全 文 ：2012 年 12 月第 14 卷第 6 期
Decemberr 2012，Vol. 14，No. 6
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
作者简介:曾勇(1968 －) ，男，东风汽车公司茅箭医院主管药师，研究方向:医院药学。
通讯作者:瞿京红(1969 －) ，女，东风汽车公司总医院副主任药师，研究方向:医院药学，电子信箱:dfyyqq@ 163． com。
高效液相色谱法测定不同地区飞扬草中
杨梅苷的含量
曾勇1，胡筱梅2，瞿京红2
(1．东风汽车公司茅箭医院药剂科，湖北 十堰 442000;2．东风汽车公司总医院，湖北 十堰 442000)
摘要:目的 采用高效液相色谱法( HPLC) 分析不同产地飞扬草中有效成分杨梅苷的含量。方法 以 ZORBAX
SB － C18 ( 250mm × 4． 6mm，5 μm) 色谱柱，以乙腈 － 0． 1%磷酸溶液( 29 ∶ 71) 作为流动相，流速为1． 0 mL /min，柱温:
30℃ ;检测波长: 352 nm。结果 杨梅苷在 20min内得到较好分离，在 0． 014 － 0． 280mg /mL范围内有良好的线性关系，
平均加样回收率为 99． 1%，RSD为 1． 32%。结论 本方法简便，准确，重复性好，为飞扬草的质量控制提供科学依据。
关键词:飞扬草;产地; 高效液相色谱法;杨梅苷
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-987X( 2012) 06-0043-03
doi:10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2012. 06. 14
Determination of Myricetrin in Euphorbia Hirta L． of
Different area by HPLC
ZENG Yong1，HU Xiaomei2，QU Jinghong2
(1． Department of Pharmacy，Dongfeng Maojian Hospital，Shiyan 442000;2． Dongfeng General Hospital，Shiyan 442000)
Abstracts:Objective To establish an HPLC method for determining myricetrin in Euphorbia Hirta L． of different area． Method The
ZORBAX SB － C18(250mm ×4． 6mm，5 μm)column was used，the mobile phase consisted of acetonitrile:0． 1% H3PO4(29∶ 71) ，the flow
rate was 1． 0mL /min，the column temperature was 30℃ the detecting wavelength was at 352 nm． Results Myricetrin was successfully sepa-
rated within 20 min，the linear response range was 0． 014 － 0． 28mg /mL． The average recovery was 99． 1%，RSD was 1． 32% ． Conclusions
The method is simple，accurate and repeatable，it can provide evidence for further development and utilization of this crude drug．
Key words:Euphorbia Hirta L．;Different area;HPLC;Myricetrin
飞扬草为大戟科植物飞扬草(Euphorbia hirta L．)的干燥全
草，收载于《中国药典》2010 年版一部。在我国南方民间应用广
泛，具有清热解毒，利湿止痒，通乳之功效。用于肺痈，乳痈，疔
疮肿毒，牙疳，痢疾，泄泻，热淋，血尿，湿疹，脚癣，皮肤瘙痒，产
后少乳等症［1］。现代药理研究表明，飞扬草主要含有黄酮苷、
酚类和三萜等有效成分，飞扬草总黄酮对急性炎症有较强抑制
作用，且具有显著的抗炎、镇痛和止泻作用［2］。化学成分研究
发现，杨梅苷在总黄酮中含量较高，可能为发挥疗效的作用物
质基础［3］。因此，研究飞扬草中杨梅苷的具体含量及分布情
况，对开发飞扬草资源，进一步利用该传统中药进行现代化中
药研究提供可靠的参考。在实验中发现，各产地的飞扬草中杨
梅苷含量差异较大，本实验采用高效液相色谱(HPLC)法对湖
北药材市场上不同产地飞扬草的杨梅苷含量进行了测定。现报
道如下:
1 材料
1． 1 仪器
Dionex － U3000 液相色谱仪(Dionex Chemeleon 色谱工作
站，DAD二极管阵列检测器，德国戴安公司) ;AEU － 210 型电子
天平(d = 0． 1 mg，日本岛津) ;SK5200H 超声波清洗机(上海科
导超声仪器有限公司)。
1． 2 试药
杨梅苷对照品(供含量测定用，中国药品生物检定所，批
号:111860 － 201104) ;乙腈(色谱纯，美国 Fisher公司) ;10 批飞
扬草药材(购自十堰市药材公司) ，经湖北省十堰市药品检验所
·34·
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
2012 年 12 月第 14 卷第 6 期
December 2012，Vol. 14，No. 6
陈银华副主任中药师鉴定为大戟科植物飞扬草 Euphorbia hirta
L．的干燥全草;水为双蒸水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备
对照品溶液的制备:分别精密称取经五氧化二磷减压干燥
器干燥至恒重的杨梅苷对照品适量，置量瓶中，加甲醇制成含
杨梅苷 0． 28mg /mL的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备:取供试品药材粗粉约 1． 0g，精密称定，
置 50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25mL，称定重量，静置
2h，超声处理(功率 250W，频率 50kHz)30min，放冷，再称定重
量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2． 2 色谱条件［4 － 5］
经杨梅苷的紫外吸收曲线图谱分析，杨梅苷的最大吸收波
长在 352nm，故选择 352nm作为检测波长。本实验曾经试过水
－乙腈、水 －甲醇等不同的流动相系统，发现水 －乙腈系统加
入 0． 1%磷酸可获得较好峰形，确定流动相比例为乙腈 － 0． 1%
磷酸(21∶ 79)获得较好的分离。高效液相色谱图中，理论塔板
数按杨梅苷峰计算不小于 3500，分离度大于 1． 5。其他成分对
杨梅苷的含量测定无影响，见图 1。
图 1 HPLC色谱图
2． 3 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、5． 0、10． 0 mL分别
置 10 mL量瓶中，以甲醇定容至刻度，摇匀。在选定条件下进行
分析，以浓度(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得到回归方程
为:Y = 119． 414X + 1． 5571，r = 0． 9998。结果表明杨梅苷在
0． 014 － 0． 280mg /mL与峰面积线性关系良好。
2． 4 精密度试验
取杨梅苷对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样 6 次，每
次 10μL，色谱峰保留时间稳定，计算峰面积 RSD 为 0． 74%，表
明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性试验
精密吸取 2． 1 项下的供试品溶液，室温下分别在 0、2、4、8、
12、24h进样 10μL，测定杨梅苷峰面积，计算 RSD 为 1． 49%，表
明处理后的供试品溶液在 24h内稳定。
2． 6 重复性试验
称取同一批药材(产地:广西桂林，批号:100917) ，平行 6
份，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，依法测定，结
果杨梅苷的平均含量为 3． 18mg /g，RSD为 2． 03%。
2． 7 加样回收率试验
精密称取已知含量的飞扬草样品(产地:广西桂林，批号:
100917) ，9 份，每份 0． 5g，分为 3 组，每组 3 份，分别精密加入适
量对照品溶液。按 2． 1 项下的方法制备供试品溶液，进样
10μL，测定，结果见表 1。
表 1 回收试验结果
成
分
取样量
(g)
原有含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
杨
梅
苷
0． 5013 1． 5941 1． 40 2． 9919 99． 8
0． 4891 1． 5553 1． 40 2． 9580 100． 2
0． 4972 1． 5811 1． 40 2． 9353 96． 7
0． 5008 1． 5925 1． 68 3． 2421 98． 2
0． 4997 1． 5890 1． 68 3． 2863 101． 0
0． 5002 1． 5906 1． 68 3． 2585 99． 3
0． 4962 1． 5779 1． 96 3． 5095 98． 6
0． 5038 1． 6021 1． 96 3． 5601 99． 9
0． 4933 1． 5687 1． 96 3． 4944 98． 2
99． 1 1． 32
2． 8 样品测定
按上述色谱条件对 10 批样品进行含量测定，结果见表 2。
表 2 样品测定结果 (n = 3)
产地 批号 杨梅苷(mg /g)
广西桂林 100917 3． 18
广西柳江 101025 3． 43
广西南宁 101102 3． 06
福建福州 100826 5． 19
福建漳州 100914 6． 02
福建莆田 100930 5． 58
广东江门 100823 2． 13
广东梅州 100906 1． 95
广东肇庆 100924 1． 86
浙江衢州 100926 1． 32
3 讨论
杨梅苷为 3’，4’，5’，5，7 －五羟基黄酮 － 3 － O － α － L －鼠
李糖苷，具有很强的抗氧化能力，此外杨梅苷还具有收缩血管、
降血糖、保肝、利胆、抗炎、抗突变、抗肿瘤等多种作用［6］。由于
其具有多个羟基，极易被氧化［7］。有研究表明［8］，在 pH 6 － 7
时较为稳定，在 pH 1 － 5 或 pH 8 － 10 时含量显著下降，在 pH 11
时则完全破坏;当环境温度为 100℃时，其含量则下降 50%。因
此在飞杨草中提取杨梅苷或分析杨梅苷时，应尽量避免高温及
强酸强碱的破坏，并且由于杨梅苷含有邻二酚羟基的结构，提取
和分析时也应避免和金属离子(如 Al3 +、Pb2 +、Fe3 +)相接触，以
免形成螯合物。本研究所采用的流动相经测定 pH 值在 5． 2 －
6． 0 范围内，对杨梅苷的测定无影响。
2010年版《中国药典》尚未收载其含量测定项，但其应用广
泛。本研究建立的飞扬草测定方法可为其质量标准化研究提
·44·
2012 年 12 月第 14 卷第 6 期
Decemberr 2012，Vol. 14，No. 6
湖北中医药大学学报
Journal of Hubei University of Chinese Medicine
供参考。从上述测定结果可见，不同产地商品飞扬草中有效成
分杨梅苷含量有一定的差异，所以加强药材来源管理和对药材
质量控制是很有必要的。该实验结果为评价不同产地飞扬草
质量提供了科学依据。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典［S］．一部． 北京:中国医
药科技出版社，2010:46．
［2］ 章佩芬，罗焕敏． 飞杨草药理作用研究概况［J］． 中药材，2005，28
(5) :437 － 438．
［3］ 江苏新医学院． 中药大辞典［M］． 上海:上海人民出版社，1977，
138 － 139．
［4］ 袁文娟，高文分，孟芹，等． HPLC 法测定千紫红颗粒中杨梅苷的
含量［J］． 中国野生植物资源，2011，31(1) :72 － 74．
［5］ 齐洁，万竹青，李默影，等． HPLC 法测定杨梅叶中杨梅苷的含量
［J］． 云南中医中药杂志，2011，32(11) :35 － 37．
［6］ 张立． 杨梅苷对四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的初步研究［J］．
中国现代药物应用，2009，3(15) :29 － 30．
［7］ 王晓云，姜子涛． 天然抗氧剂二氢杨梅素研究进展［J］． 食品研究
与开发，2007，28(2) :185 － 188．
［8］ 赵丽，李宗阳，张泽生，等． 杨梅苷的稳定性研究［J］． 食品研究与
开发，2011，32(12) :9 － 11．
(收稿日期:2012-08-13 编辑:林飞)
作者简介:王昭(1987 －) ，女，湖北中医药大学 2010 级硕士研究生，研究方向:中药资源的品种质量及开发研究。
通讯作者:潘宏林(1954 －) ，男，湖北中医药大学教授，研究方向:中药资源的品种质量及开发研究，电话:13659802286。
【中药园地】
茯苓菌丝的显微特征研究
王昭1，潘宏林2，黄雅芳1
(1．湖北中医药大学 2010 级硕士研究生，湖北 武汉 430065;2．湖北中医药大学药学院，湖北 武汉 430065)
关键词:茯苓;菌丝; 显微;核相
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-987X( 2012) 06-0045-02
doi:10. 3969 / j. issn. 1008 － 987x. 2012. 06. 15
茯苓是我国传统常用中药材及药食兼用资源，其物种为多
孔菌科真菌茯苓 Poria cocos (Schw． )Wolf［1］。野生茯苓在我
国分布较广，但零星分散，茯苓药材多由人工栽培提供，我国是
世界上唯一进行茯苓栽培的国家
［2］。与其他药(食)用菌相比，
茯苓的基本生物学特性的研究较为落后
［3］。为了给茯苓的深
入研究提供依据，须弄清茯苓菌丝的形态、核相。本实验通过对
茯苓菌丝进行 Giemsa染色，制备水装片观察其核相，并与其他
真菌菌丝核相进行比较，得出茯苓菌丝显微形态特征。
1 材料与方法
1． 1 供试菌株
茯苓菌株:AH(安徽岳西) ，Ts(英山石镇)。
对照菌株:草菇，日本滑菇。
1． 2 供试培养基
PDA培养基:原料为马铃薯(去皮)200g，葡萄糖 20g，琼脂
20g，水 1000mL。
配制步骤:马铃薯去皮 (挖去发芽薯块芽眼) ，洗净，切成薄
片，用水冲洗干净，称取 200g，加水 1000mL，煮沸至软而不烂为
度，用纱布 (用水浸湿后拧干)过滤，取滤液。称取琼脂 20g，加
入马铃薯滤液中，煮至全部溶化。溶液中加入葡萄糖，搅拌溶
化，并加水补足 1000mL，分装于锥形瓶中，加塞，用报纸包扎。
将配制的母种培养基置高压灭菌锅内 ，用 1． 0kg /cm2 压力 (温
度 121. 3℃)灭菌 30 min;试管趁热摆放斜面，冷却备用。培养
基经灭菌后，放在 24℃温箱培养 24h，检查灭菌效果，无菌生长
者方可使用
［4］。
1． 3 Giemsa染色剂的配制
称量 Giemsa粉 0． 5g、甘油 33mL，在研钵中先用少量甘油和
Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余的甘油倒入，56℃保
持 2h，加入 33mL甲醇，置棕色瓶内 4℃冰箱中备用。将 2 份0． 2
mol /L磷酸缓冲液(pH 7)与 1 份 Giemsa 母液相混合，现用现
配
［5］。
1． 4 染色样品的制备
在无菌操作台内，将锥形瓶内的培养基倒入培养皿中，约倒
至培养皿高度的一半左右，在无菌操作台内待冷却之后待用。
将供试菌株的菌丝体接种到平板中央，每种菌株重复操作 5 次，
每个培养皿插 3 片盖玻片，在离菌株 1 － 1． 5 cm处，斜插 1 片灭
菌的盖玻片，置于 24℃的培养箱中培养，待生长的菌丝爬上盖
玻片时取出
［5］。
·54·