全 文 ：第 3 0卷第3期
2 0 1 3 年 3 月
精 细 化 工
FINE CHEMICALS
Vol ． 3 0，No ． 3
Mar． 2 0 1 3
中药现代化技术
收稿日期:2012 － 11 － 26;定用日期:2012 － 12 － 27
基金项目:海南省自然科学基金(309001) ;海南大学植物学国家级重点学科资助
作者简介:刘平怀(1967 －) ，男，教授，药学研究员。联系人:张 森(1988 －) ，男，硕士研究生，E － mail:liqvanzs@ 163． com。
琼榄提取物的抗氧化及抗菌活性
刘平怀，张 森* ，汪春牛，陈德力
(海南大学 材料与化工学院，海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室，海南 海口 570228)
摘要:为研究琼榄的药用活性成分，更好地开发和利用琼榄资源，对琼榄根、茎、叶的 5 种不同溶剂提取物分别采
用清除 DPPH自由基法和滤纸片扩散法进行抗氧化及抗菌活性研究。结果表明，琼榄叶的乙酸乙酯提取物(L-
EtOAc)清除 DPPH自由基的 IC50最小，为 154. 1 mg /L，是 15 组提取样品中清除自由基活性最强的部位。琼榄
根、茎、叶的 15 组提取物对 5 种供试菌均具有不同程度的抑菌活性，且以琼榄叶的乙酸乙酯提取部位对 5 种供
试菌的抑菌作用均较强，特别是对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑制作用和阳性对照品头孢他啶
的抑菌作用接近。因此，琼榄叶部位的抗氧化和抗菌活性最强，且活性物质在乙酸乙酯部位，L-EtOAc 为有效提
取部位。
关键词:琼榄;抗氧化活性;抗菌活性;中药现代化技术
中图分类号:Q949． 755． 2 文献标识码:A 文章编号:1003 － 5214(2013)03 － 0281 － 05
Antioxidant and Antimicrobial Activity of the Extracts from
Gonocaryum lobbianum(Miers)
LIU Ping-huai，ZHANG Sen* ，WANG Chun-niu，CHEN De-li
(College of Materials and Chemical Engineering，Hainan University，Ministry of Education Key Laboratory of Protection
and Development Utilization of Tropical Crop Germplasm Resources，Haikou 570228，Hainan，China)
Abstract:In order to study the medicinal active ingredients of Gonocaryum lobbianum(Miers)Kurz
and better promote the development and utilization of the resource，the antioxidant and antibacterial
activity of the extracts from G． lobbianum(Miers)Kurz roots，stems and leaves with five different kinds
of solvents are researched in this paper． The antioxidant activity is determined by method of DPPH·
and the antibacterial activity is tested by filter paper tablet diffusion method against five kinds of
microorganism strains． The results show that the IC50 value of scavenging DPPH· of ethyl acetate
(EtOAc)extract from the leaves(L-EtOAc)is 154. 1 mg /L，which is minimum． Therefore，L-EtOAc
has the strongest antioxidant activity． All the fifteen extracts from G． lobbianum(Miers)Kurz roots，
stems and leaves show different antibacterial activity on the tested bacteria． However，L-EtOAc has the
strongest inhibitory activity on the tested bacteria，especially on the Staphylococcus aureus，Escherichia
Coli，Pseudomonas aeruginosa，which is similar to the positive drugs ceftazidime． The antioxidant and
antibacterial activity of EtOAc extracts from G． lobbianum(Miers)Kurz leaves are the strongest．
Key words:Gonocaryum lobbianum (Miers) Kurz;antioxidant activity;antibacterial activity;
modernization technology of traditional Chinese medicines
Foundation items:Supported by the Natural Science Foundation of Hainan Province(309001) ;Hainan
University Botany National Key Disciplines Funding
DOI:10.13550/j.jxhg.2013.03.002
琼榄〔Gonocaryum lobbianum(Miers)Kurz〕，为
茶茱萸科(Icacinaceae) ，琼榄属(Gonocaryum)。全
世界有 9 种，分布于亚洲热带地区，我国有琼榄和台
湾琼榄〔Gonocaryum calleryanum(Bail)Becc〕两种，
产于海南、云南、广东和台湾。目前，国内外对琼榄
的研究较少，已有的研究主要有 Kaneko T［1］和 Chan
Y Y等［2］分别从台湾琼榄(G． calleryanum)中分离得
到 11 种和 16 种化合物，但对其生物活性未作任何
研究。据报道，琼榄具有清热解毒、散郁结的功效，
海南民间用其治疗黄疸型肝炎、胸肋闷痛等［3］，但
对其具体的药用成分和药理作用尚不清楚。研究表
明，人体内自由基过多会导致蛋白质、核酸、多糖及
膜多聚不饱和脂肪酸等生物大分子发生过氧化反
应［4］，进而引起分子、细胞和组织水平的损伤，此类
毒性反应被认为与机体炎症(如肝炎等)、衰老、肿
瘤、免疫、心血管等疾病有关［5］。为了筛选出琼榄
抗氧化和抗菌活性较强部位以及进一步研究其活性
物质成分及药理作用，本实验采用 DPPH 法和滤纸
片扩散法，对琼榄根、茎、叶 3 个部位 5 种不同溶剂
提取的 15 组提取物的抗氧化和抗菌活性进行了初
步研究，为深入挖掘琼榄的药用价值以及充分开发
和利用琼榄资源提供科学依据。
1 实验部分
1. 1 材料
原料:琼榄根、茎、叶采于海南陵水黎族自治县
吊罗山国家级自然保护区，经中国医学科学院药用
植物研究所海南分所冯锦东研究员鉴定为 G．
lobbianum(Miers)Kurz，自然阴干后粉碎成粉末。
菌种:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，
编号:GIM1. 221)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis，编
号:GIMT1. 073)、大肠杆菌(Escherichia Coli，编号:
GIM1. 355)及 铜 绿 假 单 胞 菌 (Pseudomonas
aeruginosa，编号:GIMT1. 096)均购自广东省微生物
菌种保藏中心，白色念珠菌(Candida albicans，编号:
HN200907)由海南大学生物工程综合实验室提供。
试剂:营养琼脂、营养肉汤、Muller-Hinton 琼脂
均购自北京陆桥技术有限责任公司，沙氏葡萄糖琼
脂购自广东环凯微生物科技有限公司。乙醇、石油
醚、乙酸乙酯均为工业品重蒸;抗坏血酸(Vc)、2，6-
二叔丁基对甲酚(BHT)等均为国产 AR。
1. 2 方法
1. 2. 1 5 种溶剂提取琼榄中活性物质
将琼榄根(茎、叶)粉碎样品采用 5 倍体积酒精
连续浸泡提取 3 次，每次分别为 7 d、7 d 和 6 d。所
得浸提液经过滤浓缩得乙醇浸膏。浸膏经 2 ～ 3 倍
去离子水分散，得其水分散液，再依次采用等体积的
石油醚(MSO，沸程 60 ～ 90 ℃)、乙酸乙酯(EtOAc)
和正丁醇(BuOH)萃取 4 次。使用旋转蒸发仪浓
缩，得各提取部位浸膏，其命名如表 1 所示。
表 1 琼榄各部位不同溶剂提取物样品命名
Table 1 Names of extracts from different parts of G． lobbianum
(Miers)Kurz by different solvents
琼榄样品 根(Root) 茎(Stem) 叶(Leaf)
乙醇浸膏 R-EtOH S-EtOH L-EtOH
石油醚萃取物 R-MSO S-MSO L-MSO
乙酸乙酯萃取物 R-EtOAc S-EtOAc L-EtOAc
正丁醇萃取物 R-BuOH S-BuOH L-BuOH
水提液 R-Water S-Water L-Water
1. 2. 2 DPPH法测定抗氧化活性
取浸膏(表 1) ，有机相采用甲醇，水相采用去离
子水，依次稀释成5 000、2 500、1 250、625、312. 5、
156. 25 mg /L的系列质量浓度溶液。取蒸馏水，配
制系列质量浓度为 40、30、20、10、5、1 mg /L 的阳性
对照品抗坏血酸(Vc)和质量浓度为 100、80、60、40、
20、10 mg /L的 2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)。
参考刘平怀等［6 － 7］的方法，在 96 微孔板中按表
2 进行加样，分别于 517 nm 处测定 A0、Ai、Aj 在 30
min后的吸光值，每个样品做 3 个平行，取平均值，
按式(1)计算 DPPH 清除率(S /%)。用 Origin 8. 0
绘制各样品质量浓度与清除率的关系图，并采用药
物代谢动力学模型进行拟合，计算不同样品清除
DPPH自由基为 50%时的质量浓度(记作 IC50)。
S /% =〔1 －(Ai － Aj)/A0〕× 100 (1)
表 2 DPPH法加样参数表
Table 2 Parameters of sample addition with DPPH method
吸光值 加样参数
A0 100 μL 0. 1 mmol /L DPPH溶液 + 100 μL溶解样品的溶剂(甲醇或水)
Ai 100 μL 0. 1 mmol /L DPPH溶液 + 100 μL样品溶液
Aj 100 μL DPPH溶液的溶剂(甲醇)+ 100 μL样品溶液
1. 2. 3 滤纸片扩散法测定琼榄各提取样品抗菌活性
取浸膏，采用质量分数 5% 的二甲基亚砜
(DMSO)配制成质量浓度为 30 g /L的溶液。阳性对
照品头孢他啶和硫酸庆大霉素采用无菌水配制成质
量浓度为 1. 5 g /L的溶液。供试菌采用斜面进行活
化，细菌于 37 ℃培养 24 h，真菌于 37 ℃培养 48 h，
活化传代 2 次后，再利用麦氏比浊管在无菌条件下
用生理盐水将接种液调至 0. 5 麦氏浊度，即 1. 5 ×
108 CFU /mL的菌悬液。
取直径 6 mm 的无菌圆形滤纸片，采用 DMSO
配制的系列质量浓度琼榄提取样品溶液浸泡 24 h。
·282· 精 细 化 工 FINE CHEMICALS 第 30 卷
吸取 200 μL供试菌悬液均匀地涂布于平板上，将浸
泡过的药敏纸片贴于培养基上，每块培养皿贴 4 片，
实验样品分别置于适宜温度下培养(同活化培养温
度) ，观察并测定其抑菌圈直径，分析所有处理样品
的抑菌效果。头孢他啶或硫酸庆大霉素为阳性对
照，质量分数 5% DMSO 溶液为空白对照。各处理
样品做 4 次平行实验，结果取其平均值。
2 结果与分析
2. 1 各提取样品抗氧化活性
DPPH法测定琼榄各部位体外抗氧化活性，采
用软件 Origin 8. 0 对琼榄根(茎、叶)不同溶剂提取
样品以及 Vc和 BHT在不同质量浓度下对 DPPH自
由基清除率的关系进行药物代谢动力学函数拟合，
结果见图 1 ～ 4，其相关系数 R均大于 0. 9，具有很好
的相关性。说明各样品对 DPPH自由基的清除率能
很好地符合药物代谢动力学模型。
由图 1 可以看出，对照品 Vc 和 BHT 对 DPPH
自由基的清除率和对照品质量浓度存在很好的相关
性，且与对照品质量浓度具有极显著(P ＜ 0. 01)的
依赖性。从图 2 可以看出，随着琼榄根各提取样品
质量浓度的增加，对 DPPH 自由基的清除率也在逐
渐增加，当琼榄根各提取样品的质量浓度超过 10
g /L后，其清除率趋于平衡。说明琼榄根各提取样品
在一定质量浓度范围内对 DPPH的清除效应具有剂
量依赖性。同理，从图 3 和图 4 可以看出，琼榄茎、
叶各提取样品在一定质量浓度范围内对 DPPH清除
能力都具有剂量依赖性。
由图 5 可见，以 IC50值为指标，从琼榄的提取部
位考虑，由于 L-EtOAc ＜ S-EtOAc ＜ R-EtOAc，L-EtOH
＜ S-EtOH ＜ R-EtOH，L-MSO ＜ S-MSO ＜ R-MSO，L-
Water ＜ S-Water ＜ R-Water，所以除正丁醇提取样品
外，其余各溶剂提取样品中，均以琼榄叶的 IC50值最
小，抗氧化活性最强，茎次之，根的抗氧化活性最差;
从提取溶剂考虑，由于 L-EtOAc ＜ L-EtOH ＜ L-MSO
＜ L-Water ＜ L-BuOH，S-EtOAc ＜ S-EtOH ＜ S-BuOH ＜
S-Water ＜ S-MSO，R-EtOAc ＜ R-EtOH ＜ R-BuOH ＜ R-
·382·第 3 期 刘平怀，等:琼榄提取物的抗氧化及抗菌活性
MSO ＜ R-Water，所以琼榄根、茎、叶各部位均以乙酸
乙酯(EtOAc)和乙醇(EtOH)从琼榄各部位提取的
各样品的抗氧化活性较其他几种溶剂强。综合考
虑，15 种琼榄提取样品与对照品 Vc 和 BHT 对
DPPH自由基的 IC50值大小依次为:Vc ＜ BHT ＜ L-
EtOAc ＜ L-EtOH ＜ S-EtOAc ＜ S-EtOH ＜ R-EtOAc ＜ L-
MSO ＜ R-EtOH ＜ L-Water ＜ R-BuOH ＜ S-BuOH ＜ S-
Water ＜ S-MSO ＜ L-BuOH ＜ R-MSO ＜ R-Water。尽管
所有提取样品的 IC50值均比阳性对照品高，但在 15
个提取样品中以琼榄叶的乙酸乙酯提取部位(L-
EtOAc)的 IC50值最小(154. 1 mg /L) ，清除 DPPH 自
由基的活性最强。
图 5 琼榄各部位不同溶剂提取样品清除 DPPH 自由基的
IC50值
Fig． 5 IC50 values of scavenging DPPH free radical of samples
of extracts from different parts of G． lobbianum(Miers)
Kurz with different solvents
2. 2 提取样品抗菌活性
表 3 结果表明，15 组琼榄提取样品都具有不同
程度的抑菌活性，在金黄色葡萄球菌的抑菌圈测试
上，L-EtOAc部位表现出最强的抑菌活性，效果接近
于阳性对照品头孢他啶;R-EtOAc，S-BuOH，L-
Water，L-EtOH 部位对金黄色葡萄球菌亦有较强的
抑制活性。在对枯草芽孢杆菌的抑菌测试上，仅 L-
EtOAc部位表现出较强的抑菌活性，其他部位样品
对其抑菌效果都较弱。在对大肠杆菌的抑菌圈测试
上，大多数样品均表现出较强的抑菌活性，但 R-
MSO，R-BuOH，R-Water，S-MSO，L-MSO，L-Water 部
位抑菌活性较弱。在对铜绿假单孢菌的抑制上，各
提取样品除 L-EtOAc 表现出强抑菌活性外，其他部
位均表现出弱抑菌活性。在对白色念珠菌的抑制
上，同样仅是 L-EtOAc部位有较强的抑菌活性，其他
部位则表现出弱抑菌活性。从琼榄提取物的 15 组
样品的抑菌效果看，L-EtOAc 部位对供试菌的抑制
作用最强，对部分菌的抑菌活性和阳性对照品接近。
从对 5 种供试菌的抑制效果来看，15 组样品对大肠
杆菌的抑制效果较强，均强于其他 4 种供试菌。
表 3 30 g /L的样品与 1. 5 g /L阳性药物对供试菌的抑菌圈
Table 3 Antibacterial circles of samples(30 g /L)and positive
drugs(1. 5 g /L)on tested bacteria
供试菌
革兰氏阳性菌
金黄色葡
萄球菌
枯草芽
孢杆菌
革兰氏阴性菌
大肠
杆菌
铜绿假
单孢菌
真菌
白色
念珠菌
R-MSO + + + + +
R-EtOAc + + + + + + +
R-BuOH + + + + +
R-Water + + + + +
R-EtOH + + + + + +
S-MSO + + + + +
S-EtOAc + + + + + +
S-BuOH + + + + + + +
S-Water + + + + + +
S-EtOH + + + + + +
L-MSO + + + + +
L-EtOAc + + + + + + + + + + + + +
L-BuOH + + + + + + +
L-Water + + + + + +
L-EtOH + + + + + + +
头孢他啶 + + + + + + + + + + + + NT
庆大霉素 NT NT NT NT + + +
注:NT表示“NO TEST”，说明此阳性对照品不作此菌的对照;“ +”为抑菌圈直径小于 10 mm，表示
抗菌活性较弱;“ + +”为抑菌圈直径在 10 ～ 15 mm，表示抗菌活性较强;“ + + +”为抑菌圈直径超过 15
mm，表示抗菌活性强。
3 结论
(1)采用 DPPH法，以 IC50值为指标分别对琼榄
根、茎、叶的不同极性溶剂提取物的抗氧化活性进行
评价，结果表明，琼榄叶中的抗氧化活性较强，其中
以琼榄叶的乙酸乙酯提取部位(L-EtOAc)的 IC50值
最小(154. 1 mg /L) ，清除 DPPH 自由基的活性最
强。
(2)抗菌实验表明，琼榄根、茎、叶的 15 组提取
样品对 5 种供试菌均具有不同程度的抑菌活性，相
比其他 14 组提取样品，琼榄叶的乙酸乙酯提取部位
(L-EtOAc)对 5 种供试菌均具有较强的抑制作用，
特别对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的
抑制作用最强，和阳性对照品头孢他啶的抑菌作用
接近。说明琼榄叶中含有某些抑菌活性较强的物
质，且其在中低极性的乙酸乙酯中的溶解性较其他
4 种溶剂好。
综上所述，琼榄叶的乙酸乙酯提取部位(L-
EtOAc)具有较强的抗氧化和抗菌活性，可以进一步
分离提取其中的活性成分，将其开发成具有抗氧化、
抗菌性的药品或保健品。 (下转第 287 页)
·482· 精 细 化 工 FINE CHEMICALS 第 30 卷
为(4. 26 ± 0. 14)mg /g，末花期的槟榔花槟榔碱含
量为(2. 02 ± 0. 16)mg /g。通过 SAS8. 0 duncan 统
计分析发现，不同月份采集的槟榔花中槟榔碱的含
量的差异极显著(P ＜ 0. 01)。说明不同花期的槟榔
花其槟榔碱的含量是不断变化的。
3 结论
本实验利用高效液相色谱对不同时期槟榔花中
的槟榔碱含量进行测定，获得初花期、盛花期和末花
期的槟榔花中槟榔碱的含量分别为(4. 96 ± 0. 067)
mg /g、(4. 26 ± 0. 14)mg /g、(2. 02 ± 0. 16)mg /g，证
明槟榔碱含量在槟榔花的不同花期是一个变化的过
程，随着时间的推移，槟榔碱含量不断降低。
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·782·第 3 期 战晴晴，等:不同花期槟榔花槟榔碱的含量分析