全 文 ：西北农业学报　2011 , 20(9):180-183
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
九里香层析物的抑菌活性及成分分析＊
骆焱平 ,卢远倩 ,夏治琴 ,王兰英
(热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室 ,海南大学环境与植物保护学院 ,海南海口　570228)
摘　要:以石油醚为洗脱液 , 对九里香氯仿萃取物进行硅胶柱层析分离 , 得到 27 个组分。采用生长速率法测
定九里香层析物对 5 种供试病原菌的抑制作用。结果表明 ,在质量浓度为 0.5 g/ L时 , 组分 26 对 5 种供试病
原菌有较好的抑制活性 ,对香蕉炭疽菌的抑制率达到 89.46%, 对香蕉炭疽菌的 EC50为 0.078 6 g/ L 。GC-MS
分析表明 ,组分 26 的主要成分是 7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素 , 占 92.00%。
关键词:九里香;抑菌活性;成分分析;香豆素
中图分类号:S482.2+92　　　　文献标志码:A　　　　　文章编号:1004-1389(2011)09-0180-04
The Antifungal Activities and Composition Analysis of
Murraya paniculata Column Chromatography
LUO Yanping , LU Yuanqian , XIA Zhiqin and WANG Lanying
(Minist ry of Edu cation Key Laboratory of Protect ion an d Developmen t Ut iliz at ion of T ropical C rop Germ plasm Resources ,
College of Envi ronm ent and Plant Protection , H ainan University , Haikou H ainan　570228 , Chin a)
Abstract:With pe tro leum ether as eluent , 27 g roup fractions w ere sepa rated f rom the chlo ro fo rm ex-
t ract of Murraya paniculata (L .)Jacks w ith silica gel column.The ant ifungal activi ties o f the 27
group fract ions against five pathogens w ere tested w ith grow th rate me thods , The results showed that
the f raction 26 exhibited excellent ant ifungal activi ty against pathogens at the concentration of 0.5
g/ L , especially , the inhibi to r ef fect ag ainst Colletotrichum musae was 89.46% and EC50 was 0.078 6
g/ L.GC-MS analysis of fraction 26 show ed that 7-methoxy-8-isopentenyl coumarin w as main composition.
Key words:Murraya paniculata;Antifungal activity ;Composit ion analy sis;Coumarin
　　九里香(Murraya paniculata(L.)Jacks),又
名千里香 、过山香等 ,为芸香科九里香属常绿灌
木。主要产于中国云南 、广东 、广西 、福建 、台湾 、
海南等地 ,以及亚洲其他热带及亚热带地区[ 1] 。
九里香作为一种中药 ,具有行气止痛 、活血化
瘀功效。用于胃痛 、风湿痹痛;外治牙痛 ,跌扑肿
痛 ,虫蛇咬伤[ 2] 。现代药理研究表明 ,九里香具有
抗生育和终止妊娠 、抗菌消炎 、降血糖 、抗痉挛及
局部麻醉等作用[ 3] 。近年来 ,九里香对植物病原
菌抑制活性的研究受到关注。喻大昭等[ 4] 研究表
明 ,九里香叶的提取物对部分真菌有较显著的抑
菌作用;骆焱平等[ 5] 对 128 种南药植物提取物的
抑菌活性进行初筛 ,发现九里香提取物有很好的
抑菌效果 。为了具体探明其抑菌活性物质 ,本研
究使用石油醚对九里香氯仿萃取物进行硅胶柱层
析分离 ,以期发现活性好的农药先导结构 ,为农业
生产服务 。
1　材料与方法
1.1　材 料
1.1.1　供试药剂　九里香硅胶柱层析物 ,质量分
数为 0.36%苦参碱水剂(河北阔达生物制品有限
公司)。
1.1.2　供试病原菌　供试病原菌为香蕉炭疽病
＊ 收稿日期:2010-10-05　　修回日期:2010-11-24
基金项目:海南省自然科学基金项目(808108);海南大学 2009年重点科研项目(hd09xm12)。
第一作者:骆焱平 ,男 ,博士 ,副教授 ,从事农药学的教学和科研工作。 E-mai l:yanpluo@126.com
菌(Colletotrichum musae(Berk&Curt)A rx),芒
果炭疽病菌(Colletotrichum g loeosporioides Pe-
nz.),西瓜枯萎病菌(Fusariun oxy sporum f.sp.
niveum),香蕉枯萎病菌(Fusarium oxy sporum f.
sp.cubense), 芒果蒂腐病菌(Botryodip lodia
theobromae Pa t.),由海南大学环境与植物保护学
院化保实验室提供。
1.1.3　主要仪器　毛细管气相色谱-质谱联用仪
(GC-MS;HP6890/5973M SD , 美 国 Hew let t-
Packark公司)。
1.2　方 法
1.2.1　层析组分的制备　将采自海南大学校园
的九里香枝叶自然晾干 ,粉碎 ,用工业甲醇浸泡提
取 ,提取液经减压浓缩 ,得棕褐色浸膏。随后用氯
仿对九里香粗提物进行萃取 ,得氯仿萃取物 。将
此萃取物拌入 60 ～ 100目的硅胶 ,干法装柱 ,硅胶
为 100 ～ 200目 ,以石油醚为洗脱溶剂 ,每2.5 L合
并 1个组分 ,减压浓缩得油状物 ,共 27个组分 。
1.2.2　抑菌活性测定　采用生长速率法测定供
试药剂对靶标菌的抑制作用[ 6] :将供试药剂用适
量丙酮溶解 ,然后用质量分数为 1‰吐温-80的
无菌水将其配制成 10 g/L 母液 。吸取 1 mL 母
液与 19 mL PDA 培养基充分混匀 ,迅速分装至 3
个直径为 6 cm 的培养皿中 ,冷却 ,备用 。此时药
剂质量浓度为 0.5 g/L 。用打孔器在靶标菌菌落
边缘取直径为 5 mm 的菌饼 ,菌丝面向下 ,接种于
带药平板中央 ,以含相应质量浓度的溶剂(适量丙
酮与 1‰吐温 -80 的无菌水)作空白对照 , 以
0.36 g/L苦参碱水剂作标准药剂对照 ,每处理设
3个重复 , 适温培养 72 h(芒果蒂腐病菌培养
48 h),十字交叉法测量菌落直径 ,按下列公式求
抑菌率:
抑制率=(对照组菌落直径-处理组菌落直
径)/(对照组菌落直径-菌饼直径)×100%
以SAS 软件作统计学分析 ,求出各组分间的
差异显著性 ,显著性标准取 P<0.05 。
1.2.3　GC-MS分析条件　气相色谱条件:石英
毛细管柱 HP-FFAP(30 m ×0.25 mm , 0.25
μm),程序升温:从 80 ℃开始 ,以 15 ℃/min 升到
200 ℃, 然后以 8 ℃/min 升到 250 ℃, 保持
5 min;载气为He ,柱流量 1.0 mL/min ,进样口温
度 250 ℃,分流比 80∶1。
质谱条件:EI 源;电离电压 70 eV ,离子源温
度 230 ℃,扫描范围为 10 ～ 500 aum ,进样量为
1.0 μL 。
2　结果与分析
2.1　九里香硅胶层析物 27个组分的抑菌效果
在 0.5 g/L 质量浓度下 ,采用生长速率法测
定九里香 27个组分对供试靶标菌的抑菌效果 ,结
果见表 1 。由表 1 可知 , 27个硅胶层析物组分对
供试病原菌都有一定的抑菌效果 , 其中对至少
1种病原菌抑制率在 50%以上的层析组分有 17 、
20 、22 、23 、24 、25 、26 、27;对至少 2种病原菌抑制
率在 50%以上的层析组分有 20 、22 、23 、24 、25 、
26;对至少 3种病原菌抑制率在 50%以上的层析
组分有 23 、24 、25 、26;特别是组分 26对 5种供试
病原菌的抑制率都在 50%以上 ,对香蕉炭疽菌和
芒果炭疽菌的抑制率在 80%以上。与苦参碱水
剂相比 ,对香蕉炭疽菌和香蕉枯萎菌的抑菌效果
差异不显著 ,与另外 3种病原菌相比 ,抑菌效果明
显高于标准对照药剂 ,差异达显著水平 ,说明组分
26具有广谱抑菌效果 。
2.2　组分 26对供试病原菌的毒力
由表 1可知 ,组分 26对 5种供试病原菌有较
强抑制作用 ,为此 ,将其配制成 1.00 、0.50 、0.25 、
0.125 、0.062 5 g/ L 5个质量浓度梯度 ,进一步测
试其对 5种供试病原菌的毒力大小 ,结果见表 2。
由表 2回归方程可知 ,供试菌株菌丝生长的受抑
制程度与供试药剂的质量浓度呈正相关 ,随着处
理质量浓度的增加 ,组分 26对菌丝的抑制作用增
强。从各菌株的 EC50可知 ,组分 26对香蕉炭疽
菌的 EC50最小 ,达到 0.078 6 g/ L;对芒果炭疽菌
次之 ,为 0.091 5 g/ L;对西瓜枯萎病最高 , 为
0.495 7 g/L ;从对病原菌敏感性分析 ,组分 26对
香蕉炭疽菌最敏感 ,对西瓜枯萎病最不敏感 。
2.3　组分 26的 GC-MS分析结果
用毛细管气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)
对组分 26 的化学成分进行分析 ,得其总离子流
图。由图 1 可知 ,组分 26呈现 4 个峰 ,表明含有
4种化学成分。其中保留时间在 16.97 min 时 ,
该峰为主峰。应用面积归一化法测得各组分的相
对含量 ,所得质谱图经 NIST98质谱数据库检索 ,
并与标准图谱核对 , 鉴定出这 4 种化学成分
(表 3)。其中组分 26的主要成分为 7-甲氧基-8-异
戊烯基香豆素 ,又名蛇床子素 ,含量为92.00%,其
次为 11 , 14 , 17-二十碳三烯酸甲酯 , 含量为
6.72%。
·181·9 期　　　　　　　　　　　　骆焱平等:九里香层析物的抑菌活性及成分分析
表 1　九里香 27 个层析组分对供试病原菌的抑制效果
Table 1　The inhibitory ef fect of 27 group fractions from Murraya paniculata column chromatography on pathogens
组分
No.
抑制率/% Inhibi tion rate
香蕉炭疽病菌
Col letotr ich um
musae
香蕉枯萎病菌
Fu sar ium o xysp orum
f.sp.cubense
芒果炭疽病菌
Col letotr ich um
g loeosporioid es
芒果蒂腐病菌
Botryod ip lodia
th eobromae
西瓜枯萎病菌
Fusar ium o xysporum
f.sp.niveum
1 22.82 h 12.71 h 16.99 g 0.11 h 12.69 i
2 20.14 h 5.77 i 11.11 gh 4.54 g 8.36 k
3 19.13 h 11.55 h 13.73 g 36.06 d 35.81 d
4 22.82 h 10.39 h 32.03 e 21.51 f 28.36 f
5 20.81 h 8.08 i 18.30 g 0.18 h 31.16 e
6 22.82 h 23.69 e 39.22 de 26.97 e 38.60 d
7 22.49 h 15.25 g 8.58 h 46.06 c 36.96 d
8 19.80 h 18.64 ef 14.83 g 17.88 f 14.68 i
9 13.76 i 11.86 h 17.96 g 39.09 d 10.88 j
10 15.44 i 11.30 h 10.92 h 28.48 e 13.60 i
11 13.43 i 16.38 g 14.05 g 41.21 c 18.49 h
12 31.53 fg 21.72 e 32.55 ef 0.21 h 36.42 d
13 40.68 e 30.88 d 41.43 d 31.82 de 17.27 h
14 37.29 f 29.84 d 46.16 d 6.06 g 10.46 j
15 43.39 e 14.91 g 44.39 d 48.64 c 20.41 g
16 28.40 g 20.00 f 27.45 f 0.15 h 20.41 g
17 41.95 e 24.29 f 25.77 f 59.39 b 35.10 d
18 4.32 j 6.58 i 25.49 f 0.15 h 36.42 d
19 4.32 j 7.73 i 12.75 h 39.54 d 22.123 g
20 50.88 d 32.15 cd 57.73 c 27.12 e 12.51 i
21 26.41 g 1.03 j 29.33 f 0.23 h 43.41 c
22 66.34 c 34.70 c 57.5 c 43.48 c 27.73 f
23 62.42 c 36.74 c 58.41 c 38.48 d 57.73 a
24 73.94 b 47.56 bc 75.23 b 74.47 a 50.46 b
25 84.47 a 56.70 b 84.66 a 34.55 d 45.67 c
26 89.46 a 64.33 a 88.17 a 71.21 a 52.74 b
27 48.43 d 14.32 g 36.59 e 31.68 de 58.21 a
苦参碱 Matrine 84.00 a 63.15 a 56.25 c 45.76 c 47.00 c
注:同列数据后不同字母表示在α=0.05水平的差异显著性。
Note:Different letter follow ing number show signif icant ly di ff erent at 0.05 level.
表 2　组分 26 对供试病原菌的毒力测定结果
Table 2　The result of the antifungal activity of fraction 26 against pathogens
病原菌
Fungus
回归方程
Regres sion equation
相关系数
Correlat ion coef f icient
EC50/(g/ L) EC 50置信限/(g/ L)Conf idence limi t s
香蕉炭疽病菌
Co lletot richum musae y=6.502 3+1.359 8 x 0.986 9 0.078 6 0.062 6～ 0.091 2
香蕉枯萎病菌
Fusar ium ox ysporum f.sp.cuben se y=5.491 2+0.962 0 x 0.995 2 0.308 6 0.290 9～ 0.333 0
芒果炭疽病菌
Co lletot richum g loeospor ioides y=6.392 0+1.340 1 x 0.986 3 0.091 5 0.075 5～ 0.103 4
芒果蒂腐病菌
Botr yodip lod ia theobromae y=5.781 9+1.248 4 x 0.972 3 0.236 4 0.222 5～ 0.265 2
西瓜枯萎病菌
Fusar ium ox ysporum f.sp.n iveum y=5.321 2+1.053 8 x 0.986 4 0.495 7 0.415 4～ 0.642 1
表 3　组分 26 的化学成分
Table 3　The chemical composition of fraction 26
峰号
Peak number
保留时间/min
Rtention t ime
化合物
Compounds
分子式
Formulat ion
相对含量/ %
Relative conten t
1 12.68 2 , 2 , 5-三甲基-环己烷-1 , 4-二醇 C9H18O 2 0.55
2 12.80 (R)-4 , 4 , 7a-三甲基-5 , 6 , 7 , 7a-四氢苯并呋喃-2-酮 C11H 16O 2 0.73
3 15.29 11 , 14 , 17-二十碳三烯酸甲酯 C21H 36O 2 6.72
4 16.97 7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素 C15H 16O 3 92.00
·182· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　20 卷
图 1　组分 26 总离子流图
Fig.1　The total ion chromatograms of fraction 26
3　讨论
在 0.5 g/L 的质量浓度下 ,九里香氯仿萃取
物的石油醚层析组分对供试植物病原菌有较好的
抑菌活性 ,特别是组分 26对供试病原菌有很强的
抑制作用 ,比标准药剂苦参碱的活性稍好。
通过 GC-MS分析 ,组分 26 的主要成分为 7-
甲氧基-8-异戊烯基香豆素 ,又称蛇床子素 。该化
合物是从伞形科蛇床子果实中提取出来的 ,药理
作用较强 ,具有广谱抗真菌作用及降血压 、抗心律
失常 、增强免疫等功能[ 7] 。沈寿国[ 8] 、石志奇[ 9] 研
究发现 ,蛇床子素对苹果叶枯病菌 、苹果轮纹病
菌 、南瓜白粉病等植物病原真菌有较强抑制活性。
经过文献调研 ,未见九里香中提取蛇床子素的报
道。因此 ,本研究首次发现在九里香中存在蛇床
子素 ,且表现出好的抑菌活性 ,为下一步研究纯化
分离蛇床子素的工艺条件提供参考依据 。
参考文献:
[ 1] 　周联新 ,郑汉臣 ,杨崇仁.九里香属植物研究进展 [ J] .药学
实践杂志 , 1997 , 15(4):214-219.
[ 2] 　余传隆.中药辞海 [ M ] .第一卷.北京:中国医药科技出版
社 , 1993:144.
[ 3] 　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典
(95版Ⅰ部)[ M] .北京:化学工业出版社 , 1995:7.
[ 4] 　喻大昭 ,杨小军 ,杨立军 ,等.植物提取物对植物病原真菌的
抑菌活性研究 [ J] .湖北农业科学 , 2001(5):49-51.
[ 5] 　骆焱平 , 郑服丛 ,杨　叶.128 种南药植物提取物对 6种病
原菌的生长抑制作用 [ J] .热带作物学报 , 2004 , 25(4):
106-111.
[ 6] 　方中达.植病研究方法[ M ] .第三版.北京:中国农业出版
社 , 1998:152-155.
[ 7] 　国家医药管理局中草药情报中心站编.植物学有效成分手
册 [ M] .第一版.北京:人民卫生出版社 , 1986 :792.
[ 8] 　沈寿国.蛇床子素抑制植物病原真菌机制的初步研究 [ D] .
南京:南京农业大学 , 2004.
[ 9] 　石志奇.蛇床子素作为杀菌剂的活性研究 [ D] .南京:南京
农业大学 , 2008.
·183·9 期　　　　　　　　　　　　骆焱平等:九里香层析物的抑菌活性及成分分析