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[收稿日期] 2010-09-26
[ 作者简介] 朱婷 ,女 ,硕士研究生 ,电话:13476105064 , E-mai l:zhu ting066@yahoo. cn　[ 通讯作者] 刘明星 ,男, 博士后 ,教授 ,电话:88032320,
E-mail:lmxing@mai l. hbut . edu. cn
瓜子金发酵总皂苷的抗炎镇痛活性
朱婷 ,刘明星 ,郭申娥 ,李小莉 ,王贤文　(湖北工业大学生物工程学院 ,湖北 武汉 430068)
[ 摘要] 　目的:研究瓜子金发酵液中所含总皂苷的抗炎镇痛活性。方法:提取瓜子金发酵液中的总皂苷 , 采用二甲苯诱导小
鼠耳廓肿胀试验模型和腹腔毛细血管通透性试验观察抗炎作用;采用小鼠扭体和热板试验观察镇痛作用;采用最大耐受剂量
法进行急性毒性试验 ,观察小鼠出现的毒性反应和剂量毒性效应的关系。结果:瓜子金发酵总皂苷对二甲苯致小鼠耳廓肿
胀 、冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增高均有明显的抑制作用;能减少冰醋酸刺激致痛小鼠的扭体次数及提高热板致痛小鼠的
痛阈值;小鼠灌胃最大耐受剂量13. 3 g kg - 1 , 相当于临床用量的 100 倍。结论:瓜子金发酵总皂苷具有显著的抗炎 、镇痛作
用 ,且毒性较低。
[ 关键词] 　瓜子金;发酵;总皂苷;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285. 5　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2011)12-0996-03
Study on the anti-inflammatory and analgesic effect of total saponin from fermented Pol ygala
j aponica Houtt.
ZHU Ting , LIU Ming-xing ,GUO Shen-e , LI Xiao-li ,WANG Xian-wen(Bioengineering College of H ubei Unive rsi-
ty of Technology , Hubei Wuhan 430068 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study on the anti-inflammato ry and analg esic effect o f to tal saponin from fe rmented Polygala
j aponica H outt. METHODS　To tal saponins wa s ex tracted from fermented Polygala japonica HOU TT . Models of anti-in-
flammato ry r eaction we re studied by dime thy l benzene induced ear edema and celiac capillar ys permeability experiments. Writ-
hing test and ho t-plate w ere used to study the analgesic effects. The maximum tolerated do se method was used to observ e the
tox ic reaction and do se to xic effect r elationship. RESULTS　The to tal saponin f rom fe rmented Polygala j aponica HOUTT in
mice significantly inhibited the auricle inflamma tion and the increase o f abdominal capillary pe rmeability . In addition , it signifi-
cantly reduced w rithing times and prolonged the time of pain threshold. The maximal tole rated do se o f intrag astric administra-
tion for mice was 13 . 3 g kg - 1 , equiva lently 100 times clinic dosage. CONCLUSION　The present study demonstra ted in our
study that the to ta l saponin f rom fermented Polygala japonica has significantly anti-inf lammato ry and analg esic effect , is also
safe fo r clinical administmtion.
KEY WORDS:Polygala j aponica Houtt;fermentation;extr acts of to tal saponin;anti-inflammato ry activ ity;ana lge sic activity
　　瓜子金(Polygala japonica Hout t. ),又名小
远志 、地藤草 、银不换 ,为远志科远志属植物 ,或卵叶
远志 Polygala sibirica L. 的全草或根 ,多年生草
本 ,主要分布在我国东北 、华北 、西南及长江流域等
地 ,以其全草或地上部分入药 。瓜子金最早见载于
《植物名实图考》,有祛痰止咳 、活血化淤 、解毒消肿
等作用 ,主要治疗骨髓炎 、骨关节结核 、多发性脓肿 、
急性扁桃体炎 、咽喉炎 、口腔炎 、小儿肺炎 、泌尿系统
结石 、疔疮肿瘤等 。为探讨瓜子金通过发酵后 ,抗炎
镇痛作用的活性部位 ,本实验对瓜子金发酵后提取
的总皂苷进行了抗炎镇痛作用研究 ,以便为瓜子金
及其新剂型全面深入的研发提供理论依据 。
1　材料
紫外可见光分光光度计(PerKin Elmer , UV -
Lambda 35型);智能热板仪(上海继德教学实验器
械厂 , JD- YLS - 6B);瓜子金(购自亳州市华申药
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业有限公司 ,经湖北工业大学制药工程专业李小莉
教授鉴定为正规产品);糯米(武汉怡乐多贸易有限
公司 ,批号 090320);甜酒曲(湖北安琪酵母股份有
限公司 ,批号 090322);吲哚美辛肠溶片(上海辛帕
斯制药有限公司 ,批号 071211);二甲苯(AR ,国药
集团化学试剂有限公司 ,批号 080928);其他试剂均
为分析纯;昆明种系实验小白鼠 ,体质量 20 ～ 25 g
[华中科技大学同济医学院实验动物中心 ,许可证
号:SCXK(鄂) 2008-0005;所有试验动物均食用全
价混合饲料 ,自由摄食 、取水] 。
2　方法与结果
2. 1　瓜子金发酵总皂苷的制备　称取瓜子金干草
200 g ,粉碎;酒曲 21 g ;糯米3 000 g ,蒸制后摊凉 。
在摊凉后的糯米中加入瓜子金粉末和甜酒曲 ,混合
均匀 ,装入已灭菌的三角瓶中 , 28 ℃发酵 72 h 。依
次用三氯醋酸 、乙醇除蛋白质和多糖 ,继用石油醚 、
正丁醇进行萃取 ,收集正丁醇萃取液 ,将溶剂减压蒸
干 ,即得瓜子金发酵总皂苷 ,以超纯水为溶剂配制不
同浓度样品 ,4 ℃低温保存 ,备用 。
2. 2　分组及给药　分别取 50只雄性小鼠 ,随机分为 5
组 ,即空白对照组(给予等量生理盐水)、阳性对照组
(给予吲哚美辛肠溶片)、瓜子金发酵总皂苷提取物高 、
中、低剂量组;按0. 2 mL (10 g)-1 ,ig ,连续给药 5 d。
2. 3　二甲苯所致小鼠耳肿胀试验[ 1-3] 　末次给药后
1 h ,于小鼠右耳用微量注射器滴二甲苯0 . 1 mL
(10 g)-1 ,令二甲苯浸满鼠耳两面 , 1 h 后将小鼠颈
椎脱位处死 ,用直径 8 mm 打孔器在左右两耳廓相
同部位打孔取样 ,及时称量 。以左右耳片质量之差
为肿胀度 ,抑制率=(空白组肿胀程度-药物组肿胀
程度) /空白组肿胀程度×100%, t 检验结果表明 ,
瓜子金发酵总皂苷高 、中 、低剂量组与空白组比较 ,
差异均有显著性(P<0. 01 、P<0 . 05),结果见表 1 。
表 1　二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响( x±s , n=10)
Tab 1　Effect on tested mice caused auricle inflammation by
xy lene in mice( x±s , n=10)
组别 剂量 /
g k g- 1
耳肿胀度 /
m g
肿胀抑制率 /
%
空白组 15. 9±3. 5 —
阳性对照组 0. 02 5. 6±1. 6a 64. 57
瓜子金发酵总皂苷高剂量 6 9. 1±3. 6a 42. 52
瓜子金发酵总皂苷中剂量 3 10. 5±4. 2b 33. 86
瓜子金发酵总皂苷低剂量 1. 5 11. 5±3. 1b 27. 56
注:与空白组比较 , a P<0. 01 , bP<0. 05
2. 4　小鼠腹腔毛细血管通透性试验[ 1-3] 　末次给药
后 1 h ,尾静脉注射(iv) 0. 5 %伊文思蓝生理盐水
0. 1 mL (10 g)-1 ,同时腹腔注射(ip) 0 . 6 %醋酸
溶液0. 1 mL (10 g)-1 , 20 min 后将小鼠颈椎脱位
处死 ,剪开腹腔 ,用 6 mL 生理盐水分次冲洗腹腔 ,
吸出腹腔液 ,合并 ,定容至 10 mL ,4 000 r min-1离
心 20 min ,取上清液于 590 nm 处测定其吸光度。 t
检验结果表明 ,瓜子金发酵总皂苷高 、中 、低剂量组
与空白组比较 , 差异均有显著性(P <0. 01 , P <
0. 05),结果见表 2。
表 2　醋酸对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响( x±s , n=10)
Tab 2 　Effect on acetic acid-induced capillar y permeability
hyper thy roidism in mice( x±s , n=10)
组别 剂量 / g kg- 1 OD 值
空白组 0. 038±0. 002
阳性对照组 0. 02 0. 017±0. 005a
瓜子金发酵总皂苷高剂量 6 0. 021±0. 010a
瓜子金发酵总皂苷中剂量 3 0. 026±0. 013b
瓜子金发酵总皂苷低剂量 1. 5 0. 029±0. 011b
注:与空白组比较 , aP<0. 01 , bP<0. 05
2. 5　小鼠醋酸所致扭体反应试验[ 3-5] 　末次给药后
1 h ,小鼠腹腔注射(ip) 0. 6 %醋酸溶液0. 1 mL (10
g)- 1 ,记录注射醋酸后 15 min内小鼠扭体次数。镇
痛抑制率=(空白组扭体次数-药物组扭体次数) /
空白组扭体次数×100%, t检验结果表明 ,瓜子金
发酵总皂苷高剂量组与空白组比较差异有显著性
(P<0 . 05),中 、低剂量组与空白组之间差异无显著
性(P>0. 05),结果见表 3。
表 3　醋酸对小鼠所致扭体反应的影响( x±s , n=10)
Tab 3 　Effect on writhing ro sponse caused by ace tic acid
g lacial( x±s , n=10)
组别 剂量
/ g kg -1 扭体次数
镇痛抑制率
/%
空白组 22. 1±8. 6
阳性对照组 0. 01 2. 0±2. 2a 90. 95
瓜子金发酵总皂苷高剂量 6 8. 0±7. 0a 63. 80
瓜子金发酵总皂苷中剂量 3 15. 1±7. 4b 31. 67
瓜子金发酵总皂苷低剂量 1. 5 16. 5±12. 6 25. 34
注:与空白组比较 , aP<0. 01 , bP<0. 05
2. 6　小鼠热板致痛试验[ 3-5] 　取小鼠置于(55. 0±
0. 5)℃热板上 ,以小鼠舔后足反应的潜伏期为痛阈
指标 ,选取于热板仪内不跳跃 、5 ～ 15 s 内出现反应
的小鼠 50只 ,随机分成 5 组 ,灌胃(ig)药物或等量
生理盐水 。观察时为防止足部烫伤 ,设截止时间为
60 s ,超过 60 s的按 60 s记录。基础痛阈在给药前
测 2次取其均值 。末次给药后 30 , 60 , 90 , 120 min
将小鼠置热板测定痛阈 1次 。 t检验结果表明 ,瓜
子金发酵总皂苷高 、中剂量组与空白组比较差异有
显著性(P<0. 01 , P <0. 05),低剂量与空白组之间
差异无显著性 (P>0. 05),结果见表 4。
2. 7　口服急性毒性试验[ 6-7] 　以最大耐受剂量法
(MTD)进行试验 ,选取 20 ～ 25 g 昆明种小鼠 30
只 , ♀♂各半 ,随机分成 3 组 ,即瓜子金发酵总皂苷
997 中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2011 Ju n , Vol 31 , No. 12
　　表 4　小鼠热板致痛的影响(s , x±s , n=10)
Tab 4　Effect on pain caused by ho t plate in mice(s , x±s , n=10)
组别 剂量 / g kg - 1 基础痛阈值 30 min 60 min 90 min 120 min
空白组 11. 5±1. 4 12. 9±2. 1 11. 3±2. 8 13. 6±2. 9 15. 5±4. 6
阳性对照组 0. 02 11. 3±1. 6 24. 1±3. 9a 27. 6±13. 2a 17. 6±6. 5 22. 2±8. 2
瓜子金发酵总皂苷高剂量 6 10. 9±2. 0 21. 5±6. 2a 24. 9±7. 2a 26. 0±7. 8 25. 0±7. 1b
瓜子金发酵总皂苷中剂量 3 11. 1±1. 9 17. 5±5. 6 21. 3±5. 0a 18. 5±5. 9b 22. 5±5. 4b
瓜子金发酵总皂苷低剂量 1. 5 11. 2±1. 5 16. 0±5. 0 17. 7±9. 8 21. 5±10. 3 18. 5±3. 0
注:与空白组比较 , a P<0. 01 , bP<0. 05
提取物高 、中 、低 3个剂量组 ,每组 10只 。动物经隔
夜空腹后 ,一次性灌胃(ig)瓜子金发酵总皂苷水溶
液 ,观察 7 d内的死亡现象及不良反应 ,结果见表 5。
表 5　急性毒性试验结果(n=10)
Tab 5　Result o f acute to xicity test(n=10)
组别 剂量 /g k g- 1 死亡率 /% 存活率 /%
瓜子金发酵总皂苷高剂量 13. 3 0 100
瓜子金发酵总皂苷中剂量 10 0 100
瓜子金发酵总皂苷低剂量 7. 5 0 100
　　由表 5可知 ,所有小鼠均健康地存活 ,可以认定
瓜子金发酵总皂苷无不良反应 ,安全可靠。
2. 8　数据统计处理 　采用 SPSS 10 . 0统计软件进
行分析 ,各实验组与对照组之间采用 t 检验进行比
较。
3　讨论
总皂苷是瓜子金的主要成分 ,但是瓜子金经过
发酵后总皂苷是否有药理活性 ,目前还未见报道 ,所
以本实验对瓜子金发酵后的总皂苷(瓜子金发酵总
皂苷)进行了提取并研究其抗炎镇痛作用 ,以便为瓜
子金的进一步深入研究开发提供理论支持或参考 。
抗炎实验结果表明 ,瓜子金发酵总皂苷能抑制
二甲苯诱发的小鼠耳廓肿胀 , 当给药剂量为 6 g
kg - 1时与阳性对照组比较差异无显著性 ,其作用强
度相近 ,并且其对冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增
高有明显的抑制作用 ,其作用强度与剂量有关 ,剂量
越大作用越明显 ,表明瓜子金发酵总皂苷具有较好
的抗炎作用 ,是瓜子金具有抗炎作用的主要活性部
位。镇痛实验结果证明 ,瓜子金发酵总皂苷能抑制
醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反应 ,减少各鼠的扭体
次数以及提高热板致痛小鼠的痛阈值 ,说明瓜子金
发酵总皂苷具有一定的镇痛效果;由小鼠口服急性
毒性实验可知 ,瓜子金发酵总皂苷毒性较低。本研
究结果为进一步深入研究瓜子金发酵总皂苷的药理
作用奠定了基础 ,瓜子金发酵总皂苷抗炎镇痛作用
的活性单体及其作用机制有待进一步考察 。
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[ 基金项目] 河北省科技攻关项目(编号:05276101D-88);河北教育厅科学研究计划项目(编号:y2009315);河北省卫生厅医学科学研究重点课
题计划项目(编号:05015;20090570);河北省中医药管理局科研计划课题(编号:2008072)　[ 作者简介] 赵燕燕 , 女 ,博士 , 教授 ,电话:0312-
5075602 , E-mail:zh aoyany606@t om. com
高效液相色谱法同时测定体内辛伐他汀和非诺贝特酸的含量
赵燕燕1 ,白洁1 ,苏芳2 ,韩媛媛1 ,王翠玲2 ,李月秋1 　(1 . 河北大学医学实验中心 ,河北 保定 071000;2. 河北大学药学
院 ,河北 保定 071002)
[ 摘要] 　目的:建立双波长高效液相色谱法同时测定体内辛伐他汀和非诺贝特酸浓度的方法。方法:移取血清 , 加入环己烷-
二氯甲烷(3∶1)混合溶液 , 沉淀蛋白后离心 , 上清液经氮气吹干 , 加流动相溶解后上机分析。采用 Shimadzu VP-ODS 分析柱
(150 mm×4 . 6 mm), 二极管阵列矩阵检测器 ,测定波长:辛伐他汀为 238 nm , 非诺贝特酸为 300 nm , 流动相:甲醇-水-10 %磷
酸(85∶14∶1),流速1 . 0 mL min- 1 ,柱温为 25 ℃。结果:辛伐他汀 、非诺贝特酸分别在0 . 20 ～ 25 mg L -1(r=0 . 999 9)和 0. 05
998 中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2011 Jun , Vol 31 , No. 12