.9 40.9 32.0
9 50.5 50.4 50.4 50.1 50.2 50.4 50.1
10 37.2 37.1 37.3 36.5 36.5 37.2 26.1
11 21.0 21.0 20.8 21. 21.1 21.0 21.2
12 25.2 25.1 25.2 39.8 39.8 26.7 28.4
13 38.1 38.0 37.2 42.3 42.3 38.1 42.3
14 42.9 42.9 42.7 56.8 56.9 42.8 56.7
15 27.5 27.5 27.1 24.0 24.3 27.5 24.5
16 35.6 35.6 29.2 28.3 28.9 35.5 42.4
17 43.0 42.9 47.8 56.1 56.0 43.0 56.0
18 48.3 48.3 47.8 11.9 12.1 48.9 12.1
19 48.0 48.0 48.8 19.4 19.1 43.8 19.1
20 151.0 150.9 150.5 36.2 40.4 155.2 36.4
21 29.9 29.9 29.8 18.8 21.1 31.8 19.1
22 40.2 40.0 34.0 33.9 138.3 39.9 35.9
23 28.0 27.9 28.0 26.1 129.3 28.1 37.4
24 15.4 16.5 15.4 45.8 51.2 15.4 45.7
25 16.1 16.1 16.1 29.2 31.9 16.0 29.3
26 16.0 16.0 16.0 19.8 19.1 16.1 19.4
27 14.6 14.5 14.8 19.0 21.2 14.6 19.6
28 18.0 18.0 60.6 23.1 25.4 17.7 23.1
29 109.3 109.3 109.7 12.0 12.0 106.4 12.3
30 19.3 19.3 19.1 64.6
1′ 161.1 101.3
2′ 74.0
3′ 77.5
4′ 70.7
5′ 77.2
6′ 61.6
　　化合物 2:白色晶体 , mp225.6 ～ 226.4℃,易溶
于氯仿等有机溶剂 , Libermann-burchard反应为阳
性。 IR(KBr压片 法 )cm-1:3 077.8, 2 941.9,
2 899.2, 1 719.7, 1 186.9, 879.6。1H-NMR(500
·1063·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 7期 2009年 7月
MHz, CDCl3)δ:8.13(1H, s, -CHO), 4.71(1H, s, H-
29), 4.62(1H, t, J=7.7Hz, H-20), 4.59(1H, s, H-
29), 1.54(3H, s, H-30), 1.05(3H, s, H-26), 0.96
(3H, s, H-23), 0.89(3H, s, H-25), 0.88(3H, s, H-
24), 0.88(3H, s, H-27), 0.80(3H, s, H-28);13C-
NMR中烯碳的化学位移为 150.9和 109.3,因此晶
体为羽扇豆烷型化合物 , 13C-NMR数据见表 1。此
化合物的主体结构的碳信号均与文献 〔3〕报道的乙
酸羽扇酯主体结构的碳信号相符 ,所以鉴定化合物
为甲酸羽扇豆酯 。
化合物 3:白色针晶 , C30H50O2 , mp230 ～ 231℃,
溶于氯仿等有机溶剂 , Libermann-burchard反应为阳
性 。 IR(KBr压 片 法 )cm-1:3 390.4, 3 073.0,
2 941.3, 2 868.7, 1 642.8, 1 483.8, 1 375.2,
1 454.3, 1 028.5。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ:4.70
(1H, H-29α), 4.60(1H, H-29β), 3.82(1H, d, J=
10.7Hz, H-28β), 3.35(1H, d, J=10.7Hz, H-28α),
3.21(1H, dd, J=12.2, 4.4Hz, H-3), 1.70(3H, s, H-
30), 1.07(3H, s, H-26), 1.00(3H, s, H-27), 0.99
(3H, s, H-23), 0.84(3H, s, H-25), 0.78(3H, s, H-
24);13C-NMR数据见表 1。以上数据与文献〔4〕报道
相符 ,故鉴定为白桦脂醇。
化合物 4与 5:白色晶体 , Libermann-burchard反
应为阳性。 IR(KBr压片法)cm-1:3 327.9, 3 084.3,
2 943.8, 2 868.7, 1 679.3, 1 455.7, 1 379.5,
1 042.7, 13C-NMR数据见表 1。此 β-谷甾醇与豆甾
醇分别与文献〔5, 6〕报道相符 ,故鉴定为 β-谷甾醇(β-
sitosterol)与豆甾醇(Stigmasterol)的混合物 。
　　化合物 6:微黄色油状物 , C16 H22 O4。1H-NMR
(500MHz, CDCl3)δ:7.75(2H, m, J=8.3, 3.4Hz, H-
3和 H-6), 7.56(2H, m, J=4.2Hz, H-9和 H-9′),
1.01(12H, d, J=8.5Hz, H-10, H-10′, H-11′);13C-
NMR(CDCl3 , 125 MHz)δ:167.7(C-7, C-7′), 132.4
(C-1, C-2), 131.0(C-4, C-5), 128.9(C-3, C-6),
71.7(C-8 , C-8′), 27.7(C-9, C-9′), 19.2(C-10, C-
10′, C-11, C-11′)。以上数据与文献 〔7〕数据对照基
本一致 ,鉴定为邻苯二甲酸二异丁酯 。
化合物 7:白色晶体 , mp199 ～ 201℃, C30H50O2 ,
Libermann-burchard反 应 为 阳 性 。1H-NMR(500
MHz, CDCl3)δ:4.96(1H, s, H-29), 4.96(1H, s, H-
29), 4.11(2H, dd, J=14.7Hz, H-30), 3.23(1H, dd,
J=10.5Hz, H-3), 0.78(3H, s, H-24), 0.78(3H, s,
H-28), 0.83(3H, s, H-25), 0.94(3H, s, H-27), 0.98
(3H, s, H-23), 1.02(3H, s, H-26);13C-NMR数据见
表 1。以上数据与文献 〔8〕报道相符 ,故鉴定为 3 β,
30-dihydroxy-lup-20(29)ene。
化合物 8:白色粉末 , mp290 ～ 292℃, C35H55O6 ,
Libermann-burchard反 应 为 阳 性。1H-NMR(500
MHz, DMSO-d6)δ:5.33(1H, d, J=5.0 Hz, H-6),
4.36 ～ 3.10为糖基质子信号;13C-NMR数据见表 1。
以上数据与文献〔9〕报道相符 ,故鉴定为胡萝卜苷。
4　抗肿瘤活性检测
经 MTT法检测 ,化合物 7作用 48 h时 ,对 KB
细胞和 Hela细胞增殖具有一定的抑制作用 ,并呈剂
量依赖性 ,见表 2。其抑制 KB细胞和 Hela细胞增
殖的 IC50分别为 12.14 μg/mL和 6.7μg/mL。表明
化合物 7具有一定的抗肿瘤作用。
　表 2　　　　化合物 7对 KB细胞增殖 48h
的影响(OD值 , x±s, n=5)
组别 剂量 /(μg/mL) KB细胞(OD值) Hela细胞(OD值)
阴性对照组 0.341±0.008 1.301±0.074
阳性药组(5Fu) 0.105±0.084 0.411±0.095
化合物 4 100 0.111±0.013＊＊ 0.424±0.081＊＊
20 0.145±0.019＊＊ 0.492±0.055＊＊
4 0.208±0.019＊＊ 0.623±0.056＊＊
0.8 0.254±0.013＊ 0.942±0.108＊＊
　　注:与阴性对照组比 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
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