全 文 ：中西医结合肝病杂志 20 0 2年第 1 2卷第 6 期 .3 5 5 .
余甘子抗慢性肝损伤性肝纤维化的实验研究
姿 李 萍 谢金鲜 林启云 李爱媛
广西中医学院 (南宁 , 530 00 1 )
摘 要 目的 : 观察余甘子 ( hP 皿坛爪h us 曰刀 b l ica L . ) 抗慢性肝损伤性肝纤维化的作用 , 并揭示其作用机理 。 方
法 : 采用四氛化碳 ( CC肠) 建立小鼠肝纤维化模型 , 设余甘子水提醇沉物高 、 中 、 小 .hJ 量组并与秋水仙碱组作对照 。
观察小鼠血清丙氛酸转氨酶 (八 L T ) 、 天 门冬氨酸转氛酶 ( A S T ) 、 总蛋 白 ( T p ) 、 白蛋 白 (月b) 、 肝组织 弃脯氛 酸
( H yP ) 及肝脏系数 、 肝脏组织病理改变 。 结果 : 各剂量余甘子可显著降低小 鼠肝脏 H yP 含量及血清 A L T 、 A S T 的活
性 , 抑制月b 和 A浅玉比值的降低 , 减轻肝组织病理损害程度 , 其作用呈 剂量依赖性 。 结论 : 余甘子对实验性慢性肝损
伤具有保护肝细胞 , 减少肝损伤 , 抗肝纤维化作用 。
关键词 余甘子 肝纤维化 实验研究
肝纤维化是大多数慢性肝病所共有的病理特征 ,
是进一步向肝硬化发展的主要中间环节 。 所以寻找防
治肝纤维化的药物 , 是当前医药学研究的特点 。 余甘
子 (月逮叫范nt h us e m bl i ca l , ) , 又名庵摩勒 、 油甘子 、
橄榄 、 牛甘果 , 为民间药 食两用佳品 , 具有 清热凉
血 , 消食健 胃 , 生津止咳之功效 , 在民间常用来治疗
消化不良 , 腹泻 , 咳嗽 , 肝炎 , 腹水 , 便秘 , 肿瘤 ,
发热 , 皮肤 病 , 高 血 压 , 胆囊 炎 及癌 症 等疾病 lj[ 。
国内外现代药理学研究 已从抗炎 、 抗菌 、 抗病毒 、 抗
衰老 、 抗癌 、 抗肿瘤 、 抗突变 、 抗高血 压 、 降低 血
脂 、 解毒〔2一 4 〕等方 面验证了余甘子 的治疗功效 , 但
尚未见有余甘子抗肝损伤作用文献报道 。 为探讨余甘
子抗慢性肝损伤性纤维化的作用及机理 , 我们做了如
下的研究 , 现报告如下 。
1 材料与方法
1
.
1 动物 昆明种小 白鼠 , 体重 2 0一 2 5 9 , 雌雄兼
用 , 本院动物实验中心提供 , 桂医动字第 1 1 0 0 4 号 。
1
.
2 药物 新鲜余甘子 , 清水洗净 , 去核取肉 , 加
10 倍果肉量蒸馏水浸泡 3Om in , 煎煮两次 , 过滤 , 合 ·
并滤液 , 浓缩至小体积 , 加人 4% 明胶水溶液 , 不断
搅拌 , 加 热 , 过 滤 , 去 渣 , 用 3 倍 95 % 乙 醇沉 淀
2 4 h
, 过滤 , 去渣 , 浓缩至 2 9m/ l 分装备用 , 临用前
用蒸馏水稀释至所需浓度 。 秋水仙碱片为昆明制药有
限公司产品 , 批号 2 0 0 0 1 1 16 。
1
.
3 试 剂 C毛坛为北 京 化工 厂产 品 , A R , 批 号
94 0 10 2 ; -L H yP 中国科学 院上海 生物化学研究所提
供 , 批号 9 5 0 501 ; A L T 、 A S T 试剂盒 , 由上海 申能
生 物 技 术 有 限 公 司 提 供 , 批 号分 别 为 9 8 0 90 3 、
98 07 12 ; 月 b 、 T P 试剂盒 , 由北京化工厂临床试剂分
厂提供 , 批号分别为 9 7 0 6 2 2 、 9 80 1 12 。
1
.
4 分组及给药方法阁 取小 鼠 60 只 , 随机分为 6
组 , 每组 10 只 。 1 一 3 组 为余 甘 子水 提 醇沉物高 、
中 、 低剂量组 ( 7 . 0 、 3 . 5 、 1 . 8 9人 g ) ; 4 组为秋水仙
碱阳性对照组 ( 0 . 25 gm 众 g ) ; 5 组 为 CC】4 模型对 照
组 ; 6 组为正常对照组 。 1 一 5 组 小鼠以 40 % C 从花生油溶液灌 胃 ( 19 ) , 每次 0 . 04 m l / 只 , 2 次 /周 , 总
共 6 周 。 6 组小 鼠 馆等量花生油 。 于第 7 周开始 , 1
一 4 组 ig 给药 , 1 次 d/ , 5 一 6 组则 19 蒸馏水 (20 ml /
k g )
。 至第 12 周末次给药后 h1 , 摘眼球采血 , 取肝
脏备检 。
1
.
5 检测项 目
1
.
5
.
1 血清学指标及检测方法 : 用 T 13A ~ 120 型全 自
动生化分析 仪分别测定血清 A l丁T (金氏法 ) 、 A S T
(金 氏法 ) 、 T P (双缩脉法 ) 及 川b . (澳 甲酚绿 法 ) ,
并计算 A G/ 比值 。
1
.
5
.
2 取肝脏称重 , 计算肝 脏系数 : 肝脏 系数 二
(肝脏重量 /体重 ) 火 10 0 % 。
1
.
5
.
3 H卵 含量测定 : 每只鼠取 1 块肝右叶用 电动
捣碎机研磨制成 10 % 的肝匀浆 , 按文献囚 测定肝组
织水解后 H yP 的含量 , 并计算胶原蛋 白的含量 。
1
.
5
.
4 肝组 织病理学检查 : ① H E 染色 : 光镜下观
察肝细胞变性坏死程度 , 分级标准 : ( 一 ) 表示 肝组
3 56 中西医结合肝病杂志 200 2 年第 2 1卷第 6 期
织无肿胀 、 坏死及炎性细胞浸润 ; ( + ) 表示肝细胞
轻度肿胀 , 单个肝细胞坏死 , 或少许炎性细胞浸润 ;
( + 十 ) 示肝细胞中度肿胀 , 或肝细胞灶性坏死 , 或
明显炎性细胞浸润 ; ( 十 + 十 ) 示肝细胞重度肿胀 ,
或肝组织片状坏死 , 或大量炎性细胞浸润 。 ②胶原纤
维染色 ( M a lor y 法 ) : 光镜下观察肝间质胶原纤维组
织增生程度 , 分级标准 : ( + ) 示胶原纤维含量增加 ,
但很少形成条分隔肝小叶 ; ( + 十 ) 表示胶原纤维呈
较细条索状分隔肝小叶 , 散在分布 ; ( 十 + 十 ) 表示
胶原纤维呈 粗条索状分隔肝小叶 , 胶原纤维 明显 增
加 ; ( 一 ) 表示发生相应的病理改变 。 ③电镜检查 :
肝组织经 4 % 戊二醛冷固定 h2 后 , E拜〕n s lZ 包埋 ,
超薄切片 , 电镜下观察肝损伤程度 。
1
.
6 数据处理 实验数据 以 妥士 : 表示 , 两组 间均
数差异采用 t 检验 。
2 结果
2
.
1 各组小鼠 A L I 、 、 A S I ,检测结果 见表 1。
2
.
2 各组小鼠血清 lA b、 T P 、 A z (/子检测结果 结果
见表 2。
2
.
3 各组小 鼠肝脏 H y p 、 胶原蛋白以及肝脏 系数检
测结果 见表 3。
2
.
4 病理 学检查
2
.
4
.
1 各组小 鼠肝脏光镜检查结果 : 见表 4。
表 3 各组小鼠肝脏 H即 、 胶原蛋 白含且及肝脏系数检测结果 (至土 、 )
H即 胶原蛋白
(gnr g/ 肝脏 ) (吨奄 肝脏 )
0
.
2 6 6士 0 . 0 7 2 . 0 5土 0 . 6 6
0
.
6 13士 0 . 1 3△ 4 . 7 2士 0 . 9 2△
肝脏系数
正常对照组
模型对照组
秋水仙碱组
余甘子高剂量组
余甘子中剂量组
余甘子低剂量组
4
.
8 6士 0 3 7
6
.
8 1士 0 、 7 6。
0
.
4 4 9士 0 . 0 5怪 . 3 . 4 5士 0 . 6 3
0
.
4 5 6士 0 . 0 7 . 份 3 , 5 1土 0 . 5 4
5
.
5 7 士0 ` 6 7 畏 畏
5
.
6 9 士0 . 5 1 食 畏
0
.
5 0 1 士0 , 0 6 . 3 . 8 8 士 0 . 5 8 肠 5 . 8 3 士 0 . 4 7 份
0
.
5 54 士0 . 0 9 4 . 1 4 士 0 . 5 7 6 . 0 7 士 0 . 54
注 : 与正 常组 比较 , △ P < 0 . 01 ; 与模型组比较 , , 二 P < 0 . 01 ,
苦 尸 < 0 . 0 5
表 4 各组小鼠肝脏病理改变比较 (n)
肝细胞变性 肝细胞坏死 肝间质纤维增生
n — 一 一 — 一 一 — 一 — — 一 — 一一 + 十十 + + 十 一 + 十 + 十 十 + 一 十 + + 十 + +
正常对照组 10 10 0 0 0 10 0 0 0 10 0 0 0
模型对照组 10 0 1 6 3 0 0 7 3 0 1 6 3
秋水仙碱组 10 3 5 1 1 3 6 1 0 2 7 1 0
余甘子高荆量组 10 2 6 2 0 1 8 1 0 1 8 } 0
余甘子中剂量组 10 1 6 3 1 1 7 1 1 1 7 2 0
余甘子低荆量组 10 0 5 4 1 0 5 4 1 0 4 6 0
注 : 与正常组比较 , △尸 < 0 . 01 ; 与模型组比较 , ` * 尸 < 0 .叭 ,
关 尸 < 0 . 0 5
表 1 各组小鼠血清 A L I , 、 A S T 检测结果比较 《三士 、 , U d/ l)
n A l月 、 A S T
正常对照组 ( 6组 ) 10 5 2 . 3 士 12 . 0 13 6 . 5 土 2 1 . 0
模型对照组 ( 5 组 ) 10 24 6 . 2 士 5 0 . 8△ 3 6 7 . 0 士 6 0 . 3乙
秋水仙碱组 ( 4 组 ) 10 12 8 . 6 士 3 a . 8 ” 2 0 3 . 2 土 2 3 . 5 ”
余甘子高剂量组 ( 1 组 ) 10 14 4 . 6 士 3 5 . 8 ” 2 4 3 . 1 士 3 0 . 2 ` ’
余甘子中剂量组 ( 2 组 ) 10 17 0 . 0 士 3 5 . 9 “ ` 2 7 6 . 2 士 3 4 . 4 “
余甘子低剂量组 ( 3 组 ) 10 19 9 . 5 士 3 7 . 0 . 3 12 . 9 士 3 6 . 1 怪
注 : 与正常组 比较 , △尸 < 0 . 0 1 ; 与模型组 比较 , 二 二 尸 < 0 . 0 1 ,
苦 P < 0
.
0 5
表 2 各组小鼠血清 A】b 、 T P 、 AG/ 检测结果比较 《至士 : )
正常对 !!双组
模型对照组
秋水仙碱组
余甘子高剂量组
余甘子中剂量组
余甘子低剂量组
10
1 0
l 0
10
l 0
l 0
A lb ( g d/ } ) 仰 ( g d/ 1)
4
.
2 2 土 0 . 2 7 6 . 0 1 士0 . 3 4
2
.
7 一士 0 . 4 9△ 5 . 18 士0 . 69 。
3
.
6 3 士 0 . 3 1 份 “ 5 . 8 9 士0 . 3 8 .
3
.
5 0 士 0 . 4 0 . 食 5 . 8 5 士0 . 4 3 .
3
.
3 0 士 0 . 4 0 畏 5 . 58 士 0 . 6 1
2
.
9 8 士 0 . 5 4 5 . 27 士 0 . 4 7
2
.
4 5 土 0 . 5 1
1
.
0 2 士 0 . 23△
1
.
6 6 士0 . 36 . 怪
1
.
5 2 士 0 . 3 6 替 怪
1
,
5 0 士 0 . 3 9 . 份
1
.
3 4 士 0 . 3 9
注 : 与正常组 比较 , △尸 < 0 . 0 ;1 与模型组比较 , , 二 尸 < 0 . 01 ,
釜 P < 0
.
0 5
2
.
4
.
2 各组小鼠肝脏 电镜检查情况 : 模型组 小鼠肝
脏受破坏 , 可见大片坏死灶 , 灶内肝细胞崩解 , 坏死
灶周围有较多嗜中性粒细胞 、 嗜酸性粒细胞 、 单核细
胞和浆细胞浸润 。 坏死灶周 围残存肝细胞体积小 , 可
见核变形 、 皱缩 , 核仁明显 , 线粒体部分明显扭曲变
形 、 淡化 , 粗面内质网少见 , 脂肪变明显 。 余甘子低
剂量组小鼠肝细胞核膜完整 , 可见核孔 , 线粒体电子
密度增高 , 峙不清楚 , 粗面内质网脱颗粒较严重 ; 中
剂量组小鼠肝细胞核膜结构清楚 , 膜孔可见 , 线粒体
及峪尚清楚 , 粗面内质网脱颗粒较严重 ; 高剂量组小
鼠肝细胞核膜完整 、 清楚 , 线粒体电子密度增高 , 肝
细胞再生明显 。 秋水仙碱组小 鼠肝细胞核膜完整 , 膜
’ 孔清楚 , 线粒体电子密度增高 , 肝细胞再生明显 。
3 讨论
多方面研究已证明 C C 14 复制的肝损伤 可模拟病
毒性肝炎肝损伤 , 其表现症状 、 肝功能改变 、 肝脏病
理改变与病毒性肝炎具有相 似性 〔“ 一 8〕。 我们的实验
结果表明 , 余甘子水提醇沉物能显著降低 C 从致慢
性肝损伤小鼠 AL T 、 A S江, 活性 , 对 拟 b 和 A G/ 比值
有显著升高作用 , 这说明余甘子对慢性肝损伤有防护
卿醚丝丝哑病杂志20 丝年第 12 卷第 6期 · 3 5 7.
滋
作用 。 这与李萍等的研究结果相似[sJ 。
在肝组织损伤而又无力再生时 , 便发生肝胶原纤
维结缔组织增生反应 , 最终形成肝硬化 。 胶原纤维主
要是由胶原蛋白构成 , 而 H y p 是胶原蛋 白的特有成
分 。 余甘子水提醇沉物能减少慢性肝损伤小 鼠肝场 p
含量 , 而且病理学检查也显示其能减少肝细胞变性坏
死 , 减轻肝脏病理性增生 , 促进肝细胞再生 , 说明余
甘子具有一定的抗胶原纤维结缔组织增生的作用 。
近年来很多学 者认为 0[] , 脂质过氧 化作用在肝
病和肝纤维化中起重要作用 。 肝纤维化形成的最直接
原因是肝细胞坏死 , 因为坏死本身即是一种强有 力的
刺激和诱导 因素 。 C C玩在 肝脏经微粒体细胞色素 P -
4 5 0 激活 , 生成 CC 13 自由基 , 后者可攻击肝细胞膜 ,
从而引起脂质过氧化及直 接的膜 溶解 , 使肝 细胞坏
死 , 肝功能衰竭 l0[ 〕。
我们从实验中发现余甘子对 C C从所致小 鼠慢性
肝损伤性纤维化有明显的治疗作用 , 提示可能是通过
抗脂质过氧化来实现的 。
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(上接第 3 5 4 页 )
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(收稿 日期 : 20 2 一 05 一 19 编辑 : 胡肃平 )