全 文 ：民族药余甘子的急性毒理与药效学研究
李 萍1 林启云1 谢金鲜1 李爱媛1 谢 彬2
( 1. 广西中医学院药理教研室, 530001 广西南宁; 2. 广西中医学院九七级药学本科实习生 / /第一作者女, 1967 年生,讲师)
摘 要: 目的: 观察余甘子抗肝损伤的作用,并揭示其作用机理。方法:一是观察余甘子对小鼠的急性毒性作用。二是
采用四氯化碳( CCl4 )一次性腹腔注射( ip)造成小鼠急性肝损伤模型, 检测血清谷丙转氨酶( ALT )、谷草转氨酶( AST )、碱性磷
酸酶( ALP)、肝糖元水平, 计算肝脏系数,并作病理学观察。结果: ¹ 余甘子水提物的 LD50为 35. 16 ? 2. 5g /kg。º余甘子水
提物各剂量组均可降低 CCl4 所致的急性肝损伤小鼠血清 ALT、AS T、ALP 的活性及肝脏系数, 并能增加肝糖元含量,改善肝
脏组织病理损伤,其作用呈剂量依赖性。结论: 余甘子水提物对 CCl4 所致的急性肝损伤具有预防作用; 该药口服安全, 毒性
极小。
关 键 词: 余甘子; 急性毒理; 药效学研究
中图分类号:R247 文献标识码:A 文章编号: 1009 - 5276( 2002) 06 - 0852 - 02
余甘子,又名庵摩勒, 油甘子、橄榄、牛甘果,是大戟科叶
下珠属植物余甘子 Phyllanthus emblicah L 的成熟果实112。
在我国,余甘子本是民间习用果品, 但以其入药, 自古有之,
可以说是药食两用佳品。5本草纲目6中记载: 余甘子性凉,
味甘酸涩,具有清热凉血, 消食健胃,生津止咳之功效122, 民
间常用来治疗消化不良、腹泻、咳嗽、乙型肝炎、腹水、便秘、
肿瘤、发热、皮肤病、高血压、胆囊炎及癌症等疾病132。迄今
为止,国内外现代药理学研究已从抗炎、抗菌、抗病毒、抗衰
老、抗癌、抗肿瘤、抗突变、抗高血压、降低血脂、解毒14 - 62等
方面验证了余甘子的治疗功效,但尚未见有余甘子护肝损伤
作用实验研究的文献报道。为了验证余甘子护肝疗效,更好
地提供临床用药依据, 本文应用现代药理学实验方法, 系统
地对余甘子进行了急性毒理与药效学研究。
1 实验材料
动物 昆明种小白鼠, 体重 20g~ 25g, 雌雄兼用, 由本
院动物实验中心提供,桂医动字第 11004 号
药物 新鲜余甘子, 清水洗净, 去核取肉, 加 10 倍果肉
量蒸馏水浸泡 30min, 煎煮二次, 过滤, 合并滤液, 浓缩至小
体积,加入 4%明胶水溶液, 不断搅拌, 加热, 过滤, 去渣, 用
三倍 95% 乙醇沉淀 24h, 过滤, 去渣, 浓缩至 2g /ml分装备
用,临用前用蒸馏水稀释至所需浓度。联苯双酯滴丸: 山东
省德州制药厂,批号 20000309。
试剂 CCl4, 北京化工厂, AR, 批号 940102; ALT 试剂
盒、AST 试剂盒、ALP 试剂盒, 上海申能生物技术有限公司
生产,批号分别为 980903、980712、980525。
2 实验方法
急性毒性试验 用余甘子水提物作为供试液, 按改良寇
氏法进行 LD50的测定172。通过预试验, 找出最大致死量
( Dm)和最小致死量( Dn)。取小鼠 40 只, 雌雄各半, 随机分
为4 组, 每组 10 只。由 Dm 开始, 按 1B0. 85 比例用蒸馏水
等比稀释, 灌胃( ig) 给药, 容量为 0. 3ml /10g, 2 次 /d(间隔
4h) , 然后连续观察 7d,记录小鼠的毒性反应及死亡情况。
CCl4 肝损伤182 取 60 只小鼠随机分为 6 组,每组10 只
小鼠, ¹ ~ »组为余甘子水提物高( LD50 /5,即 7. 0g /kg)、中
( LD50 /10, 即 3. 5g /kg)、低( LD50 /20, 即 1. 8g /kg)剂量组; ¼
组为联苯双酯阳性对照( 45mg /kg) ; ½ 组为 CCl4 模型组对照
组(蒸馏水, 20ml /kg) ; ¾ 正常对照组(蒸馏水, 20ml /kg)。每
日 ig 一次,连续给药 10d, 于末次给药后 1h, 除正常对照组
外,其他各组小鼠均 ip 0. 1% 的 CCl4 花生油溶液 ( 80mg /
kg ) , 禁食不禁水, 16h 后摘眼球采血, 取肝备检。
3 检测项目
肝糖元测定:按蒽酮法进行172。
血清 ALT、AST、ALP 活性测定: 分别按照 ALT、AS T、
ALP 试剂盒使用说明书,用 TBA - 120 型全自动生化分析仪
测定。
计算肝脏系数:肝脏系数= (肝脏重量 /体重) @ 100%。
肝组织病理学检查:取经中性福尔马林溶液固定的肝组
织标本, 石蜡包埋 ,超薄切片厚 5Lm, 作 HE 染色, 光镜下观
察肝细胞变性坏死程度。分级标准: ( - )表示肝组织无肿
胀、坏死或炎性细胞浸润; ( + )表示轻度肝细胞肿胀,单个肝
细胞坏死,或少许炎性细胞浸润; ( + + )表示中度肝细胞肿
胀,或肝细胞灶性坏死, 或明显炎性细胞浸润; ( + + + )表示
重度肝细胞肿胀, 或肝组织片状坏死, 或大量炎性细胞浸
润。
统计方法:实验数据以ŠX ? S 表示, 两组间均数差异采
用 t检验。
4 实验结果
急性毒试验 给药后发现部分小鼠出现尾巴变黑、蜷
卧、耸毛、耳壳苍白、呼吸困难等中毒症状,并有死亡情况发
生。按改良冠氏法公式进行计算, 结果余甘子水提物的
LD50为 35. 16 ? 2. 5g /kg , 95%的可信限为 32. 66 ~ 37. 66g /
kg。
余甘子水提物对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠的影响
各组血清 ALT、AST、ALP 活性的变化: 模型组 ALT、
AST、ALP明显高于正常组( P< 0. 01) , 说明造模成功。与模
型组比较, 余甘子各剂量组均能显著降低 ALT、AST、ALP
的活性( P < 0. 05~ 0. 01)。见表 1。
各组肝糖元含量及肝脏系数的变化: 与正常组比较, 模
型组肝糖元含量明显降低,肝脏系数明显提高( P< 0. 01) ,说
明造模成功。与模型组比较,余甘子各剂量组均可显著提
#852# Chinese Archives of T raditional Chinese Medicine December. 2002, Vol. 20, No. 6
DOI：10.13193/j.archtcm.2002.06.145.lip.088
表 1 各组小鼠血清 ALT、AST、ALP活性的检测结果比
较(ŠX ? S, n= 10)
组别 剂量
( g /kg)
ALT
( U /d1)
AST
( U /d1)
ALP
( U /d1)
正常对照 - 47. 3 ? 10. 9 116. 1 ? 14. 8 19. 6? 1. 8
模型对照 - 570. 0? 100. 9$ 416. 3 ? 70. 3$ 35. 1? 3. 4$
联苯双酯 0. 045 291. 0? 36. 8n 226. 6 ? 23. 3 n 22. 4? 2. 4 n
余甘子 7. 0 334. 8? 35. 7n 242. 0 ? 30. 2 n 25. 3? 2. 8 n
3. 5 372. 4? 42. 6n 267. 3 ? 25. 2 n 28. 2? 2. 2 n
1. 8 469. 7? 73. 2s 351. 3 ? 37. 2 s 31. 6? 2. 7 s
注: 与正常组比较, $P< 0. 01;与模型组比较, n P< 0. 01 s P< 0. 05
高肝糖元含量,并可明显降低肝脏系数( P < 0. 05~ 0. 01)。
见表 2。
表 2 各组小鼠肝糖元及肝脏系数的检测结果比较(ŠX
? S, n= 10)
组 别 剂量
( g /kg)
肝糖元
( g /100g 肝组织) 肝脏系数
正常对照 - 0. 0975 ? 0. 014 4. 29 ? 0. 53
模型对照 - 0. 0436 ? 0. 005$ 6. 25 ? 0. 39$
联苯双酯 0. 045 0. 1269 ? 0. 030 n 5. 05 ? 0. 35 n
余甘子 7. 0 0. 1173 ? 0. 028 n 5. 16 ? 0. 35 n
3. 5 0. 0984 ? 0. 036 n 5. 39 ? 0. 37 n
1. 8 0. 0758 ? 0. 039 s 5. 87 ? 0. 44
注:与正常组比较, $P< 0. 01;与模型组比较, n P < 0. 01 sP < 0.
05
病理学检查:正常组镜下见肝细胞索排列规则, 肝细胞
形态正常,肝窦及汇管区无异常。模型组镜下见肝细胞广泛
水样变性, 肝索紊乱不清, 可见灶性坏死, 汇管区有淋巴细
胞、中性粒细胞浸润。余甘子低剂量组肝脏病变较模型组为
轻,镜下可见肝细胞点状坏死或轻度浊肿, 间质内有淋巴细
胞和单核细胞浸润;中剂量组的肝组织轻度浊肿, 间质内有
少许淋巴细胞和单核细胞浸润;高剂量组的肝组织偶有小坏
死灶,肝细胞结构较正常。联苯双酯组肝细胞索结构清晰,
肝细胞形态较正常。见表 3。
表 3 各组小鼠肝脏病理变化比较(n= 8)
肝细胞变性 肝细胞坏死 炎症反应
- + 6 7 - + 6 7 - + 6 7
正常对照组 8 0 0 0 8 0 0 0 7 1 0 0
模型对照组 0 2 6 0 0 2 2 4 0 1 3 4
联苯双酯组 1 5 2 0 0 5 2 1 0 4 3 1
余甘子高剂量组 1 5 2 0 0 4 3 1 0 5 2 1
余甘子中剂量组 0 4 4 0 0 2 4 2 0 2 4 2
余甘子低剂量组 0 1 7 0 0 0 7 1 0 1 6 2
5 讨 论
急性毒性试验结果表明:余甘子水提物的 LD50为 35. 16
? 2. 5g /kg, 相当于成人( 60kg 体重)每日口服生药剂量( 8g
~ 12g)的 163~ 188 倍,说明余甘子口服毒性极小。
本实验采用 CCl4 复制了小鼠急性肝损伤模型, 观察余
甘子水提物对急性肝损伤的保护作用。结果表明,余甘子各
剂量组能明显抑制四氯化碳所致动物肝损伤后血清中的
ALT、AST 和 ALP的升高, 明显提高肝糖元含量, 显著降低
肝脏系数,改善肝组织病理状态, 减轻肝细胞变性、坏死。说
明余甘子对四氯化碳所造成的急性肝损伤有较好的保护作
用。
CCl4 是引起急性肝损伤传统的肝毒模型, 其对肝脏的
损伤主要是因为 CCl4 在肝细胞内被细胞色素 P - 450 代谢
为具有高度反应活性的自由基 CCl3#和 CCl3O2#, 这些自由
基与肝细胞膜磷脂发生共价键结合, 产生脂质过氧化作用,
引起细胞内谷胱甘肽含量的降低和蛋白巯基的改变, 使线粒
体、内质网、细胞转运 Ca2+ 或贮存 Ca2+ 异常 ,引起细胞浆内
Ca2+ 升高, 从而破坏肝细胞膜结构和功能的完整, 核酸、蛋
白质等物质代谢受到阻碍,导致肝细胞变性坏死, 引起肝脏
功能损害1102。余甘子对 CCl4 引起的急性肝损伤保护作用
显著,提示余甘子具有护肝降酶, 促进肝糖元合成、改善肝组
织病理状态的作用,其作用可能是通过抗脂质过氧化作用实
现。
参考文献
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( 2002 - 08 - 10 收稿; 2002 - 09 - 21修回)
国家中医药管理局关于本刊级别的复函
1本刊讯2 本刊由国家中医药管理局主管,中华中医药学会、辽宁中医学院主的中医药月刊, 每期 160 页,为全国几种大
型中医药学术刊物之一。近来,许多作者询问本刊级别问题。对此, 国家中医药管理局 2002年 2月 25 日复函指出: 5中医药
学刊6杂志是由国家中医药管理局主管的一本中医药科技期刊。值得一提的是,国家从来没有为期刊划分过等级,也没有国
家级和省级之分。只是根据主管部门的不同分为中央期刊和地方期刊,即中央单位主管的期刊叫中央期刊,各省直单位主管
的期刊叫地方期刊。因此,5中医药学刊6为中央期刊。
#853#2 0 0 2 年1 2 月第2 0卷第 6期 中 医 药 学 刊