全 文 ：青花椒香气成分的抑菌性研究
高逢敬,蒲 彪
(四川农业大学食品系,四川雅安625014)
摘 要:本文主要研究了不同提取方法得到的青花椒香气成分对细菌、酵母菌和霉菌的抑制作用,研究结果表明:各
种方法提取的香气成分对金黄色葡萄球菌、热带假丝酵母、产朊假丝酵母、白地霉、烟曲霉、黑曲霉都有不同程度的
抑制效果,但对大肠杆菌、绿色木霉外无抑制作用。
关键词:青花椒;香气成分;抑菌作用
中图分类号:TS201.3 文献标识码:A 文章编号:1671-6892(2007)03-0028-0003
ThestudyonfragrantcompositionoftheGreenZanthoxylum
Bungeanumaboutthebacteriostaticfunction
GAOFeng-jing,PUBiao
(theDepartmentofFoodofSichuanAgricultureUniversity,Yaan625014,China)
Abstract:Thispaperstudiedthebacteriostaticfunctiontobacterium,yeastandmouldoffragrantcompositionwhichwas
extractedbydiferentmethodsfromthegreenZanthoxylumbungeanum.Theresultshowedthat:whateverthemethod
fragrantcompositionofthegreenZanthoxylumbungeanumwasextractedby,ithascertainefectonrestrainingthegrowth
oftheStaphylococcus.aureus,theCandida.tropicalis,theCandida.utilis,theGeotrichum.candidum,theAspergilus.
fumigatusandtheAspergilus.niger,butithasnoefectabouttheE.coliandtheTrichoderma.viride.
Keywords: ThegreenZanthoxylumbungeanum;fragrantcomposition;bacteriostatic
收稿日期:2007-04-09
四川食品与发酵
SichuanFoodandFermentation
花椒是指芸香科植物花椒(ZanthoxylumBungeanum
Maxim)和青椒(ZanthoxylumSchinifoliumSiebetZucc)
的干燥成熟果皮。该属植物全世界约有 250种,我
国有50种5变种,主产区为中国、日本、及朝鲜。青
花椒简称青椒,又称青川椒、崖椒、野椒、香椒子,广
布我国南北各省区,日本及朝鲜也有分布,外观绿
色,以麻香为主,麻味为辅,麻味后劲足,而红花椒
则以麻味为主,香味为辅,麻味纯正。花椒除果皮可
作为食用和药用外,其他部分如果梗、果仁,以及
根、茎、叶均可入药治病,从现代医学的角度来讲,
花椒的作用包括抗溃疡、抗腹泻、保肝、对肠肌活动
的双向作用、保护心脏、降血压、抗凝血、抑制病原
微生物、抗癌等作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 原料
青花椒,(2006年7月采至四川省洪雅县)
1.1.2 试验菌种
大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌
(Staphylococcusaureus),由四川农业大学食品微生
第43卷(总第137期)
物实验室提供。热带假丝酵母(Candidatropicalis)、
产朊假丝酵母(Candidautilis)、白地霉(Geotrichum
candidum)、烟曲霉 (A.fumigatus)、黑曲霉(A
spergilusniger)、绿色木霉(Trichoderma?varide?Pers.
ex?Fr.),购自北京工业微生物菌种保藏管理中心。
1.1.3 培养基
牛肉膏蛋白冻培养基(细菌用):牛肉膏 3g、蛋
白冻 10g、琼脂 18g、水 1000mL、pH7.2～7.5;PDA培
养基(真菌用):马铃薯(去皮)200g、蔗糖 20g、水
1000ml,自然pH。
1.1.4 仪器设备
挥发油测定仪:成都玻璃仪器制造厂
超临界 CO2萃取装置:德阳四创公司,一萃两
分型;
1.2 方法
1.2.1 香气成分的提取
1.2.1.1 水提法
根据《中华人民共和国药典》2005年版一部附
录中挥发油的测定方法(甲法)进行提取,得到 1号
样品。
1.2.2.2 有机溶剂萃取法
有机溶剂选用无水乙醚,采用回流法进行提
取,得到2号样品。
1.2.2.3 超临界CO2萃取法
在温度为 60℃、压力 40Mpa、时间 2.0h、CO2流
量为20L/h的条件下进行提取,得到3号样品。
1.2.2 青花椒油树脂抑菌性研究
1.2.2.1 菌种的选择
本实验所选用的菌种均为食品中的常见菌,其
中大肠杆菌是水源和食品被污染强度的标志,金黄
色葡萄球菌是空气中分散较多的细菌种类之一,热
带假丝酵母、产朊假丝酵母、白地霉、烟曲霉、黑曲
霉等是引起果蔬腐烂变质的常见菌。
1.2.2.2 菌悬液和含菌培养皿的制备
将试验菌种接种在新鲜的斜面培养基上,细菌
经 37℃培养 24h,真菌经 28℃培养 48h恒温培养活
化后,用无菌水制备成菌悬液。吸取 1ml菌悬液加
入9ml无菌水中,得到稀释 10倍的菌悬液,依次进
行梯度稀释。将不同稀释度的菌悬液各吸取 0.2ml
分别加入到已灭菌冷却的各自适宜的平板培养基
表面,涂布均匀,按上述条件培养。根据观察结果,
选取各自适宜的菌液浓度,要求在该浓度下,菌能
长满整个培养皿且分布均匀。
1.2.2.3 抑菌效力的测定
用打孔器将滤纸制成直径 6mm的小圆纸片,
120℃干热灭菌2h后,分别浸入到两种花椒的挥发
油和油树脂溶液中,浸泡几分钟,在无菌条件下将
其贴在已准备好的各种含菌平板上,每皿 3片,每
种菌种做 3个重复,同时用无菌水做对照,细菌
37℃培养24h,酵母菌26℃3d,霉菌26℃5d。
数据统计与处理:用直尺分别测量每一个抑菌
圈两个垂直方向的直径大小,记录各个重复的平均
值。
1.2.2.4 最低抑菌浓度(MIC值)的测定
采用试管法。考虑到香气成分的挥发性,本试
验采用了混药稀释法,将待测液与熔融状态下的培
养基形成充分混匀的乳浊液体系,以熔融琼脂培养
基的粘度和凝固速度,理论上可以保证培养基凝固
(乳浊液体系不可能再继续向稳定分层的方向发
展)时待测液在培养基中具有符合要求的浓度和均
匀度。
以丙酮为溶剂,采用二倍稀释法将油树脂配置
成一系列梯度浓度的溶液,将此浓度梯度的溶液分
别与已融化的培养基充分混匀,使培养基中含挥发
油或油树脂的浓度(V/V)为 2%、1%、0.5%、0.25%、
0.125%,终体积为 5mL,分别制成斜面,用丙酮和无
菌水做对照。在斜面上划线接种各类菌种,做好标
记,培养温度和时间分别为:细菌 37℃培养 24h,酵
母菌26℃3d,霉菌26℃5d,观察记录各培养皿是否
长菌及生长情况。每一浓度梯度作三组平行试验,
不长菌的最低浓度为该样品的最低抑菌浓度。
1.2.2.5 最低杀菌浓度(MBC值)的测定
将菌种进行斜面活化后,分别用接种环挑取2
环菌体,用无菌生理盐水稀释,振荡几分钟,调整菌
液浓度在 105～106个/ml,制备的各种菌悬液各取
0.1ml,分别加入到各供试菌最小抑菌浓度(MIC)下
5ml的花椒油树脂稀释液中,充分摇匀。先在37℃培
养24h,记录观测结果,如果管底有膜状生成物或试
管内液体浑浊则为阳性管;管内液体澄清,肉眼未
见有菌生长者为阴性管。继续培养24h,记录结果,
原为澄清无菌生长的阴性管可能出现长菌现象,找
出澄清无菌生长的最低浓度管即为最低杀菌浓度
(MBCMininalbactericidalconcentration)。最低抑菌
浓度与最低杀菌浓度可能相同,也可能不同。
2 结果与分析
2.1 抑菌圈的测定
高逢敬 等:青花椒香气成分的抑菌性研究 29
2007年第3期四川食品与发酵
表1 不同方法提取的藤椒香气成分的抑菌效果
编号 1 2 3
大肠杆菌 0 0 0
金黄色葡萄球菌 2.637 1.567 1.629
热带假丝酵母 1.778 1.067 1.013
产朊假丝酵母 1.863 1.004 1.120
白地霉 1.097 0.937 0.841
烟曲霉 2.865 0.929 1.077
黑曲霉 1.373 0.988 0.844
绿色木霉 0 0 0
无菌水对照 0 0 0
表2 不同方法提取的藤椒香气成分对各种菌种的/V/V
样品浓度 2% 1% 0.5% 0.25% 0.125%
金黄色葡萄球
菌
1- - - - +
2- - + + +
3- - + + +
热带假丝酵母
1- - + + +
2- + + + +
3- + + + +
产朊假丝酵母
1- - - + +
2- + + + +
3- - + + +
白地霉
1- - + + +
2- + + + +
3+ + + + +
烟曲霉
1- - - - -
2- - + + +
3- - + + +
黑曲霉
1- - + + +
2- + + + +
3+ + + + +
注:表中 +表示在培养基中有菌生长,挥发油或油树脂
没有抑制作用;-表示在培养基中无菌生长,挥发油或油树
脂对此菌有抑制作用。
表3不同方法提取的藤椒香气成分对各种菌种的MBC值/V/V
菌种 1 2 2
金黄色葡萄球菌 0.25% 1% 1%
热带假丝酵母 1% 2% 2%
产朊假丝酵母 0.5% 2% 1%
白地霉 1% 2% 1%
烟曲霉 <0.125% 1% 1%
黑曲霉 1% 2% >2%
注:表中数据为抑菌圈平均直径,单位cm
各种方法提取得到的花椒香气成分抑菌效果
如表1所示。从表中可以看出,花椒香气成分除对
大肠杆菌、绿色木霉无抑制作用以外,对其他的菌
种均有不同程度的抑制作用。
2.2 最低抑菌浓度(MIC值)的测定
从表 2中可以看出,1-3号样品对金黄色葡萄
球菌的MIC值分别为:0.25%、、1%、1%;对热带假丝
酵母为1%、2%、2%;对产朊假丝酵母为0.5%、2%、
1%;白地霉为 1%、2%、>2%;烟曲霉为≤0.125%、
1%、1%;黑曲霉为1%、2%、>2%。而在以丙酮和无菌
水做对照的试管中,各菌都表现出了强劲的生长势
头。
2.3 最低杀菌浓度(MBC值)的测定
1-6号样品对各种菌种的最低杀菌浓度见表3。
3 结论
本试验表明,不同方法提取的青花椒香气成分
除对大肠杆菌、绿色木霉无抑制作用以外,对其他
的菌种均有不同程度的抑制作用。其中水提法得到
的1号样品对各菌的抑制作用相对较强,另外两种
的作用效果相差不大。
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