全 文 ：第 29卷第 4期
2009年 8月
林　产　化　学　与　工　业
ChemistryandIndustryofForestProducts
Vol.29 No.4
Aug.2009
狭叶虎皮楠黄酮类物质的分离 、鉴定及
抗氧化活性研究
　　收稿日期:2008-10-13
　　作者简介:许明峰(1981-),男 ,浙江长兴人 ,博士生 ,研究方向:天然活性物质
　＊通讯作者:王奎武 ,副教授 ,博士 ,主要从事天然产物研究。
XUMing-feng　　
许明峰 , 沈莲清 , 王向阳 , 王奎武＊
(浙江工商大学食品与生物工程学院 , 浙江 杭州 310035)
摘　要:　研究了狭叶虎皮楠中的黄酮类化合物 , 利用硅胶柱 、SephadexLH-20和制备型液相色谱
(pre-HPLC)从中分离得到 4个黄酮类单体 , 利用质谱及核磁共振进行分析鉴定 ,得出化合物分别
为:芹菜素(Ⅰ)、木犀草素(Ⅱ)、柚皮苷(Ⅲ)和葛根素(Ⅳ), 并对它们的抗氧化活性进行了比较 ,经检
索这 4种化合物均为首次从狭叶虎皮楠中提取分离得到。
关键词:　狭叶虎皮楠;黄酮;抗氧化活性
中图分类号:TQ351.0　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:0253-2417(2009)04-0110-03
Purification, IdentificationandAntioxidantActivityof
FlavonoidsfromDaphniphylumangustifoliumHutch.
XUMing-feng, SHENLian-qing, WANGXiang-yang, WANGKui-wu
(CollegeofFoodScienceandBiotechnologyEngineering, ZhejiangGongshangUniversity, Hangzhou310035, China)
Abstract:FlavonoidsfromDaphniphylumangustifoliumHutch.werestudied.Fourcompoundswereisolatedbysilicagelcolumn
chromatographyandpre-HPLC.Theywereidentifiedtobeapigenin(Ⅰ), luteolin(Ⅱ), naringin(Ⅲ), puerarin(Ⅳ)byMSand
NMR, alsotheirantioxidantactivitywerecompared.AlofthemarefirstisolatedfromD.angustifolium.
Keywords:DaphniphyllumangustifoliumHutch.;flavone;antioxidantactivity
狭叶虎皮楠(DaphniphylumangustifoliumHutch.)为虎皮楠科常绿小乔木 ,主要分布在湖北和四川
等地;生于海拔 1 600～2 300m的阔叶林中 ,花期 4月 ,果期 10～11月 [ 1] 。该科植物在传统中药中主要有
愈合和消炎的作用 ,可以用来治疗哮喘 、风湿 、发热 、流行性感冒 、蛇咬伤等[ 2] ,在现代的临床运用中具
有治疗肠胃炎 、促进消化 、治疗湿疹等作用 ,但同时也是一种毒药 [ 3] ,所以对其化学成分的研究具有重
要意义 。目前对于狭叶虎皮楠的研究还很少 ,对其中的有效成分研究不够透彻。本实验对狭叶虎皮楠
中的化学成分及它们的抗氧化活性进行了研究 ,为狭叶虎皮楠的进一步开发利用提供了一定参考价值。
1　材料与方法
1.1　仪器与材料
BrukerAVANCEⅢ 500型核磁共振仪 ,内标为 TMS, BrukerEsquire3000 plus型电喷雾质谱仪
(ESI-MS);制备型 HPLC:(JALLC-9103, JAIGELODS-BP-30 30mm×250mm);柱色谱用硅胶 ,青岛
海洋化工厂;SephadexLH-20, Pharmacia公司 , GF254高效薄层板 , 烟台汇友硅胶开发有限公司;液
相所用试剂为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 。材料:狭叶虎皮楠 , 2005年 11月购于重庆市药物种植研
究所 ,由浙江大学吴斌博士鉴定为 D.angustifoliumHutch.。
第 4期 许明峰 , 等:狭叶虎皮楠黄酮类物质的分离 、鉴定及抗氧化活性研究 111　
1.2　实验方法
1.2.1　提取 、分离及纯化　提取分离及纯化流程:狭叶虎皮楠藤茎 ※阴干 ※捣碎 ※乙醇提取 10h※
过滤 ※滤液浓缩 ※石油醚萃取脱脂 ※水相加醋酸乙酯萃取 ※水相加正丁醇萃取 ※减压浓缩至无
醇味。
醋酸乙酯相 ※硅胶柱色谱 ※收集不同梯度洗脱液细分 ※SephadexLH-20※制备型液相色谱 ※
得到晶体Ⅰ和Ⅱ 。
正丁醇相 ※硅胶柱色谱 ※收集不同梯度洗脱液细分 ※SephadexLH-20※制备型液相色谱 ※得
到晶体 Ⅲ和Ⅳ。
1.2.2　抗氧化能力测定　本实验采用 DPPH法测定样品清除自由基活性 ,实验方法参考文献 [ 4] ,并
作相应的修改 ,以 BHT作阳性对照。样品对 DPPH·的清除能力(As)用以下公式计算:
As=[ 1-(Ai-Aj)/A0 ] ×100%
式中:A0—DPPH与溶剂混合液的吸光度;Ai—DPPH与样品溶液反应后的吸光度;Aj—样品溶液与溶
剂混合液的吸光度。
将试验重复 3次 ,求得清除率的平均值。
2　结果与讨论
2.1　化合物鉴定
化合物 Ⅰ:淡黄色粉末 , 盐酸-镁粉反应呈阳性 ,易溶于甲醇。ESI-MS(m/z):269[ M-H] -;1HNMR
(DMSO-d6 , 500MHz)δ:6.76(1H, s, H-3), 6.17(1H, s, H-6), 6.45(1H, s, H-8), 7.90 (2H, d, J=
9.0Hz, H-12, H-16), 6.90(2H, d, J=9.0Hz, H-13, H-15);13CNMR(DMSO-d6 , 125MHz)δ:166.0
(C-2), 104.1(C-3), 183.0(C-4), 158.7(C-5), 95.4(C-6), 65.0(C-7), 100.3(C-8), 162.6(C-9),
104.8(C-10), 122.7(C-1), 129.8(C-2), 117.3(C-3), 162.8(C-4), 117.3(C-5), 129.8(C-6),参考
文献 [ 5]可以得出化合物Ⅰ为芹菜素 。
化合物 Ⅱ:淡黄色粉末 ,盐酸-镁粉反应呈阳性 ,易溶于甲醇。 ESI-MS(m/z):285[ M-H]-;1HNMR
(DMSO-d6 , 500MHz)δ:6.66(1H, s, H-3), 6.19(1H, d, J=2.5, H-6), 6.44(1H, d, J=10, H-8), 7.42
(1H, d, J=10Hz, H-2), 6.88(1H, d, J=10Hz, H-5), 7.40(1H, d, J=10Hz, H-6);13CNMR(DMSO-
d6 , 125MHz)δ:161.5(C-2), 102.9(C-3), 181.7(C-4), 163.9(C-5), 98.9(C-6), 164.1(C-7), 93.9
(C-8), 157.3(C-9), 103.7(C-10), 121.5(C-1), 145.8(C-2), 119.0(C-3), 116.0(C-4), 149.7
(C-5), 113.4(C-6),参考文献 [ 6]可以得出化合物Ⅱ为木犀草素 。
化合物 Ⅲ:淡黄色粉末 , Molish反应呈阳性 , 易溶于甲醇 。 ESI-MS(m/z):579[ M-H] -;1HNMR
(DMSO-d6 , 500MHz)δ:5.5(1H, d, J=8.5Hz, H-2), 3.19and3.20 (2H, s, H-3), 6.12(1H, s, H-6),
6.09(1H, s, H-8), 7.33(2H, d, H-12, H-16), 6.81(2H, d, H-13, H-15 );13CNMR(DMSO-d6 ,
125MHz)δ:78.8(C-2), 42.3 (C-3), 197.3(C-4), 163.1 (C-5), 96.5 (C-6), 165.0(C-7), 95.3
(C-8), 163.0(C-9), 103.5(C-10), 128.2(C-11), 128.6(C-12), 115.4(C-13), 158.0(C-14), 115.4
(C-15), 128.6(C-16), 97.6(C-1), 76.4(C-2), 77.3 (C-3), 70.5 (C-4), 77.0(C-5), 60.6(C-6),
100.6(C-1), 70.6(C-2), 69.7(C-3), 72.0(C-4), 68.4(C-5), 18.2(C-6),参考文献 [ 7]可以得出化
合物Ⅲ为柚皮苷 。
化合物Ⅳ:白色粉末 , Molish反应呈阳性 ,易溶于甲醇 。ESI-MS(m/z):415[ M-H] -; 1HNMR
(DMSO-d6 , 500MHz)δ:8.3(1H, s, H-2), 7.9(1H, d, J=8.5, H-5), 7.4(2H, d, J=8.0, H-2, 6), 7.0
(1H, d, J=8.5, H-6), 6.8 (2H, d, J=8.0 , H-3, 5), 4.8 (1H, d, J=10, H-1);13CNMR(DMSO-d6 ,
125MHz)δ:153.1(C-2), 123.0 (C-3), 175.3 (C-4), 126.7 (C-5), 115.4 (C-6), 161.5 (C-7),
113.1(C-8), 157.6(C-9), 117.3(C-10), 123.5 (C-1), 130.4 (C-2), 115.4 (C-3), 157.6 (C-4),
112　 林　产　化　学　与　工　业 第 29卷
115.4(C-5), 130.4(C-6), 73.9 (C-1), 71.2 (C-2), 79.2(C-3), 71.0(C-4), 82.2(C-5), 61.8
(C-6),参考文献 [ 8]可以得出化合物Ⅳ为葛根素。
2.2　抗氧化研究结果与讨论
表 1列出了狭叶虎皮楠中黄酮类化合物对 DPPH·的清除率 。
表 1　各黄酮单体对 DPPH·的清除率
Table1 DPPHfreeradical-scavengingactivityofflavonoids
样品
samples
不同质量浓度的清除率 removalrateatdiferentmassconcn./%
10mg/L 25mg/L 50mg/L 75mg/L 100mg/L 150mg/L
BHT 22.5±1.4 40.1±1.5 65.2±1.7 66.5±1.6 66.5±1.6 67.5±1.6
Ⅰ 30.3±1.3 72.0±1.3 93.1±1.5 92.8±1.4 93.5±1.6 93.7±1.3
Ⅱ 34.7±1.5 73.9±1.6 94.2±1.4 95.3±1.5 95.2±1.4 94.9±1.4
Ⅳ 17.0±1.6 59.2±1.6 77.3±1.4 77.6±1.7 78.0±1.6 79.1±1.5
Ⅲ 21.7±1.6 62.6±1.3 78.0±1.4 78.1±1.5 79.1±1.5 79.2±1.6
由表 1可以看出 , 在 10～ 50mg/L的范围内 ,作为对照的 BHT,对 DPPH·的清除率为 22.5%～
65.2%,当质量浓度达到 50mg/L时 ,其对 DPPH·的清除率基本上达到最大值 。在所选的质量浓度范
围内测试样品对 DPPH·的清除率为 17.0%～95.3%,并且在低质量浓度下随着质量浓度的升高 ,测试
样品 DPPH·的清除能力显著增强 ,在较高质量浓度下测试样品对 DPPH·的清除能力明显高于 BHT,
DPPH·的清除率可达 80%以上。由此可见 , 4个黄酮单体都具有很强的清除 DPPH·能力 ,且清除能
力大小为:Ⅱ >Ⅰ >Ⅳ >Ⅲ 。
3　结 论
从狭叶虎皮楠中分离出 4个黄酮类单体物质 ,通过对其进行分析 ,确定分别是芹菜素(Ⅰ)、木犀草
素(Ⅱ)、柚皮苷(Ⅲ)、葛根素(Ⅳ),且清除 DPPH·能力大小为:Ⅱ >Ⅰ >Ⅳ >Ⅲ ,经检索 4种物质均为首
次从狭叶虎皮楠中得到。
参考文献:
[ 1]国家林业局国有林场 ,林木种苗工作总站.中国木本植物种子 [ M].北京:中国林业出版社 , 2001:149.
[ 2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 [ M] .北京:科学出版社 , 1980, 45:1.
[ 3] GAMEZEJC, LUYENGIL, LEESK, etal.AntioxidantflavonoidglycosidesfromDaphniphylumcalycinum[ J] .JNatProd, 1998, 61:706-
709.
[ 4]刘本国 ,战宇 ,宁正祥 ,等.亮叶杨桶叶黄酮类提取物的鉴定及其抗氧化活性研究 [ J] .林产化学与工业 , 2008, 28(1):6-10.
[ 5] LISJ, ZHAOYY, WANGB, etal.SeparationandidentificationoftheflavonoidsfromBuddleiaoficinalisMaxim.[ J] .ActaPharmaceutica
Sinica, 1996, 31(11):849-853.
[ 6]王立 ,姚惠源 ,陈正行.乌饭树树叶中黄酮类物质的分离 、纯化及结构鉴定 [ J] .林产化学与工业 , 2007, 27(3):121-123.
[ 7] NEGIPS, JAYAPRAKASHAGK.Antibacterialactivityofgrapefruit(Citrusparadisi)peelextracts[ J] .EurFoodResTechnol, 2001, 213:
484-487.
[ 8] CHENGG, BAIYJ, ZHAOYY, etal.FlavonoidsfromZiziphusjujubaMil.var.spinosa[ J].Tetrahedron, 2000, 56:8915-8919.