全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2007, 19:74-76
文章编号:1001-6880(2007)01-0074-03
　
　
　收稿日期:2005-03-14　　　接受日期:2005-04-12
　基金项目:中国热带农业科学院科技基金(RKY0421)
＊通讯作者 Tel:86-898-66988061;E-mail:meiwenli@yahoo.com.cn
红树林植物木果楝细胞毒活性和化学成分研究
戴好富 ,梅文莉＊ ,曾艳波 ,洪　葵 ,庄　令
中国热带农业科学院热带生物技术研究所 热带作物生物技术国家重点实验室 ,海口 571101
摘　要:本研究采用 MTT法对红树林植物木果楝(Xylocarpusgrantum)正己烷提取物进行细胞毒活性筛选 , 结果
显示对宫颈癌 Hela细胞有较强的生长抑制活性。为了确定其中的活性成分 , 利用 GC/MS法对正己烷提取物的
化学成分进行分析 ,共鉴定了 17种成分 , 大部分为有机酸类化合物。其中油酸(Oleicacid, 24.89%)、棕榈酸
(Palmiticacid, 24.82%)和亚油酸(Linoleicacid, 16.86%)为主要成分 ,据文献报道亚油酸具有肺腺癌细胞生长
抑制活性。
关键词:楝科;木果楝;细胞毒活性;化学成分;亚油酸
中图分类号:Q946.91;R961 文献标识码:A
StudyonChemicalConstituentsandCytotoxicActivityofMangrove
PlantXylocarpusgrantum
DAIHao-fu, MEIWen-li＊ , ZENGYan-bo, HONGKui, ZHUANGLing
StateKeyLaboratoryofTropicalCropsBiotechnology, theInstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,
ChineseAcademyofTropicalAgricultureSciences, Haikou571101 , China
Abstract:ThehexaneextractfromamangroveplantXylocarpusgrantumshowedstronggrowthinhibitioneffectonHela
celllinebyMTTassay.Todeterminethebioacitvecomponentsofhexaneextract, 17 compoundswereidentifiedbyGC/
MS.Mostofthecompoundswereorganicacids.Amongthem, oleicacid(24.89%), palmiticacid(24.82%)andlinole-
icacid(16.86%)weremajorcomponents.Itisreportedthatlinoleicacidhadgrowthinhibitionefectagainstlungade-
nocarcinomacels.
Keywords:Meliaceae;Xylocarpusgrantum;cytotoxicactivity;chemicalconstituents;linoleicacid
　　随着陆地药物资源的日益减少 ,向海洋寻找资
源变得日益迫切 。近年来 ,国内外在海洋生物抗肿
瘤活性物质筛选和研究上已取得初步成果 , NCI每
年筛选的 3万个新抗肿瘤化合物中 ,约有 5%来自
海洋生物。业已证实 ,约 10%的海洋动物提取物有
抗 P388白血病细胞及 KB细胞活性 , 3.5%的海洋
植物提取物有抗肿瘤活性或细胞毒活性[ 1] 。红树
林植物(Mangroveplants)是热带 、亚热带海区潮间
带特有高等植物 ,为耐盐 、常绿乔木或灌木 ,全球有
红树植物约 24科 83种(或变种),主要分布于东南
亚各国 ,其中我国分布约 20科 37种 [ 2] 。木果楝
(XylocarpusgrantumKoeniginNaturf.)又名海柚 ,为
楝科(Meliaceae)木果楝属(Xylocarpus)植物 ,在我国
分布于海南文昌和三亚沿海 [ 3] 。前人已从该植物
分离得到三萜 、甾醇和生物碱类化合物 [ 4-7] ,马来西
亚学者发现木果楝的水提物具有强烈的抗丝虫活
性[ 8] 。为开发和利用我国海南丰富的红树资源 ,寻
找具有开发潜力的生理活性成分 ,在活性筛选结果
指导下 ,我们对该植物化学成分做了初步研究。
1　实验部分
1.1　仪器和材料
HP5890/HP5973GC/MS联用仪(美国惠普公
司), MK3酶标仪(上海雷勃分析有限公司)。
木果楝(Xylocarpusgrantum)细枝条采自文昌
红树林保护站并得到该站的鉴定 。
95%乙醇 、正己烷 、乙酸乙酯和正丁醇均为工业
级 ,乙醚为分析纯;噻唑蓝(MTT)、MEM和平衡盐溶
液 PBS(北京欣经科公司 ), 丝裂霉素 C(Kyowa
HakkoKogyoCo.Ltd)。
细胞株及培养条件:宫颈癌 Hela细胞购自武汉
DOI :10.16333/j.1001-6880.2007.01.019
细胞保存中心 。细胞培养在含有 10%小牛血清的
MEM培养基中 ,于 5% CO2、湿度 90%以上 、37℃温
箱中培养 ,贴壁细胞用 0.25%胰酶消化 。
1.2　样品提取与精制
木果楝细枝条 (1.7 kg)砍成小段 ,粉碎后用
95%工业乙醇冷浸提取三次 ,提取液浓缩至无醇味
后分散于水中 ,依次用正己烷 、乙酸乙酯和正丁醇萃
取分别得到正己烷提取物(6.4 g,得率为 0.38%)、
乙酸乙酯提取物 (11.2 g)和正丁醇提取物
(20.4 g)。上述三种提取物各取一部分做细胞毒活
性筛选 ,另取正己烷提取物(0.5 g)溶于乙醚中 ,经
滤纸过滤后做 GC/MS分析。
1.3　体外宫颈癌 Hela细胞生长抑制实验(MTT
法)
实验设阴性对照组 、DMSO溶剂对照组 、阳性对
照组(丝裂霉素 C)和 6个不同浓度的待测样品。
收集对数生长期细胞 ,血球计数板计数 ,按每孔
4500个癌细胞量接种于 96孔平底细胞培养板中 ,
置于 5% CO2 、湿度 90%以上 、37 ℃温箱中培养 。
24 h后取出加入一定量的待测样品 ,继续培养 3 d
后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态 ,记录细胞
形态变化情况 ,接着每孔加入 5mg/mL的 MTT溶液
(溶于平衡盐溶液 PBS)50 μL, 37 ℃反应 4 h后 ,将
细胞培养液吸出 , 每孔加入 100 μLDMSO将
Formazane充分溶解 ,将细胞培养板置于 MK3酶标
仪上 ,用 570 nm波长测各孔的吸光度 (A),按下列
公式求生长抑制率 ,样品活性结果以半数抑制浓度
(IC50)表示 。
生长抑制率 =(1-用药组平均 A值对照组平均 A值)×100%
1.4　正己烷提取物 GC/MS分析
气相色谱条件:石英毛细管柱 HP-FFAP(30 m
×0.25 mm, 0.25 μm),程序升温:从 80 ℃开始 ,以
4 ℃ /min升到 120 ℃,再以 2 ℃ /min升温到 190
℃,再以 10 ℃ /min升温到 220℃,载气为 He,柱流
量 1.0 mL/min,进样口温度 250℃,分流比 80∶1。
质谱条件:EI源 ,电离电压 70 eV,离子源温度
230 ℃,扫描范围 40 ～ 500 aum,进样量 1.0μL。
用 GC/MS联用仪计算机的 Nist98谱库检索挥
发油各组分的质谱数据 ,对机检结果和有关保留时
间和标准图谱核对 ,用面积归一化法确定相对含量。
2　结果与讨论
以 MTT法对正己烷提取物 、乙酸乙酯提取物和
正丁醇提取物进行宫颈癌 Hela细胞生长抑制活性
测试 ,结果表明正丁醇提取物没有活性 ,而正己烷提
取物和乙酸乙酯提取物均显示了一定的抑制活性 ,
其 IC50值分别为 7.5和 12.5 μg/mL。由于正己烷
提取物对宫颈癌 Hela细胞生长抑制活性较强 ,其
IC50 <10.0 μg/mL,值得做进一步的研究 。
采用 GC/MS对上述精制后的木果楝正己烷提
取物中的化学成分进行分析 ,共鉴定了 17个化学成
分(表 1)。从分析结果可以看出 ,有机酸类化合物
为主要成分 ,占正己烷提取物的 71.6%,其中含量
最大的 3个成分为:油酸(Oleicacid, 24.89%)、棕
榈酸 (Palmiticacid, 24.82%)和亚油酸 (Linoleic
acid, 16.86%),剩余的化合物以酯类为主 ,另外还
有两个醇类化合物 。由于提取过程使用过乙醇和少
量甲醇 ,因此酯类化合物有可能是样品中有机酸发
生酯化反应产生的人工产物 。作为木果楝正己烷提
取物中的主要活性成分的棕榈酸 、油酸 、亚油酸 ,
Siegel曾报道这三种脂肪酸[ 9]对小鼠腹水瘤细胞均
有体外细胞毒活性 ,此外还有文献对亚油酸的人肺
腺癌细胞抑制活性做了报道 [ 10] 。上述脂肪酸是否
就是海洋放线菌 124092正己烷提取物中的活性成
分 ,尚须做进一步的研究证实 。
表 1　木果楝正己烷提取物 GC/MS定性定量分析结果
Table1　ChemicalconstituentsofhexaneextractfromXylocarpusgrantum
保留时间
tR(min)
化合物
Compound
分子式
Molecularformula
相对百分含量
Content(%)
27.10 异棕榈酸甲酯 Methylisopalmitate C17H34O2 4.93
27.64 棕榈酸乙酯 Ethylhexadecanoate C18H36O2 1.04
29.75 异硬脂酸甲酯 Methylisostearate C19H38O2 1.57
29.93 油酸甲酯 Methyloleate C19H36O2 2.14
30.44 亚油酸甲酯 Methyllinoleate C19H34O2 4.16
30.83 亚油酸乙酯Ethyllinoleate C20H36O2 0.87
75Vol.19 戴好富等:红树林植物木果楝细胞毒活性和化学成分研究
30.90 邻苯甲酸二丁酯 Dibutylphthalate C16H22O4 4.28
31.14 α-亚麻酸甲酯 Methylα-linolenate C19H32O2 1.63
31.70 叶绿醇 Phytol C20H40O 0.71
32.08 硬脂酸 Stearicacid C18H36O2 4.82
32.72 油酸 Oleicacid C18H34O2 24.89
33.04 邻苯甲酸二乙基己酯 Bis2-ethylhexylbutylphthalate C24H38O4 2.30
33.85 亚油酸 Linoleicacid C18H32O2 16.86
34.00 12-甲基-2(反), 13(反)-十八二烯醇 12-Methyl-E, E-2, 13-octadecadien-1-ol C19H36O 4.01
34.49 棕榈酸 Palmiticacid C16H32O2 24.82
34.82 1-三十二烷醇 1-Dotriacontanol C32H66O 0.72
34.96 8-甲基-9(顺)-十四烯酸 Z-8-Methyl-9-tetradecenoicacid C15H28O2 0.25
　　致谢:本工作得到海南大学分析测试中心的大
力支持 ,深表谢意 !
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76 天然产物研究与开发　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　Vol.19