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傣药倒心盾翅藤化学成分预实验



全 文 :Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第20卷 第5期
Vol.20 No. 5
2014年 5月
May.2014
反应较少。
参考文献
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(收稿日期:2013-10-10 编辑:湘泉)
傣药倒心盾翅藤化学成分预实验*
李晓花,牛迎凤,元 超,张丽霞(通讯作者)
(中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所云南分所,云南 景洪 666100)
[摘要] 目的:采用系统预实验法对倒心盾翅藤藤茎可能含有的化学成分进行预实验,探索倒心盾翅藤的化学成分。方
法:采用试管反应法、纸反应法、薄层层析法,对倒心盾翅藤藤茎的水、95%乙醇、石油醚提取物进行研究,通过多种指示剂和
显色剂的显色反应和沉淀反应,对倒心盾翅藤可能含有的化学成分进行初步研究。结果:倒心盾翅藤藤茎中可能含有萜类、
多酚、鞣质等化学成分。结论:初步确定了倒心盾翅藤中含有的有效成分,为倒心盾翅藤的进一步研究提供实验基础。
[关键词] 倒心盾翅藤;化学成分;预实验
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X(2014)05-0017-05
The Chemical Constituents of Aspidopterys Obcordata Hemsl by Comprehensive
Preliminary Test
LI Xiao-hua, NIU Yin-feng, YUAN Chao, ZHANG Li-xia (Corresponding Author)
(Yunnan branch of Implad, China Academy of Medical Sciences and Beijing Union Medical College, Jinghong Yunnan 666100)
[Abstract] Objective: To study the chemical constituents of Aspidopterys obcordata Hemsl by comprehensive preliminary
test. Methods: Components of water extraction, 95% EtOH extraction and petroleum extraction from Aspidopterys obcordata
Hemsl were studied by using tube reaction, paper reaction and TLC methods. The active components of Aspidopterys obcordata
Hemsl were preliminary investigated according to precipitation reaction and chromogenic reaction of several indicator and chro-
mogenic agent. Results: Terpenoids, polyphenols and tannins may be existed in Aspidopterys obcordata Hemsl. Conclusion: The
active components of Aspidopterys obcordata Hemsl were preliminary determined. The results provided experimental data for
further study.
[Key Words] Aspidopterys obcordata Hemsl; Chemical constituents; Preliminary test
傣药倒心盾翅藤来源于金虎尾科植物倒心盾翅
藤Aspidopterys obcordata Hemsl. var. obcordata的
干燥藤茎,分布于云南省西南、南部至东南部,主要
生长在山地雨林、沟谷雨林及季雨林的林缘、疏林及
灌丛中,被《云南省中药材标准-傣族药》(2005年版)
收载[1]。倒心盾翅藤以藤入药, 其性涩、凉,有消炎利
尿、清热排石之功效,民间主要用于治疗尿路感染、*基金项目:西双版纳州科技三项费(YX201107)
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2014.05.007
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表1 倒心盾翅藤水提取液化学成分定性实验结果
检查项目 反应名称 正反应指标 现象 结论
氨基酸、多肽、蛋白质(冷水) 茚三酮反应 呈蓝色、紫色 产生沉淀,无明显颜色变化 -,不含氨基酸、多肽、蛋白质
双缩脲反应 呈橙黄色 产生絮状沉淀,无颜色变化
加热沉淀反应 产生浑浊或沉淀 无沉淀
糖、多糖、苷类 费林反应 砖红色沉淀 产生砖红色沉淀 +,可能含有糖类或苷类物质
α-萘酚试验 两界面处形成紫色环 两界面形成紫色环
皂苷 泡沫反应 产生大量持续泡沫,放 剧烈震荡产生泡沫,加热 +,可能含有皂苷成分
置或加热不减少 后泡沫明显减少
醋酐-浓硫酸反应 反应液颜色黄→红→ 颜色黄→红色 +,可能含有三萜类成分
紫→蓝→乌绿,可能有
甾体皂苷;颜色黄→红
色,可能有三萜皂苷
生物碱 碘化铋钾 呈橘红色沉淀 无沉淀 -,不含生物碱
碘化汞钾 浅黄色或白色沉淀 无沉淀
硅钨酸 浅黄色或灰白色沉淀 无沉淀
有机酸 PH实验 酸性 PH试纸显中性 -,不含有机酸
溴酚蓝实验 滤纸片,蓝色背景下 滤纸片无黄色斑点
呈黄色斑点
溴甲酚绿实验 滤纸片,蓝色背景下 无黄色斑点
呈黄色斑点
酚类及鞣质 三氯化铁反应 呈绿色、蓝绿色、墨 迅速变为墨绿色 +,含有酚类或鞣质化合物
绿色、蓝紫色
三氯化铁-铁氰 滤纸片、斑点呈蓝色 斑点呈蓝色
化钾反应
香草醛-盐酸实验 滤纸片、呈不同程度红色 斑点浅红色
膀胱炎、尿路结石、风湿骨痛、产后体虚、食欲不振等
疾病,是傣医传统经方“五淋化石胶囊”的主要组方
药材,同时也是目前傣医临床用量最大的一味药材[2]。
目前除了伍睿等[3]从中分离鉴定了5个化合物外,未
见其他化学成分的报道。鉴于倒心盾翅藤傣医临床
的广泛应用[4],以及在泌尿系结石等病症治疗方面的
良好开发前景,本单位前期开展了倒心盾翅藤的资
源调查、种子萌发实验、扦插繁殖、显微鉴别等研究。
本文对倒心盾翅藤提取物中的化学成分进行了系统
预实验,为后续药效物质的研究提供实验基础。
1 材料与仪器
1.1 材料 植物材料购自云南西双版纳州傣医院,
经本所张丽霞副研究员鉴定为傣药倒心盾翅藤(As-
pidopterys obcordata Hemsl. var. obcordata)的藤茎,
材料经过粗粉后,备用。
1.2 药品 95%乙醇、甲醇、石油醚(60-90 ℃)、氨
水、氢氧化钾、盐酸、氢氧化钠、硫酸、冰醋酸、醋酐、
氯仿、环己烷、二乙胺、正丁醇、醋酸、丁酮、乙酸乙
酯、己烷、苯、丙酮、甲苯、甲酸乙酯、吡啶等均为分析
纯。茚三酮试剂、双缩脲试剂、10%α-萘酚乙醇液、斐
林(Fehling)试剂、三氯化铁试剂、三氯化铁-铁氰化
钾试剂、香草醛-盐酸试剂、氯化钠-明胶试剂、溴酚
蓝试剂、溴甲酚绿试剂、碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、
碘化汞钾试剂、三氯化铝试剂、盐酸-镁粉试剂、醋酸
镁试剂、硼酸试剂、3,5-二硝基苯甲酸试液、碱性苦
味酸试剂、10%硫酸-乙醇试剂均自配。
1.3 仪器 广州旭朗机械设备有限公司HK-02A型
螺旋摇摆式小型粉碎机;梅特勒-托多利仪器(上海)
有限公司PL2002和PL203型电子天平;上海双捷仪
器设备有限公司DRHH-S4型数显恒温水浴锅;上海
安亭电子仪器厂ZF-2型三用紫外仪;华西医科大学
仪器厂0.3 mm毛细管;青岛海洋化工厂三色分离硅
胶板。
2 方 法[5-6]
2.1 水供试液的制备 称取倒心盾翅藤粗粉约5 g,
加入50 mL蒸馏水,冷浸提取,过夜,将提取液过滤约
20 mL,得到冷水浸出液,用于检查氨基酸、多肽和蛋
白质等成分。剩余冷水浸泡液和滤渣于60 ℃水浴温
浸0.5 h,过滤,得到热水提取液,用于检查糖、多糖、
有机酸、皂苷、苷类、酚类等成分。
2.2 乙醇供试液的制备 称取倒心盾翅藤粗粉约
10 g,加入95%乙醇100 mL,回流提取2 h,得到的滤
液用于检查黄酮、蒽醌、香豆素、萜类、甾体化合物、
强心苷、有机酸、酚类等成分。
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2.3 酸水供试液的制备 称取倒心盾翅藤粗粉2 g,
加入20 mL 0.5%的硫酸-乙醇溶液,回流提取30 min,
得到酸水提取液,用于生物碱的检测。
2.4 石油醚供试液的制备 称取倒心盾翅藤粗粉
1 g,加入石油醚(60-90 ℃)20 mL,浸泡过夜,过滤,
用于检查挥发油、油脂、萜类和甾体等成分。
2.5 乙醇提取液的分部萃取 将倒心盾翅藤乙醇
提取液浓缩至干后,加入适量蒸馏水混悬,分别用石
油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到的各
个极性部位用于定性和薄层检测。
3 结 果[5-6]
3.1 定性实验 分别对倒心盾翅藤的水提取液、乙
醇提取液、酸水提取液和石油醚提取液进行了化学
成分定性反应预实验。(见表1-3)
3.2 倒心盾翅藤薄层层析预实验 将倒心盾翅藤
的水提取液、醇提取液、酸水提取液按照预实验各种
成分薄层层析检测方法分别进行检测,仅对能够检
测到的部位和可能得成分进行汇总,其他未检测到
的成分在此不进行描述。(见图1,表4)
图1 倒心盾翅TLC图
实验结果显示:薄层检测结果与定性实验结果
一致,显示倒心盾翅藤中可能含有的成分为糖、苷类
表3 倒心盾翅藤石油醚提取液的定性反应结果
检查项目 反应名称 正反应指标 现象 结论
甾体及三萜 醋酐-浓硫酸反应 反应液颜色黄→红→紫→蓝→乌绿,可能有 颜色黄→红色 +,可能含有三萜皂苷
甾体皂苷;颜色黄→红色,可能有三萜皂苷
氯仿-浓硫酸 氯仿层,红色或青色;硫酸层,绿色荧光 无明显现象
挥发油及油脂 油斑试验 滤纸片油斑可挥发,挥发油;滤纸片油斑不 无油斑 -,不含挥发油或挥发油含量低
挥发,油脂
表2 倒心盾翅藤95%乙醇提取液化学成分定性实验结果
检查项目 反应名称 正反应指标 现象 结论
黄酮类 盐酸-镁粉 反应液或产生的泡沫显红→紫红色 加热不变红 -,不含或含量少
三氯化铝反应 滤纸片,斑点呈黄色,紫外黄色或黄绿色荧光 无反应
甾体及三萜 醋酐-浓硫酸反应 反应液颜色黄→红→紫→蓝→乌绿,可能有甾 颜色黄→红色 +,可能含有三萜皂苷
体皂苷;颜色黄→红色,可能有三萜皂苷
氯仿-浓硫酸 氯仿层,红色或青色;硫酸层,绿色荧光 无变化
生物碱(乙醇提取液、 碘化铋钾 呈橘红色沉淀 无红色沉淀 -,不含生物碱
酸水提取液) 碘化汞钾 浅黄色或白色沉淀 无白色沉淀
硅钨酸 浅黄色或灰白色沉淀 无灰白色沉淀
有机酸 PH实验 酸性 PH试纸不变色 -,不含有机酸
溴酚蓝实验 滤纸片,蓝色背景下呈黄色斑点 无黄色斑点
溴甲酚绿实验 滤纸片,蓝色背景下呈黄色斑点 无黄色斑点
酚类及鞣质 三氯化铁反应 呈绿色、蓝绿色、墨绿色、蓝紫色 迅速变墨绿色 +,含有酚类或鞣质类成分
三氯化铁-铁氰 滤纸片、斑点呈蓝色 蓝色斑点
化钾反应
香草醛-盐酸实验 滤纸片、呈不同程度红色 红色斑点
香豆素及内酯 荧光反应 滤纸片,蓝色荧光;喷1%KOH,荧 无反应 -,不含香豆素
光变为黄绿色
开闭环反应 加NAOH加热煮沸,液体清晰;加 无反应
入盐酸后液体浑浊
强心苷 Kedd反应 呈红色或紫色 不变色 -,不含强心苷
碱性苦味酸反应 呈橙色或红色 不变色
蒽醌类 醋酸镁反应 呈红色 溶液变红色 +,中可能含有蒽醌类成分
硼酸实验 滤纸片,橙黄色或红色斑点,紫外有荧光 滤纸片出现橙
黄色斑点
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化合物、酚类及鞣质、三萜类成分、蒽醌类化合物等
成分。
3.3 倒心盾翅藤不同极性部位薄层层析实验结果 将
盾翅藤乙醇提取物浓缩后,适量水悬浮,石油醚、二
氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,分别得到石油
醚部位(D1)、二氯甲烷部位(D2)、乙酸乙酯部位
(D3)、正丁醇部位(D4)和水部位。重量结果显示:正
丁醇部位>乙酸乙酯部位>二氯甲烷部位>石油醚部
位。以石油醚-丙酮系统和氯仿-甲醇系统作为展开
剂。(见图2)
表4 倒心盾翅藤提取液的薄层检测结果
序号 检测项目 展开剂 显色剂 现象 结论
A 乙醇提取物 酚类及鞣质 氯仿-丙酮9:1 紫外、1%FeCl3-EtOH 斑点紫外可见,显色呈黑绿色 可能含有酚类及鞣质
B 1热水提取物 糖类及苷类 氯仿-甲醇-水65:35:10 10%H2SO4-EtOH 斑点显色呈黑色 可能含有苷类化合物
2乙醇提取物
C乙醇提取物 蒽醌类化合物 石油醚-甲酸乙酯-甲酸 5%KOH-EtOH 呈现斑点 可能含有蒽醌类化合
115:5:1 物
展开剂:1-石油醚-丙酮9∶1 2-石油醚-丙酮8∶2 3-石油醚-丙酮7∶3 4-石油醚-丙酮6∶4 5-石油醚-丙酮5∶5
6-氯仿 7-氯仿-甲醇9∶1 8-氯仿-甲醇8∶2 9-氯仿-甲醇7∶3
显色剂:紫外(365 nm;254 nm);10%H2SO4-EtOH
图2 不同极性部位TLC图
倒心盾翅藤的不同极性展开剂的薄层检测结果
显示:石油醚部位薄层层析未检测到斑点;二氯甲烷
和乙酸乙酯部位的斑点紫外基本不可见,10%
H2SO4-EtOH显色后,为紫色点,且分离效果好,可能
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为萜类;正丁醇部位薄层检测斑点拖尾现象严重,且
原点处有未展开成分,为了更进一步了解倒心盾翅藤
的成分分布,对不同极性提取物进一步进行了酚类及
鞣质的实验研究[7]。
3.3.1 各极性部位的定性反应 将4个部位分别滴
加1%FeCl3-EtOH试剂,进行酚类和鞣质的定性反应,
结果显示:乙酸乙酯部位呈现淡绿色,正丁醇部位墨
绿色。根据实验结果,推测正丁醇部位可能富含具有
邻二酚羟基官能团的儿茶素类缩合鞣质。进一步以
氯化钠-明胶溶液进行正丁醇部位的沉淀反应,结果
出现白色沉淀,证实了倒心盾翅藤中含有鞣质成分
且富集于正丁醇部位。
3.3.2 正丁醇部位鞣质成分的薄层检测 展开剂:
苯-甲酸乙酯-甲酸(2∶7∶1,1∶7∶1,1∶5∶2)、正丁醇-乙
酸乙酯-水(5∶4∶1)、甲酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)作为
展开剂;层析板:硅胶GF254薄层板进行层析(青岛
海洋化工);结果:斑点呈现墨绿色,成点性不好,且
原点处依然有未展开成分,说明正相层析板不适合
于倒心盾翅藤鞣质成分的分离。(见图3)
展开剂:1-苯-甲酸乙酯-甲酸1∶5∶2
2-正丁醇-乙酸乙酯-水5∶4∶1
3-甲酸乙酯-甲酸-水8∶1∶1
显色剂:1%FeCl3-EOH作为显色剂
图3 正丁醇部鞣质成分TLC图
4 小 结
通过以上实验,验证了倒心盾翅藤中可能含有
糖、苷类化合物、酚类及鞣质、三萜类成分、蒽醌类化
合物,主要成分可能为鞣质和三萜类化合物。根据文
献报道,中药中的缩合鞣质具有抗氧化、抗肿瘤、抗
HIV、抗病毒、抑菌、抗炎抗过敏、解毒、增强肾功能
等多种药理活性[8];三萜类化合物具有抗炎、抗菌、抗
肿瘤、止痛、镇静等多种药理活性[9]。中医治疗泌尿系
结石多采取清热利湿、通石排淋的治疗原则,已有多
种中成药和中草药用于临床[10]。近代研究表明[9]:植
物药治疗泌尿系结石具有独特的疗效,植物药与钙
离子发生配位,降低尿石盐的过饱和度,抑制草酸钙
生长和形成,抑制晶体的生长和聚集,可以保护尿路
粘膜,防治晶体在身上皮细胞发生粘附,改变尿石形
成促进剂和抑制剂的排泄量。金钱草是临床上应用
最广泛的治疗泌尿系结石的中草药之一,化学成分
研究表明其中主要含有黄酮类、多糖、鞣质、三萜等
成分[10]。由此可以推测,倒心盾翅藤中用于治疗泌尿
系结石的有效物质可能是其中含有的鞣质和三萜类
化合物。本实验的研究为下一步实验奠定了一定的
基础,有助于阐明倒心盾翅藤临床应用的药效物质
基础。
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